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表面增强激光解析电离光谱技术分析人卵泡发育过程中蛋白质组学变化
目的 应用蛋白质芯片和质谱技术,建立人成熟卵泡液及窦卵泡液的蛋白质表达指纹图谱,寻找在卵泡生长发育过程中起关键作用的蛋白质.方法 采用表面增强激光解析电离飞行时间质谱技术和弱阳离子交换蛋白质芯片检测48例人成熟卵泡液、21例窦卵泡液中的蛋白质变化,使用PBSⅡ-C型蛋白质芯片阅读机读取数据,获得的结果采用Ciphergen公司的Biomarkcr wizard和Biomarkcr Patterns System软件进行分析.结果 成熟卵泡液组与窦卵泡液组蛋白质谱相比,有4种蛋白质在含量上有显著差异,2种蛋白质在成熟卵泡液组表达上调,2种蛋白质表达下降.结论 成熟卵泡液与窦卵泡液蛋白质谱存在显著差异,差异蛋白可能与卵泡发育、卵子受精密切相关.
关键词： 表面增强激光解吸附离子化时间飞行质谱 蛋白质芯片 人卵泡液 -
人羊膜上皮细胞向卵泡样结构转分化的实验研究
目的 研究人羊膜上皮细胞(human amniotic epithelial cells,hAECs)在人卵泡液的长时间刺激下能否转分化为卵泡样结构.方法 在前期实验结果基础上,体外分离培养hAECs,5％人卵泡液为诱导条件,延长诱导时间至44 d,倒置显微镜观察细胞形态学改变,化学发光免疫技术检测培养基上清液中雌激素(estradiol,E2)水平的变化,实时荧光定量-聚合酶链式反应(real time-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测雌性生殖细胞特异性基因(GDF9、DAZL、SCP3)表达情况.结果 诱导组(添加有5％卵泡液的培养基)在培养第10天出现卵母细胞样细胞(OLCs),随着时间延长,OLCs体积增大,周围见透明带样环变,随后减小,部分消失;对照组无上述现象.诱导组DAZL及GDF9的mRNA表达水平较对照组升高(P＜0.05),并且具有两个高峰;诱导组SCP3 mRNA表达水平与对照组之间的差异无统计学意义(P＞0.05).诱导组有E2生成,其水平随时间先下降后升高再下降;对照组无E2生成.结论 在体外,hAECs具有向卵泡样结构转分化的潜能.
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体外诱导羊膜上皮细胞转分化为雌性生殖细胞的初步实验研究
目的 建立体外分离、培养人羊膜上皮细胞(hAECs)的方法,研究其向雌性生殖细胞转分化的潜能.方法 体外分离、培养并鉴定hAECs后,采用添加5％人卵泡液的培养基作为诱导剂,倒置显微镜下观察细胞形态的改变,化学发光免疫技术检测培养基中雌二醇(E2)含量的变化,应用实时荧光定量PCR(RT-PCR)、Western blot等方法检测雌性生殖细胞相关基因及蛋白表达水平的变化.结果 体外培养hAECs呈多角形,具有上皮细胞特有的铺路石样外观,并表达其特异性细胞角蛋白19(CK19),同时能表达胚胎干细胞(ESC)特异的转录因子POU5f1转录因子4(Oct-4).采用添加5％人卵泡液的培养基诱导14d后,对照组大部分细胞仍保持上皮细胞的多角形态,而诱导组细胞融合呈集落样生长.E2含量检测结果显示,对照组无E2生成,而诱导组E2水平从第8d开始增加,至第10d达到高峰,然后下降.RT-PCR、Western blot结果表明,诱导组生殖细胞特异性基因生长分化因子9(GDF9)、无精症缺失基因(DAZL)的mRNA表达水平明显升高(P＜0.05),而联会复合体蛋白3(SCP3)的mRNA表达水平无明显升高(P＞0.05),DAZL的蛋白表达水平亦明显增加(P＜0.05).结论 人卵泡液可在体外诱导hAECs向雌性生殖细胞方向转分化.
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载脂蛋白B作为预测体外受精-胚胎移植技术新生儿结局的临床研究
目的 研究分析卵泡液(FF)样本成分载脂蛋白B(APOB)浓度和体外受精联合胚胎移植技术(IVF-ET)或卵胞浆内单精子显微注射技术(ICSI)的关系.方法 选取61例接受IVF-ET或ICSI的患者,分析体外受精的颗粒细胞中滤泡液的APOB浓度和APOB基因和蛋白质表达的相关性.运用四分位数模型对FF中发现的APOB水平的量进行统计分析.结果 FF样品中检测到APOB的量[平均值:(244.6G185.9) ng/m1].当FF中的APOB>112ng/m1 [即包括在四分位数Q2、Q3和Q4]时,获得卵母细胞和受精卵母细胞的概率显著增加(P<0.001).如果APOB水平在112~330ng/m1(即在Q2和Q3)或112~230ng/m1(即在Q2中)时,第2天获得胚胎和优质胚胎的概率显著升高(P=0.047).结论 APOB与卵母细胞恢复、卵母细胞受精和胚胎质量之间具有较强的相关性,当进行体外受精时,APOB可作为预后生物标志物.
