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香烟烟雾水溶性提取物对肝细胞线粒体的损伤
目的 探讨香烟烟雾水溶性提取物(CSW)对L-02肝细胞线粒体结构与功能的影响.方法 采用噻唑蓝(MTT)检测CSW处理L-02肝细胞24 h后的生存率,以确定后续试验CSW染毒浓度为0、8×10-3、16×10-3、32×10-3、64×10-3支/ml培养基.CSW染毒处理L-02肝细胞24 h后用MTF法检测线粒体总酶活力抑制率,荧光分光光度法检测线粒体膜通透性转运孔(PTP)开放度与细胞线粒体膜电位(△ψm)的变化,透射电子显微镜观察细胞线粒体形态学变化.结果 8×10-3、16×10-3、32×10-3、64×10-3支/ml 4个不同浓度处理组CSW对L-02肝细胞具有一定的细胞毒性,其细胞生存率随CSW处理浓度的增高而降低,且二者呈明显负相关(相关系数r=-0.957);线粒体PTP开放程度则随CSW浓度的增高而增加,32 ×10-3支/ml及其以上CSW浓度组开放度与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);线粒体总酶活力与细胞线粒体膜电位(△ψm)随CSW浓度的增加而下降,二者分别在8×10-3、16×10-3支/ml及其以上CSW浓度组与对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).透射电子显微镜观察线粒体形态发生显著改变即表现为肿胀、空泡变性、膜和嵴破损.结论 香烟烟雾水溶性提取物可对L-02肝细胞线粒体的结构与功能造成一定程度损伤.
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BBP致锦鲤肝脏组织线粒体损伤的研究
目的 以锦鲤(Cyprinuscarprio)为试验动物,研究邻苯二甲酸丁基苄酯(BBP)诱导鱼类的肝脏毒性,探讨BBP对鱼类肝脏毒性的损伤机制.方法 通过急性毒性试验确定BBP实验暴露浓度(5.206、2.603和1.302 mg/L),染毒周期为28 d,解剖镜和光学显微镜下观察BBP所致肝组织的病理损伤.通过测定肝脏组织氧化损伤指标:超氧化物歧化酶(SOD)、脂质过氧化产物丙二醛(MDA)和抗氧化作用的物质谷胱甘肽(GSH),能量代谢指标:琥珀酸脱氢酶(SDH)、乳酸脱氢酶(LDH)和ATP酶(Ca2+-Mg2-ATPase和Na+-K+-ATPase)和线粒体跨膜电位(△Ψm)、线粒体通透性转换孔(PTP),对BBP诱导锦鲤肝组织线粒体损伤可能机制进行探讨.结果 随着暴露浓度的增加,MDA含量显著增加,SOD和GSH显著下降,SDH,ATPase活性下降,LDH活性升高,线粒体膜电位下降,PTP开放程度增大,P＜0.05,差异有统计学意义.结论 长期暴露于BBP可导致锦鲤的肝组织出现氧化应激,造成线粒体结构和功能发生改变.
关键词： 邻苯二甲酸丁基苄酯(BBP) 氧化损伤 能量代谢 线粒体损伤 肝损伤 -
2-01 铅对肾上腺皮质细胞线粒体的氧化损伤
目的研究铅对肾上腺皮质细胞氧化应激和线粒体功能的影响,为了解其肾上腺皮质毒作用机制提供依据.方法原代分离培养豚鼠肾上腺皮质细胞,以0、6.25、12.5、25、50、100 μmol/L醋酸铅(PbAc)处理细胞,观察PbAc诱导肾上腺皮质细胞活性氧(ROS)产生和线粒体损伤作用.ROS检测采用荧光分光光度法,线粒体膜电位(MMP)和细胞存活状态采用Rh123和PI双标记、流式细胞术检测,细胞ATP水平采用化学发光法测定.结果 PbAc染毒后肾上腺皮质细胞ROS形成水平随剂量增加而增加,具有剂量-效应关系[^y=4.16+10.21×1g(x+1),P＜0.01,R2=0.641];线粒体膜电位呈剂量依赖性降低,Rh123的平均荧光强度(MFI)在6.25～100μmol/L各剂量组依次为1.01、0.94、0.96、0.95和0.91,与对照组(1.35)比较,差异有显著性(P＜0.01);染毒后细胞死亡率轻度增加,与对照组(1.02%)比较,50μmol/L和100 μmol/L剂量组分别为3.16%和3.40%,差异有显著性(P＜0.05);ATP水平降低与PbAc剂量之间存在剂量-效应关系[^y=212 965.7-51 592.5×1g(x+1),P＜0.01,R2=0.568],剂量和时间对ATP水平的影响呈协同抑制作用(P＜0.01).结论线粒体氧化应激介导肾上腺皮质细胞毒性可能是PbAc毒作用机制之一,线粒体损伤是铅致肾上腺皮质毒作用的早期细胞和分子事件.
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量子点诱导细胞凋亡机制研究进展
量子点作为一种新型荧光标记物近年来已在生物学中得到广泛的应用;同时,量子点材料的大规模应用对人体健康可能产生不利的影响也引起了人们的普遍关注.本文概括了量子点引起细胞损伤的可能因素,重点阐述了量子点引起细胞凋亡可能的分子机制.在目前研究的基础上,对量子点安全性研究的发展方向进行了展望.
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脂质过氧化作用与线粒体损伤
脂质过氧化广泛存在于心肌细胞、神经细胞、肝细胞中,通过对膜脂、蛋白和DNA的损伤,引起细胞或细胞器结构、功能的改变.线粒体是细胞能量代谢重要的细胞器,在氧化磷酸化的过程中可产生一定量的自由基,但由于生物体内同时存在着抗氧化防御体系,在生理状态下二者维持动态平衡,从而保护线粒体不被损伤.如果这种平衡被破坏,线粒体就会因脂质过氧化作用而受到损伤.线粒体损伤可引起一系列的细胞功能障碍,线粒体功能改变与细胞凋亡有着密切的关系.对线粒体损伤与凋亡关系的研究,不仅揭示了凋亡信号传递过程中的一个重要机制,而且对阐明一些外源性化合物的毒性作用机制有着重要的意义.
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滋补脾阴方药对糖尿病认知功能障碍大鼠皮质线粒体功能障碍预防作用机制
目的：探讨滋补脾阴方药对糖尿病认知功能障碍大鼠皮质线粒体功能障碍的预防作用机制。方法：SD大鼠随机分为空白对照组（Con），糖尿病组（DM），滋补脾阴方药治疗组（ZBPYR1）和滋补脾阴方药预防组（ZBPYR2）。水迷宫测试大鼠学习记忆能力；透射电镜观察皮质线粒体超微结构、数量变化；Western Blot检测Cyto C表达。结果：①DM组较Con组学习记忆能力下降（P<0.05）；ZBPYR1组学习记忆能力较DM组改善（P<0.05），ZBPYR2组较DM组改善较为明显（P<0.01）。②DM组皮质线粒体数量较Con组减少（P<0.05），线粒体形态发生肿胀、变形、嵴走向紊乱、模糊甚至溶解；ZBPYR干预后上述结果得到改善，且ZBPYR2组较DM组线粒体数量增多（P<0.05）。③DM组胞浆中Cyto C较Con组增强（P<0.01）， ZBPYR干预后Cyto C表达减弱。结论：ZBPYR调节皮质区线粒体形态、数量的变化，阻止线粒体中Cyto C向胞浆中释放，提高糖尿病大鼠认知功能。
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绞股蓝总皂苷对四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化肝细胞凋亡的影响
目的:观察绞股蓝总皂苷对大鼠肝纤维化的作用及其肝细胞凋亡的影响,探讨其作用机制.方法:采用四氯化碳(CCl4)诱导的大鼠肝纤维化模型共造模9周.造模6周后绞股蓝总皂苷组给予200mg/kg鼠重的绞股蓝总皂苷灌胃,而正常组和模型组正常饮水对照灌胃,共3周.观察血清丙氨酸氨基氢移酶(ALT)活性和肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量,肝组织HE染色、天狼猩红染色、Tunel染色,以及免疫组化以及免疫组化α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)蛋白表达;肝组织α-SMA、ColⅠ、转化生长因子 β1 (TGF-β 1)、血小板源性生长因子β受体(PDGF-β R)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶7(caspase 7)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9(caspase 9)、Bax、Bak、Bcl-2 mRNA表达.结果:病理观察显示绞股蓝总皂苷有显著的抗损伤和抗肝纤维化作用,与模型组比较,绞股蓝总皂苷组的大鼠血清ALT、肝组织Hyp含量显著降低(P＜0.05),肝组织α-SMA、Col Ⅰ蛋白阳性表达及其mRNA表达显著低于模型组;Tunel染色显示绞股蓝总皂苷组凋亡的肝细胞数明显低于模型组,且TGF-β 1、PDGF-β R、caspase7、caspase9、Bax、BakmRNA表达较模型组显著降低(P＜0.01,P＜0.05),Bcl-2 mRNA表达显著升高(P＜0.01).结论:抑制线粒体通路介导的肝细胞凋亡是绞股蓝总皂苷抗肝纤维化的重要机制之一.
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论脾虚是乙肝病毒相关性肾炎的关键机转
本文试从中西医角度探讨脾虚是乙型肝炎病毒相关性肾炎的关键机转.在病理生理学上,线粒体损伤导致的能量代谢障碍及其引起的系列损伤与脾虚所致阴火内焚、脏腑不养导致的病症类似,故推及线粒体损伤属脾虚一端;而线粒体损伤可进一步加重乙型肝炎相关性肾炎的病毒复制,对肾脏造成损伤.由此,从西医角度可知,脾虚决定着乙型肝炎相关性肾炎发病中乙型肝炎病毒是否对肝功能造成损害及向下焦传变.中医方面,脾虚在该病的各期都具有重要意义,决定着病情转归及预后.因此提出脾虚为乙型肝炎病毒相关性肾炎的机转,以期为临床提供借鉴.
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黄芪注射液在逆转心肌细胞肥大过程中对心肌细胞线粒体结构和功能的影响
目的:通过大鼠原代心肌细胞培养,探讨心肌肥大过程中有关心肌细胞线粒体改变的病理和治疗问题.方法:分离和培养大鼠原代心肌细胞,并与血管紧张素Ⅱ( AngⅡ)共培养72,96 h.通过BCA法检测细胞总蛋白含量;倒置显微镜拍摄并测量细胞直径,反映心肌细胞增殖情况;通过荧光显微镜测量线粒体内膜膜电位(Δψm);酶标仪检测线粒体单胺氧化酶(MAO)活性;分光光度计检测线粒体细胞色素C氧化酶(COX)活性和线粒体外膜损伤百分率;高效液相色谱法检测心肌细胞内ATP,ADP,AMP含量,反映心肌细胞线粒结构和功能在与AngⅡ共培养中的损伤和能量代谢情况.在此基础上给予黄芪注射液和缬沙坦,观察它们对心肌细胞重构中线粒体结构、功能的药理作用.结果:在72,96 h2个时间点,模型组较空白组心肌细胞总蛋白含量和心细胞直径均显著性增加.在该增殖过程中,心肌细胞线粒体MAO活性和线粒体外膜损伤百分率均显著升高,线粒体COX活性和线粒体Δψm均显著减低,ATP,ADP含量减少,AMP含量增加.黄芪注射液和缬沙坦能抑制AngⅡ引起的心肌细胞蛋白质合成增加和细胞直径增大、改善线粒体外膜损伤和内膜膜电位及COX,MAO活性,增加ATP,ADP含量、降低AMP含量.结论:在心肌肥大过程中,存在线粒体的结构和功能的损害,心肌细胞能量代谢损伤变化是继心肌细胞线粒体结构损伤后发生的.黄芪注射液和缬沙坦在逆转血管紧张素Ⅱ所引起的心肌细胞肥大的过程中具有保护心肌细胞线粒体结构和功能的作用,逆转心肌细胞肥大、纠正心肌重构有利于心肌细胞能量的改善.
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亚硒酸钠诱导结直肠癌SW480细胞线粒体损伤及细胞凋亡
目的 研究亚硒酸钠诱导细胞凋亡的机制,为亚硒酸钠作为潜在的结直肠癌治疗药物提供依据.方法 把细胞分为对照组,亚硒酸钠组,用流式细胞术,共聚焦显微镜分别检测细胞内ROS水平变化,细胞凋亡情况,以及线粒体损伤,然后利用MnTMPyP抑制ROS水平,观察SW480变化情况.利用细胞亚组分Western blot检测细胞色素C释放.结果 亚硒酸钠在SW480细胞中诱导线粒体及细胞内ROS水平升高,造成线粒体损伤,引起细胞色素C释放,促进细胞凋亡(P＜0.05).而这一过程可以被超氧阴离子抑制剂MnTMPyP抑制.结论 亚硒酸钠通过氧化应激诱导结直肠癌SW480细胞线粒体损伤及细胞凋亡.
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TLR4对ox-LDL作用后的血管内皮细胞ROS及线粒体膜电位的影响
目的 探讨Toll样受体4(TLR4)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)作用后的血管内皮细胞活性氧(ROS)及线粒体膜电位的影响.方法 用qRT-PCR和Western blot分别测定ox-LDL作用后的血管内皮细胞中TLR4 mRNA和蛋白水平.在血管内皮细胞中转染TLR4小干扰RNA和小干扰RNA阴性对照,qRT-PCR和Western blot分别测定血管内皮细胞中TLR4 mRNA和蛋白水平.用ox-LDL作用转染以后的血管内皮细胞,流式细胞术测定细胞凋亡情况,荧光素酶基因报告系统测定三磷酸腺苷(ATP)含量,二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯(DCFH-DA)法测定ROS含量,JC-1法测定线粒体膜电位,Western blot测定细胞浆及线粒体中细胞色素C(Cytochrome C)蛋白水平.结果 ox-LDL作用后的血管内皮细胞中TLR4 mRNA和蛋白水平均明显高于未经处理的细胞(P<0.05).TLR4小干扰RNA转染以后的细胞中TLR4 mRNA和蛋白水平均明显低于未经转染的细胞(P<0.05),而转染小干扰RNA阴性对照后细胞中mR-NA和蛋白水平与未经转染的细胞相比没有明显变化(P>0.05).ox-LDL处理以后的细胞凋亡增多,细胞线粒体膜电位和ATP水平降低,细胞中ROS水平升高,线粒体中Cytochrome C蛋白减少,胞浆中Cytochrome C蛋白增多,与未经处理的细胞相比差异有统计学意义(P<0.05).下调TLR4后的血管内皮细胞经ox-LDL处理以后,细胞凋亡率降低,线粒体膜电位和ATP水平升高,细胞中ROS水平降低,线粒体中Cytochrome C蛋白增多,胞浆中Cytochrome C蛋白减少,与单纯ox-LDL处理的细胞相比,差异有统计学意义(P<0.05).结论 TLR4表达下调后可以提高ox-LDL处理后血管内皮细胞线粒体膜电位,促进细胞ATP合成,减少细胞中ROS的积累,减少线粒体中Cytochrome C蛋白的释放,减少线粒体损伤,减少细胞凋亡发生.
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阿尔茨海默病的线粒体损伤致病机制研究新进展
阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)是老年痴呆的常见类型,由德国神经病理学家Alois Alzheimer于1907年首次报道,其临床特征是进行性认知功能障碍及记忆力减退、行为与人格的改变.新资料调查显示.全球范围内约有3.5亿人发病,发病率在65岁以后几乎每5年增加1倍,每年每100 000人中约有1275例被确诊为AD[1].AD的主要组织病理学特征是大量神经元的丢失、老年斑沉积(主要指细胞外异常的B淀粉样蛋白)及细胞内过多磷酸化的tau蛋白组成的神经元纤维缠结[1].AD包括年龄相关的迟发型散发性AD及少数早发型家族性AD,家族性AD被认为主要与p淀粉样蛋白的前体(amyloid-β proteinprecursor,ABPP)及早老素1、早老素2的基因突变有关[1].
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脓毒症线粒体损伤研究进展
脓毒症（sepsis）是由病原微生物感染所致的全身炎性反应综合征，尽管目前对该疾病的病理生理有了进一步认识，其病死率仍居高不下，成为了重症医学的临床研究热点。大量研究表明严重脓毒症多器官功能障碍综合征（MODS）的发生与线粒体功能损伤关系密切。脓毒症时线粒体的损伤主要由线粒体内膜的损伤、线粒体钙超载、线粒体 DNA 的损伤等主要环节造成，本文就脓毒症线粒体损伤的机制、线粒体损伤后主要成分的改变及靶向治疗的研究进展进行阐述。
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急性胰腺炎腺泡细胞损伤机制的研究进展
急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)是临床常见急腹症,发病机制复杂,其中,胰腺腺泡细胞损伤、胰酶提前激活导致胰腺自身消化是胰腺炎的始发因素,因此,探讨腺泡细胞损伤机制对阐明AP发病机制具有重要意义.近年来研究认为,钙超载、内质网应激、线粒体损伤与胰腺腺泡细胞损伤关系密切,本文就其研究进展作一综述.
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谷氨酰胺对糖尿病心肌缺血再灌注中线粒体的保护性作用
目的：线粒体损伤是糖尿病心脏缺血再灌注损伤的机制之一。既往实验已经证实谷氨酰胺具有减轻氧化应激所导致的线粒体损伤。谷氨酰胺是否能在糖尿病心肌细胞缺血再灌注损伤中发挥保护线粒体的作用尚不可知。
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中药抗线粒体损伤保护肝细胞的研究进展
线粒体是肝细胞中重要的产能细胞器，肝细胞线粒体损伤与肝损伤及肝纤维化密切相关。近年来研究发现，中药可通过抗线粒体损伤发挥保护肝细胞的作用。本文就此方面研究进展加以综述。
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线粒体与心肌细胞凋亡的研究进展
心肌细胞凋亡(apoptosis)是心肌细胞的一种程序性死亡,它在心脏的发育及心力衰竭、原发性高血压、心律失常等许多心脏疾病的病理生理中起着重要作用.线粒体是细胞产生能量的细胞器,维持机体生命活动所需的能量,90%以上都是由它以三磷酸腺苷(ATP)形式产生.现在的研究证实,线粒体在介导细胞凋亡中起着重要作用.在心肌细胞中,线粒体约占心肌细胞总体积的45%.研究发现,在心肌细胞凋亡时,线粒体结构与功能发生明显改变,且与心肌细胞凋亡显著相关[1-3].本文主要综述线粒体在心肌细胞凋亡中的作用及其意义.一、线粒体损伤与心肌细胞凋亡细胞凋亡又称程序性细胞死亡,是细胞在自身基因调控下进行的一种主动死亡,具有独特的形态结构和生物化学特征,主要表现为:细胞核染色质固缩,凋亡小体出现,梯形脱氧核糖核酸(DNA)电泳图谱形成.研究证实,心肌细胞凋亡与原发性高血压、心肌缺血再灌注损伤、血管成形术后再狭窄、心律失常、心肌病和心肌炎、心力衰竭、动脉粥样硬化、动脉瘤等多种心血管疾病有关[4-6].
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外源性磷酸肌酸抗失血性休克兔心肌损伤作用的研究
目的 研究磷酸肌酸对失血性休克家兔心肌缺血再灌注损伤的保护作用.方法 新西兰大耳白兔20只,随机分为磷酸肌酸注射液治疗组(CP组)和生理盐水对照组(N组),各10只.制作家兔失血性休克模型,监测血流动力学指标(MAP);分别于休克前(T0)、休克60 min(T1)、复苏30 min(T2)、60 min(T3)、120 min(T4)5个时间点抽血检测心肌肌钙蛋白I(cTnI)和肌酸激酶(CK),实验终点取心脏组织观察其病理学及超微结构的改变,检测心肌线粒体Na+-K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶活性,并用TUNEL法检测心肌细胞的凋亡.结果 与N组比较,CP组心肌病理组织学改变程度较轻;CP组在复苏期各个时间点的CK值和cTnI值均明显减低(P＜0.05);CP组家兔心肌线粒体中的Na+-K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶活力均明显升高;CP组心肌TUNEL阳性细胞明显减少(P＜0.05).结论 磷酸肌酸具有抗失血性休克所致的心肌再灌注损伤作用.
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极化型心脏停搏液研究进展
现代心脏手术中常规应用高钾溶液使心脏停搏.高钾停搏液的代表是St.Thomas液.其中的高钾成分使心肌细胞膜去极化,跨膜电位降低,不能形成和传播动作电位,心脏处于舒张期停搏.但细胞膜的去极化会导致持续性Na+/Ca2+窗口电流离子交换,引起持续性能量消耗和Ca2+超载,致使线粒体损伤、细胞死亡,引发术后心功能不良和缺血再灌注损伤[1].理想的心脏停搏液应使心肌细胞的跨膜电位处于极化状态,从而关闭离子通道,达到避免离子失衡和继发损伤的目的.细胞膜去极化程度越小,心肌保护的效果就越好,再灌注损伤的的程度就越轻[2].
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NF-κB经典信号通路介导铁过载对沙鼠心肌细胞线粒体的损伤
目的 通过检测铁过载沙鼠心肌细胞内NF-κB经典信号通路关键物质的水平及电镜观察线粒体损伤程度,探索NF-κB经典信号通路是否介导了铁过载损伤心肌细胞线粒体的过程.方法 将24只蒙古沙鼠随机分为4组,分别为对照组(不进行任何干预)、溶剂对照组(腹腔注射生理盐水)、铁过载组(腹腔注射右旋糖酐铁16周)及铁过载+PDTC组(腹腔注射右旋糖酐铁,同时注射PDTC 16周).Western blot方法检测心肌细胞中NF-κB经典信号通路的关键物质IκB-α、p-IκB-α、胞浆p65及胞核p65的水平;电镜观察各组心肌细胞线粒体形态学改变并行Flameng评分.结果 (1)与其它3组比较,铁过载组p-IκB-α、胞浆p65水平降低,胞核p65水平明显增高,差异有显著性(P＜0.05);(2)铁过载组线粒体Flameng评分高于其它3组,差异有显著性(P＜0.05);铁过载+PDTC组线粒体Flameng评分高于对照组和溶剂对照组,但低于铁过载组,差异有显著性(P＜0.05).结论 铁过载能够激活沙鼠心肌细胞NF-κB经典信号通路,从而损伤心肌细胞线粒体.
