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鳖甲煎丸对肝细胞癌中Wnt/β-catenin信号通路及抑制基因DKK-1、FrpHe表达的影响
目的 通过研究鳖甲煎丸对肝细胞癌中Wnt信号通路及抑制基因DKK-1、FrpHe表达的影响,探讨其抗肝细胞癌转移侵袭的作用机制与Wnt/β-catenin信号通路的关系.方法 24只Wistar大鼠随机分为3组(8只/组),分别以临床剂量的20倍、10倍的鳖甲煎丸和生理盐水灌胃3d,3d后采血,离心,获取血清.分别将3组血清加入DMEM培养液中培养肝癌细胞HepG2,48h后采用流式细胞术检测细胞中的β-catenin蛋白含量,qRT-PCR法检测DKK-1、FrpHe基因的表达情况,以进一步阐明药物的作用机制与Wnt/β-catenin信号通路的关系.结果 流式细胞术结果:高剂量组和中剂量组含药血清均可显著降低细胞中β-catenin蛋白表达,且该作用与药物浓度有关.RT-PCR结果:高剂量组和中剂量组含药血清均可显著下调DKK-1基因的表达,且该作用与药物浓度有关.而高剂量组和中剂量组含药血清对FrpHe基因的表达影响不明显.结论 鳖甲煎丸能显著抑制肝细胞癌的生长、粘附和转移,且这种抑制作用与显著降低肝癌细胞中β-catenin蛋白表达、显著下调DKK-1基因的表达,从而阻断Wnt/β-catenin信号通路有关.
关键词： 原发性肝癌 鳖甲煎丸 Wnt/β-catenin DKK-1 FrpHe -
化疗药顺铂对Wnt通路抑制因子的表达作用
目的 研究抗肿瘤药顺铂(cisplatin,Pt)对Wnt通路抑制因子FrpHE(frizzled relatd protein)和 DKK-1(dickkopf-1)表达的调节作用.方法 培养人肝癌HepG2、Hep3B、人大肠癌Lovo和人神经胶质瘤U251细胞,并分别加入5 μmol/L Pt作用24 h,以RT PCR技术检测FrpHE和DKK-1mRNA,以流式细胞术检测肿瘤细胞中Wnt通路的关键调节因子β-catenin的表达.结果 顺铂作用24 h后,FrpHE mRNA表达水平在人肝癌细胞较对照组表达水平显著增加(P<0.001).在人大肠癌细胞和人神经胶质瘤细胞中,未见FrpHE mRNA表达.DKK 1mRNA表达水平在加入Pt作用后的人肝癌细胞、人大肠癌细胞和人神经胶质瘤细胞均较对照组表达水平显著增加.β-catenin的阳性细胞百分比和平均荧光强度与对照组相比均降低(P<0.001).结论 化疗药顺铂能够诱导肝癌细胞FrpHE mRNA和人肝癌、肠癌、神经胶质瘤细胞DKK-1 mRNA的表达,抑制Wnt通路.
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抗肿瘤药羟喜树碱对Wnt通路抑制剂FrpHE的表达作用
目的研究加入羟喜树碱后Wnt通路抑制因子FrpHE(frizzled relatd protein)在人肿瘤细胞株中的表达调控作用.方法选择人肝癌HepG2(HepG2, 含野生型p53;Hep3B,p53缺失)和人大肠癌(Lovo, 含野生型p53),人神经胶质瘤细胞(U251, p53突变)细胞株为模型,观察抑制剂FrpHE以及反映Wnt通路功能变化的β-catenin的表达.以RT-PCR技术检测Wnt通路抑制因子FrpHE表达的调节作用,以流式细胞术检测肿瘤细胞中Wnt通路的关键调节因子β-catenin的表达.结果加入羟喜树碱24h后FrpHE mRNA表达水平在人肝癌细胞(HepG2,含野生型p53;Hep3B,p53缺失)中与对照组相比表达水平显著增加.在人大肠癌细胞(Lovo,含野生型p53)和人神经胶质瘤细胞(U251,p53突变型)中,未见FrpHE mRNA表达.β-catenin的阳性细胞百分比强度和平均荧光量强度与对照组相比,表达水平降低.结论羟喜树碱在人肝癌细胞中能明显诱导抑制剂FrpHE mRNA的表达.
