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CA916798基因通过PI3K/AKT/mTOR通路参与顺铂耐药的机制分析
目的 观察阻断PI3K/AKT/mTOR通路对人肺腺癌细胞A549及多药耐药人肺腺癌细胞A549/CDDP内CA916798基因mRNA表达的影响.方法 以雷帕霉素、LY294002分别作用于人肺腺癌细胞A549和多药耐药人肺腺癌细胞A549/CDDP,检测顺铂作用后细胞生长及增殖情况,RT-PCR检测CA916798基因mRNA表达水平.结果 以雷帕霉素和LY294002分别阻断A549、A549/CDDP细胞的PI3K/AKT/mTOR通路后,细胞对于顺铂的耐药性均显著下降(P＜0.05),CA916798基因的表达均显著下调(P＜0.05).结论 CA916798基因位于PI3K/AKT/mTOR通路下游,可能是CA916798诱导肺癌顺铂耐药的机制之一.
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肺癌耐药相关基因CA916798核心启动子区域的初步鉴定
目的 对肺癌耐药相关基因CA916798的核心启动子区域进行初步鉴定.方法 采用PCR方法对CA916798基因上游不同长度的序列片段0H ～9H进行扩增,以pGL3-basic载体构建基因报告质粒,转染COS7细胞,荧光素酶检测序列启动活性,酶切鉴定、测序及数据库比对确定核心启动子的可能存在位置,并采用生物信息学方法对核心启动子区域结合位点进行预测.结果 成功构建了启动子荧光素酶报告基因;活性实验表明;9H组与阴性对照组比较,相对荧光强度差异具有统计学意义(P＜0.05);0H～ 8H各组与9H组比较,相对荧光强度差异均具有统计学意义(P＜0.05);9H片段为处于CA916798基因片段上游179 bp处,长度为568 bp的序列区;功能预测显示该区存在多种细胞因子的结合位点.结论 9H序列区域具有较强的启动活性,为基因CA916798的核心启动子序列区域.
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CA916798基因通过PI3K/AKT通路参与肺癌顺铂耐药
目的 在前期体外研究的基础上,建立裸鼠移植瘤模型,观察阻断PI3K/AKT通路对肺腺癌细胞A549及多药耐药肺腺癌细胞A549/CDDP内CA916798基因mRNA表达的影响.方法 建立A549、A549/CDDP裸鼠移植瘤模型,以LY294002作用A549组和A549/CDDP组后,比较各组移植瘤生长情况,HE染色观察组织结构变化,实时荧光定量PCR检测肿瘤细胞中CA916798基因mRNA的表达水平.结果 成功建立裸鼠移植瘤模型,以LY294002分别阻断A549、A549/CDDP组裸鼠移植瘤细胞的PI3K/AKT通路后,移植瘤体积明显缩小,CA916798基因的表达明显下调(P＜0.05).结论 抑制PI3K/AKT通路能够明显抑制肺腺癌细胞A549及A549/CDDP的恶性增殖.
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RNA干扰CA916798基因真核表达载体的构建与鉴定
目的 构建CA916798基因RNA干扰(RNAi)的真核细胞表达载体.方法 以CA916798为靶基因,以pGenSil-l质粒为载体,设计构建重组体,根据GenBank数据库提供的CA916798基因核苷酸序列,按照Tuschl设计原则,选择设计2条带发夹结构的核苷酸序列,克隆到空载体pGenSil-l中,转化DH5α菌株,提取质粒,进行限制性内切酶酶切鉴定和测序分析.用脂质体2 000将重组质粒转染A549/CDDP细胞并用G418筛选,MTT法测定药物敏感性并绘制细胞增殖曲线.结果 构建针对CA916798的pRNAi-CA916798shRNA,经限制性内切酶酶切、PCR和DNA测序证实与设计完全一致;在荧光显微镜下观察到A549/CDDP细胞表达绿色荧光蛋白(GFP)证实重组质粒已转染入细胞并用G418剔除了未转染质粒的细胞,1.0μg/ml顺铂作用后pRNAi-CA916798shRNA转染组细胞增殖受到明显抑制(P＜0.01).结论 成功构建CA916798基因的shRNA表达载体,并筛选出转染了CA916798shRNA的A549/CDDP细胞.
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CA916798基因在肺癌患者化疗前后肿瘤组织中的表达及其临床意义
目的 研究耐药基因CA916798在肺癌患者化疗前后肿瘤组织中的表达及意义.方法 收集2016年3-12月在我院行纤支镜活检、病理确诊的肺癌患者17例,采用实时定量PCR (qRT-PCR)以及免疫组化的方法分析肺癌组织中CA916798基因mRNA及蛋白在化疗前后的表达.结果 17例肺癌患者经过2个周期规范的前期化疗后,10例患者临床有效(病灶完全缓解或部分缓解),总体有效率为58.82％.化疗无效组CA916798基因mRNA表达显著高于化疗有效组(P＜0.05);前期化疗前,化疗无效组和化疗有效组CA916798蛋白表达阳性率差异无统计学意义;前期化疗后,化疗无效组CA916798蛋白表达阳性率显著高于化疗有效组(P＜0.05).前期化疗后病灶稳定的患者中,再次化疗无效者,其CA916798基因表达在前期化疗后显著上调(P＜0.05).结论 肺癌患者肿瘤组织中CA916798基因的表达变化与化疗效果相关,可能成为预测肺癌化疗敏感性的新的参考指标.
