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MASP2在小儿上呼吸道感染中的意义
目的：探讨血浆甘露聚糖结合凝集素（MBL）相关丝氨酸蛋白酶2（MASP2）水平在儿童上呼吸道感染（上感）中的意义。方法取103例上感患儿和35例健康体检儿童作为研究对象，测定其血浆MASP2和C反应蛋白（CRP）浓度并进行白细胞计数（WBC）。根据CRP和WBC值、感染不同时期及有无治疗，上感儿童分为CRP升高组（n=48）与正常组（n=54）、WBC升高组（n=61）与正常组（n=40）、感染早期未用药组（n=68）与感染中后期已用药组（n=35），对各组资料进行统计学分析。结果上感组MASP2浓度显著高于对照组（P<0.001），CRP升高组血浆MASP2浓度与CRP值正相关（r=0.310，P<0.05），WBC升高组MASP2水平与WBC值显著正相关（r=0.392，P<0.01），感染早期未用药组MASP2浓度显著高于感染中后期已用药组（P<0.01）， MASP2、CRP、MBL2基因具有共同的转录因子HNF-4α结合位点。结论 MASP2蛋白可能为急性期蛋白，血浆MASP2水平可作为辅助诊断小儿上感的一个参考指标。
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人甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2 N端片段的原核表达
目的 在大肠杆菌中表达人甘露聚糖结合凝集素(MBL)相关丝氨酸蛋白酶2(MASP2)N端片段.方法 应用PCR技术从含人MASP2 cDNA的质粒pGEM-MASP2中扩增MASP2-N端基因片段,将其克隆至pGEX4T-1原核表达载体,转化BL21(DE3)感受态菌诱导表达MASP2-N端蛋白,通过GSTrap亲合层析柱纯化目的蛋白,以SDS-PAGE和Western blot进行鉴定,并以ELISA分析了目的蛋白与MBL-CLR结合的活性.结果 从pGEM-MASP2中扩增得到约840 bp的基因片段,构建成重组载体经酶切出现约4 900 bp和840 bp片段,测序结果与预期的完全一致.纯化蛋白经SDS-PAGE可见Mr 60 000蛋白带,该蛋白可与抗GST抗体反应并能与重组人MBL-CLR蛋白结合.结论 获得了表达人MASP2 N端片段的大肠杆菌菌株和重组人MASP2N端片段/GST融合蛋白,为MASP2分子的进一步研究提供了条件.
关键词： 甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2 N端片段 原核表达 -
甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2 EGF片段多克隆抗体的制备及鉴定
目的 制备甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2(MBL-associated serine protease-2,MASP-2)EGF功能区蛋白的多克隆抗体并进行鉴定,为后续研究奠定基础.方法 利用带有EGF基因片段的pGEX-6P-2原核载体诱导表达GST-EGF融合蛋白,并采用商品化GST-Beads进行纯化;将纯化的融合蛋白作为抗原,与弗氏完全佐剂充分混合后,免疫5周龄BALB/c雌性健康小鼠,制备多克隆抗体;利用琼脂双扩散法检测多克隆抗体的效价,并进一步应用Western blot鉴定多克隆抗体的特异性及效价.结果 成功表达并纯化EGF蛋白,以此成功制备出特异性强的GST-EGF融合蛋白的多克隆抗体,与其他蛋白无交叉反应;琼脂双扩散法检测的EGF抗体效价为1∶8;Western blot检测的EGF抗体效价大于1∶2 000.结论 成功制备出具有特异性强且效价高的GST-EGF蛋白的多克隆抗体.
