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绞股蓝总皂苷对糖尿病肾病大鼠足细胞损伤的影响及机制
目的:研究绞股蓝总皂苷对糖尿病肾病(DN)大鼠肾脏足细胞相关分子( nephrin)、血管通透因子(VEGF)mRNA表达的影响,探讨其降低尿蛋白、保护肾脏的机制.方法:采用单侧肾切除加链脲佐菌素( STZ)注射法改良复制DN模型,实验分为正常组、模型组、治疗组(绞股蓝总皂苷高、中、低剂量组)和缬沙坦组.干预4周后电镜观察肾小球超微结构改变,RT-PCR检测nephrin、VEGF mRNA表达.结果:各治疗组病理变化较模型组均有不同程度改善:足突增宽或部分融合,基底膜增厚减轻,同时nephrin mRNA表达水平较模型组明显上调(P＜0.01),VEGF表达明显抑制(P＜0.01),其中高剂量组和缬沙坦组效果类似,明显优于低剂量组(P＜0.01).结论:绞股蓝总皂苷可能通过上调足细胞相关分子nephrin表达,抑制分泌VEGF过表达,减轻足细胞超微结构改变,从而保护足细胞,降低尿蛋白,延缓肾小球硬化.
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绞股蓝总皂苷对四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化肝细胞凋亡的影响
目的:观察绞股蓝总皂苷对大鼠肝纤维化的作用及其肝细胞凋亡的影响,探讨其作用机制.方法:采用四氯化碳(CCl4)诱导的大鼠肝纤维化模型共造模9周.造模6周后绞股蓝总皂苷组给予200mg/kg鼠重的绞股蓝总皂苷灌胃,而正常组和模型组正常饮水对照灌胃,共3周.观察血清丙氨酸氨基氢移酶(ALT)活性和肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量,肝组织HE染色、天狼猩红染色、Tunel染色,以及免疫组化以及免疫组化α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)蛋白表达;肝组织α-SMA、ColⅠ、转化生长因子 β1 (TGF-β 1)、血小板源性生长因子β受体(PDGF-β R)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶7(caspase 7)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9(caspase 9)、Bax、Bak、Bcl-2 mRNA表达.结果:病理观察显示绞股蓝总皂苷有显著的抗损伤和抗肝纤维化作用,与模型组比较,绞股蓝总皂苷组的大鼠血清ALT、肝组织Hyp含量显著降低(P＜0.05),肝组织α-SMA、Col Ⅰ蛋白阳性表达及其mRNA表达显著低于模型组;Tunel染色显示绞股蓝总皂苷组凋亡的肝细胞数明显低于模型组,且TGF-β 1、PDGF-β R、caspase7、caspase9、Bax、BakmRNA表达较模型组显著降低(P＜0.01,P＜0.05),Bcl-2 mRNA表达显著升高(P＜0.01).结论:抑制线粒体通路介导的肝细胞凋亡是绞股蓝总皂苷抗肝纤维化的重要机制之一.
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绞股蓝总皂苷对糖尿病肾脏病大鼠巢蛋白的影响
目的:观察绞股蓝总皂苷对糖尿病肾脏病(DKD)大鼠巢蛋白的影响,探讨其降低蛋白尿、内生肌酐清除率、保护肾脏的机制.方法:150只雄性SD大鼠随机分为正常组,模型组,绞股蓝总皂苷高、中、低剂量组,采用摘除单侧肾脏加腹腔注射链脲佐菌素(STZ)法改良复制DKD模型,灌胃4、6、8周后测定血糖(GLU)、24h尿蛋白(24h-UP),内生肌酐清除率(Ccr)、尿微量白蛋白排泄率(UAER),光镜观察肾小球结构改变,Western Blot检测巢蛋白(nestin)、波形蛋白(vimentin)、cdk5/p35蛋白的表达.结果:①治疗8周,与模型组比较,绞股蓝总皂苷高剂量对GLU、24h-UP、Ccr、UAER均有不同程度的改善(P＜0.01,P＜0.05);绞股蓝总皂苷中剂量组对GLU、24h-UP、UAER较模型组均有不同程度的改善(P＜0.01,P＜0.05);绞股蓝总皂苷低剂量组对Ccr、24h-UP、UAER较模型组均有不同程度的改善(P＜0.01,P＜0.05).②与模型组比较,绞股蓝总皂苷高剂量组可显著升高nestin的表达(P＜0.01),绞股蓝总皂苷高、中剂量组可升高vimentin的表达(P＜0.05),各治疗组均可降低cdk5/p35的表达(P＜0.01,P＜0.05).③光镜观察各治疗组肾小球系膜细胞增生减轻,炎性细胞浸润改善.结论:绞股蓝总皂苷可能通过上调nestin达到保护足细胞,降低蛋白尿及提高Ccr,延缓DKD进程的目的.
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绞股蓝总皂苷提取工艺研究
目的 研究绞股蓝总皂苷的提取工艺.方法 采用正交试验设计法,以绞股蓝总皂苷提取量为考察指标,对影响绞股蓝总皂苷提取工艺的因素进行了优选.结果 提取时间、提取次数对提取效果有显著影响,乙醇用量的影响不显著.结论 绞股蓝总皂苷的佳提取工艺为:药材加8倍量70%的乙醇,回流提取3次,每次2 h.
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鞘磷脂-胆固醇为膜材的绞股蓝总皂苷脂质体的制备及其质量评价研究
目的:探讨用鞘磷脂与胆固醇制备绞股蓝总皂苷脂质体的可行性,并获得佳制备工艺与处方.方法:以鞘磷脂和胆固醇为膜材制备绞股蓝总皂苷脂质体;脂质体以鱼精蛋白沉淀法进行包封率的测定;以包封率为评定指标,筛选该新型绞股蓝总皂苷脂质体的佳制备方法;用正交设计优化该脂质体的制备工艺;用粒径、电位、AFM电镜表征该新型绞股蓝总皂苷脂质体.结果:用鞘磷脂和胆固醇制备绞股蓝总皂苷脂质体的佳制备方法为乙醇注入法,通过正交设计得佳工艺为绞股蓝总皂苷与鞘磷脂质量比为1∶10,鞘磷脂与胆固醇的比例4∶1,缓冲液pH 7.0,水化温度45℃,包封率79.06％,粒径191.4 nm,电位-33.16 mV,电镜下呈规则圆形.结论:用鞘磷脂与胆固醇制备绞股蓝总皂苷脂质体方法可行,采用佳工艺制备的绞股蓝总皂苷包封率高,形态和粒径均较好,重复性好.
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基于“伴随标志物”在线控制技术的绞股蓝总皂苷纯化工艺及成分鉴定研究
基于“伴随标志物”紫外在线检测技术以绞股蓝总皂苷(GPS)为目标,优化绞股蓝中GPS的纯化工艺,采用UPLC-QTOF-MS技术对GPS进行定性.“伴随标志物”紫外在线检测研究表明,上样终点为流出液吸光度为原药液的1/2时,洗脱终点为洗脱流出液吸光度基本稳定.UPLC-QTOF-MS鉴定出GPS提取物中的16个皂苷,其中新皂苷3个.该研究优选出的纯化工艺简单、检测方便、易于在线测定、实时记录,能较好的运用到大生产或生产的自动化中.质谱定性鉴定结果表明,基于“伴随标志物”紫外在线检测技术能很好地保留药材中的主要药效成分,为过程控制和质量溯源提供了分析工具.
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PEG修饰β-谷甾醇制备新型绞股蓝总皂苷长循环脂质体的研究
目的:探讨用聚乙二醇(PEG)修饰β-谷甾醇(PEG-Sito)制备新型绞股蓝总皂苷长循环脂质体的可行性.方法:以丁二酸酐为连接臂连接β-谷甾醇与PEG 2000合成PEG-Sito;以鞘磷脂和PEG-Sito为膜材采用乙醇注入法制备绞股蓝总皂苷长循环脂质体;脂质体以鱼精蛋白沉淀法进行包封率的测定;1H-NMR验证PEG-Sito的合成;粒径、电位、AFM电镜表征该新型绞股蓝总皂苷长循环脂质体.结果:1H-NMR证实了PEG-Sito的合成成功,采用乙醇注入法用PEG-Sito为材料制备长循环脂质体的包封率为74.3％,粒径288.1 nm,电位-20.25 mV,电镜下呈规则圆形.结论:用PEG-Sito为材料制备绞股蓝总皂苷长循环脂质体方法可行,绞股蓝总皂苷包封率高,形态和粒径均较好.
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绞股蓝总皂苷对糖尿病肾病大鼠肾皮质基因表达谱的影响研究
目的 探讨绞股蓝总皂苷对糖尿病肾病大鼠皮质基因表达谱的影响.方法 选取30只大鼠为实验样本, 制作20只DN模型后分为对照组和观察组,对照组为DN大鼠参考组,观察组DN大鼠则应用绞股蓝总皂苷进行治疗,对比两组DN大鼠肾皮质基因表达谱差异.结果 观察组大鼠与对照组大鼠肾皮质基因表达上存在差异, 差异基因132条,其中31条上调基因,133条下调基因.结论 绞股蓝总皂苷对糖尿病肾病大鼠皮质基因表达谱有明显影响,可改变其基因表达,改善其糖尿病症状和免疫机能.
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关键词：
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绞股蓝总皂苷对大鼠力竭运动后自由基代谢的影响
测定了力竭运动后大鼠全血谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Pxx)、超氧化物歧化酶(SOD)的活性及血清中丙二醛(MDA)含量,结果表明:服用绞股蓝总皂苷组大鼠力竭运动后,血清中MDA含量明显升高,全血中GSH-Px、SOD活性显著下降(与安静组比较均P＜0.01),提示服用绞股蓝总皂苷能明显改善自由基代谢状况.
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通络降脂胶囊质量标准的研究
目的 制定通络降脂胶囊的质量控制标准.方法 采用TLC法对通络降脂胶囊中的银杏叶提取物和绞股蓝总皂苷进行定性鉴别;采用HPLC法测定通络降脂胶囊中总黄酮醇苷的含量.结果 薄层色谱斑点显色清晰,分离良好.槲皮素、山柰素、异鼠李素进样量分别在77.88～ 1558、59.40～188、16.34～326.7 ng范围内呈良好的线性关系(n=6),平均加样回收率分别为98.3％、98.0％、96.0％,RSD分别为1.4％、1.6％、1.8％.结论 所建立的方法简便、准确、专属性强,可用于通络降脂胶囊的质量控制.
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绞股蓝的药理作用研究进展
绞股蓝为葫芦科多年生草本植物Gynostemma pentaphylla(Thunb.)Makino的根茎或全草,味甘、苦,性寒,有益气健脾、化痰止咳、清热解毒之功效.现代研究表明绞股蓝中含有皂苷、氨基酸、黄酮、糖和多种无机元素等,其中皂苷有80多种,6种与人参皂苷相似,绞股蓝的提取物具有抗疲劳、抗缺氧、免疫调节、降血脂、降血糖、保肝、抗溃疡等作用.本文对其药理作用作一综述,为进一步开发研究提供依据.
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绞股蓝总皂苷对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用
目的观察绞股蓝总皂苷对大鼠急性局灶性脑缺血再灌损伤NO的保护作用.方法采用大脑中动脉内栓线阻断法(MCAO)造成大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,测定脑亚细胞器内NO含量的变化并观察病理组织学变化.结果脑缺血再灌注后脑亚细胞器内NO含量显著升高,海马CA1区存活的锥体细胞数显著降低.绞股蓝总皂苷能显著降低脑亚细胞器内NO含量,升高海马CA1区存活的锥体细胞数.结论绞股蓝总皂苷通过降低NO的毒性,发挥保护脑组织,减轻缺血再灌注损伤.
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绞股蓝总皂苷对口腔鳞状癌细胞增殖和凋亡的影响
目的 探究绞股蓝总皂苷(Gyp)对口腔鳞状细胞癌细胞系SCC9增殖和凋亡的影响,并初步探讨相关机制.方法 用不同浓度Gyp(70、85、100 μg/ml)培养SCC9细胞系,未用Gyp处理作为对照组(Ctrl组),MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;荧光定量实时PCR和蛋白免疫印迹检测细胞中Notch1和Jagged1 mRNA和蛋白表达.结果 Gyp浓度分别为70、85、100 μg/ml时,SCC细胞增殖率分别为62.15±8.13、50.08±7.14、24.83±5.63,均显著低于Ctrl组(P＜0.05);细胞凋亡率分别为23.54±2.17、37.01±3.62、60.03±7.85,均显著高于Ctrl组(P＜0.05);Notch1 mRNA表达分别为2.24 ±0.17、2.46±0.23、2.97±0.31,蛋白表达分别为0.98±0.08、1.26±0.09、1.71±0.13,均显著高于Ctrl组(P＜0.05);Jagged1 mRNA表达分别为0.94±0.11、0.51±0.09、0.26±0.06,蛋白表达分别为1.43 ±0.15、0.73±0.08、0.24±0.06,均显著低于Ctrl组(P ＜0.05);SCC9细胞荧光强度分别为65.69±11.32、113.12±15.94、163.32±19.48,均显著高于Ctrl组(P＜0.05).结论 Gyp以剂量依赖的方式抑制OSCC细胞系SCC9的增殖并诱导其凋亡,其中Notch信号通路活化在这一过程中起重要作用.
关键词： 绞股蓝总皂苷 口腔鳞状细胞癌细胞系SCC9 增殖 凋亡 Notch信号通路 -
绞股蓝总皂苷的大鼠在体肠吸收动力学研究
目的 研究绞股蓝总皂苷在大鼠各肠段的吸收动力学特征,为制剂设计提供理论依据.方法 采用大鼠在体肠吸收模型和紫外分光光度法研究药物在大鼠各肠段的吸收特性.结果 绞股蓝总皂苷在0.17~0.37mg/mL 范围内对小肠吸收速率常数Ka 无显著性影响;十二指肠、空肠、回肠、结肠各肠段的吸收速率常数Ka 无显著性差异.结论 绞股蓝总皂苷在大鼠肠道的吸收呈一级动力学过程,为被动扩散,吸收窗较广,可开发成缓释制剂.
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绞股蓝总皂苷脂质体的制备与表征
目的 探讨用豆甾醇替代胆固醇制备绞股蓝总皂苷脂质体的可行性,并获得佳制备工艺与处方.方法 以卵磷脂和豆甾醇为膜材制备不含胆固醇的绞股蓝总皂苷脂质体；脂质体以鱼精蛋白沉淀法进行包封率的测定；以包封率为评定指标,筛选该新型绞股蓝总皂苷脂质体的佳制备方法;采用正交设计优化该脂质体的制备工艺；采用粒径、Zeta电位、原子力显微镜(AFM)表征该新型绞股蓝总皂苷脂质体.结果 用豆甾醇替代胆固醇制备绞股蓝总皂苷脂质体的佳制备方法为乙醇注入法,通过正交设计得佳工艺为绞股蓝总皂苷与卵磷脂的质量比为1∶10,卵磷脂与豆甾醇的质量比为4∶1,PBS缓冲溶液pH值为7.0,水化温度为35℃；所得脂质体的包封率为(77.00±1.17)％,粒径为(202.6±3.9)nm,多分散系数(PDI)为0.108±0.003,电位为(-28.66±0.86)mV,该脂质体在电镜下呈规则圆形.结论 用豆甾醇替代胆固醇制备绞股蓝总皂苷脂质体方法可行,采用佳工艺制备的绞股蓝总皂苷包封率高,形态和粒径均较好,重现性好.
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绞股蓝总皂苷的闪式提取和纯化工艺研究
目的 比较并优选绞股蓝总皂苷的粗提和精制工艺.方法 以绞股蓝总皂苷为测定指标,采用分光光度法测定,比较不同的提取方法所得绞股蓝总皂苷,并考察6种不同型号的树脂对绞股蓝总皂苷的静态和动态的吸附及解吸性能的比较.结果 闪式提取和乙醇回流提取所得绞股蓝总皂苷分别为32.69%、31.19%;HPD-700型树脂对绞股蓝总电苷的吸附量与解吸率均较高,洗脱率达到80.34%.结论 采用闪式提取和选择HPD-700树脂纯化是可行的绞股蓝总皂苷粗提及精制工艺.
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绞股蓝总苷对全脑缺血再灌注大鼠海马及齿状回的保护作用
目的观察绞股蓝总皂苷(GP)对全脑缺血再灌注大鼠海马及齿状回DNA和RNA的保护作用.方法采用4-血管阻断(4-VO)方法建立大鼠急性全脑缺血模型,用吖啶橙染色法进行GP对全脑缺血再灌注大鼠海马及齿状回的DNA和RNA保护作用的研究.结果与正常对照组比较,全脑缺血再灌注大鼠海马及齿状回DNA和RNA吖啶橙染色后的荧光强度(反映DNA和RNA含量)明显减弱,GP 100 mg/kg ig给药组海马及齿状回DNA和RNA吖啶橙染色后的荧光强度强于全脑缺血再灌注模型组,与正常对照组相似.结论 GP可明显减轻缺血再灌注对大鼠海马及齿状回DNA和RNA损伤.
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绞股蓝总皂苷对血管性痴呆大鼠大脑皮层及海马的影响
目的观察绞股蓝总皂苷(GP)对血管性痴呆大鼠大脑皮层及海马的DNA和RNA的影响.方法采用改良的Pulsinelli 4-血管阻断(4-VO)方法建立大鼠血管性痴呆模型,用吖啶橙染色法进行GP对血管性痴呆大鼠大脑皮层及海马的DNA和RNA保护作用的研究.结果与正常对照组比较,血管性痴呆大鼠大脑皮层及海马的DNA和RNA吖啶橙染色后的荧光强度(反映DNA和RNA含量)明显减弱,GP 200 mg/kg ig给药组大脑皮层及海马的DNA和RNA吖啶橙染色后的荧光强度强于血管性痴呆模型组,与正常对照组相似.结论GP可明显减轻血管性痴呆大鼠大脑皮层及海马的DNA和RNA损伤.
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绞股蓝总皂苷对血管性痴呆大鼠海马一氧化氮合酶及核酸的保护作用
目的观察绞股蓝总皂苷(GP)对血管性痴呆(VD)大鼠海马神经元型一氧化氮合酶(nNOS)及核酸的保护作用.方法采用改良的Pulsinelli 4-血管阻断(4-VO)方法建立大鼠VD模型,用免疫组化法研究GP对大鼠海马nNOS的表达的影响,并用吖啶橙染色法进行GP对VD大鼠海马的DNA和RNA保护作用的研究.结果与正常对照组比较,VD大鼠海马CA1区和CA3区nNOS阳性神经元数目明显减少,而DNA和RNA吖啶橙染色后的荧光强度(反映DNA和RNA含量)明显减弱,GP 200 mg/kg ig给药组海马各亚区的nNOS阳性神经元神经细胞数比VD模型组明显增多.DNA和RNA吖啶橙染色后的荧光强度强于VD模型组,与正常对照组相似.结论GP可明显增强VD大鼠海马nNOS阳性神经元的表达,并对DNA和RNA有保护作用.
