首页 > 文献资料
-
羊膜对人脐血干细胞分化为多巴胺能神经元的作用
目的 探讨羊膜上皮细胞对人脐血干细胞定向分化为多巴胺能神经元的作用.方法 体外分离、原代培养人羊膜上皮细胞,通过高速离心制备成条件培养液(CM)对P1代脐血十细胞进行诱导,倒置相差显微镜观察细胞形念的变化,应用免疫荧光染色和免疫印迹法检测其酪氨酸羟化酶(TH)及多巴胺转运体(DAT)蛋白的表达情况.结果 P1代脐血干细胞经羊膜上皮细胞条件培养液诱导后,TH及DAT阳性细胞率明显高于对照组,与对照组比较有显著性差异(P<0.01),免疫印迹分析结果 与免疫荧光染色结果 一致.结论 羊膜上皮细胞能诱导人脐血问充质干细胞定向分化为多巴胺能神经元.
-
两种人羊膜细胞的表型鉴定和分化潜能测定
本研究旨在分离、培养和表型鉴定两种人羊膜细胞并分析其多向分化潜能.羊膜中可分离出来源于外胚层的羊膜上皮细胞和来源于中胚层的羊膜间充质细胞.用流式细胞术和免疫荧光法对其进行表型鉴定,同时用免疫荧光法分析其多向分化潜能.结果表明:两种人羊膜细胞阳性表达HLA-A,B,C和间充质干细胞的标志( CD29,CD73,CD44,CD59,CD90,CD105,CH166),不表达造血干细胞的标志(CD31,CD34,CD45,HLA-DR),弱表达协同刺激分子( CD40,CD40L,CD80,CD86),且这些表型的表达量在第3-7代都维持稳定.免疫荧光法显示羊膜上皮细胞表达角蛋白19,不表达波形蛋白,而羊膜间充质细胞则相反.对其多向分化潜能测定显示,羊膜间充质细胞更好地向心肌细胞分化,而羊膜上皮细胞更好地向神经细胞分化.结论:从羊膜中可分离出羊膜上皮细胞和羊膜间充质细胞,两种细胞的表型相似,多向分化潜能却不同.羊膜上皮细胞具有更好的外胚层分化潜能,而羊膜间充质细胞更好地向中胚层分化.此结论对细胞治疗有很好的指导作用.
-
羊膜上皮细胞体外培养条件的优化及其干细胞标志的表达
本研究优化人足月胎盘羊膜上皮细胞(human amniotic epithelium cells,hAEC)的体外培养方法并现察hAEC的干细胞标志的表达情况.取健康产妇足月剖宫产术后的羊膜,采用胰酶多次消化获取hAEC,分别应用10% FBS的DMEM、类似胚胎干细胞的培养条件及添加表皮细胞生长因子(epidermal growth factor,EGF)的类似胚胎干细胞的培养条件对其进行原代和传代培养,观察培养后细胞形态,并通过流式细胞术检测、细胞免疫荧光染色等方法对培养细胞的干细胞多能性标志进行鉴定.结果表明:在类似胚胎干细胞培养条件的基础上添加10 ng/ml EGF可提高hAEC原代细胞的贴壁率和增殖能力,与广泛应用的10% FBS的DMEM培养条件相比,在此培养条件下细胞传代能力显著增强,传至5代仍保持上皮细胞表型,细胞形态在传代过程中改变不明显,并且表达胚胎干细胞全能性的表面标志SSEA-4同时细胞免疫荧光染色显示培养后的hAEC表达波形蛋白(vimentin).结论:采用类似胚胎干细胞的培养条件有利于hAEC在体外的扩增和传代,EGF对其增殖和传代有促进作用,培养的hAEC表达胚胎干细胞多能性标志.
-
氧化砷诱导食管癌细胞凋亡细胞骨架的改变
我们过去用氧化砷(As2O3)诱导食管癌细胞凋亡[1],发现在凋亡早期,细胞核未见明显改变之前有线粒体增生反应,并首先描述了As2O3诱导食管癌细胞的线粒体的形态改变[2].细胞凋亡的形态有细胞变小,皱缩,细胞核变圆,染色质凝集、靠边.我们发现在羊膜上皮细胞自发凋亡过程中张力微丝的消失[3],因此使我们考虑到细胞凋亡时,细胞形态的改变与细胞骨架的改变的关系.我们以As2O3诱导食管癌细胞凋亡,观察细胞形态和细胞张力微丝,肌动蛋白F(F-actin)的变化,以阐明细胞骨架的改变在细胞凋亡形态改变的意义.
-
神经组织细胞特异性蛋白在大鼠羊膜上皮细胞中的表达
目的检测神经组织细胞特异性抗原及神经营养因子-3 (NT-3)、乙酰胆碱转移酶(ChAT)在大鼠羊膜上皮细胞中的表达.方法从孕12-14 d的Wistar大鼠羊膜中分离羊膜上皮细胞,通过免疫细胞化学检测神经组织细胞特异性抗原(MAP-2、NSE、GFAP、Nestin、Musashi)及ChAT、NT-3在羊膜上皮细胞中的表达.结果羊膜上皮细胞表达神经干细胞、神经细胞、神经胶质细胞特异性抗原,并且在羊膜上皮细胞中有ChAT与NT-3的表达.结论羊膜上皮细胞与神经组织细胞具有一定的同源性;羊膜可望作为治疗神经系统疾病新的细胞来源.
-
人类羊膜细胞的神经生物学特性研究现状
羊膜位于胎儿绒毛膜的表面,为光滑、无血管、无神经、无淋巴的透明薄膜,厚约0.02-0.50mm,由羊膜上皮细胞、基底膜和基质组成.形成于原肠胚之前的受精第8天,羊膜组织细胞保持有前原肠胚胚胎细胞的可塑性,羊膜组织主要由来源于外胚层的羊膜上皮(amniotic epithelial cells,AECs)和来源于中胚层的羊膜间充质(amniotic mesenchyme cells,AMCs)两类细胞组成[1],羊膜上皮细胞具有三种胚原基层细胞的分化潜能,内胚层、中胚层和外胚层[2].神经发育生物学研究认为神经发生早期,羊膜组织直接与神经上皮联系,向羊水中释放神经递质及神经营养因子,在神经系统发育过程中起着重要作用.由于羊膜组织是来源于胎儿的产物,暴露于母体免疫系统监视下,AECs表面人类白细胞抗原DR遗传座位(human leucocyte antigen-DR,HLA-DR)低表达,不表达HLA-A,B,C抗原[3],此外,羊膜组织系产后废弃物无伦理学问题;羊膜组织细胞来源充分,具有神经细胞的神经生物学特点和功能,利用上述优势使羊膜组织细胞有望成为再生医学领域的可靠细胞来源,开展细胞移植治疗神经系统退行性疾病和外伤性神经损伤.
-
人参与大鼠羊膜上皮细胞移植对脊髓损伤大鼠功能恢复的影响
目的 探讨人参与羊膜上皮细胞(AECs)移植联合治疗对脊髓损伤大鼠功能恢复的影响.方法 将40只成年雄性Wistar大鼠按随机数字表法分成4组,每组10只.脊髓损伤组:进行脊髓损伤手术,不进行治疗；甲泼尼龙组:脊髓损伤后用大量甲泼尼龙冲击治疗,共3 d；人参+AECs组:脊髓损伤后服用人参超微粉碎颗粒,共20 d,并于伤后7d在脊髓损伤处移植大鼠AECs;假手术组:只打开椎板,暴露脊髓,不造成脊髓损伤.各组定期进行行为学观察(BBB评分),术后30 d行组织学观察和神经电生理[感觉诱发电位(SEP)、运动诱发电位(MEP)]检测.结果 BBB评分(分)在人参+AECs组恢复为明显,30 d达峰值,与脊髓损伤组和甲泼尼龙组比较差异有统计学意义(8.46±0.38比5.56± 1.03、7.01±0.62,均P＜0.05).组织学观察显示:脊髓损伤组灰、白质组织结构不完整,损伤区可见大片出血和坏死灶；甲泼尼龙组和人参+AECs组治疗后均有恢复,人参+AECs组恢复程度明显优于甲泼尼龙组.与脊髓损伤组和甲泼尼龙组比较,人参+AECs组SEP与MEP的峰-峰值(mV)显著增加(SEP:0.08±0.01比0.03±0.01、0.05±0.01; MEP:42.12±0.47比5.92±1.03、15.38±2.94),潜伏期(ms)明显缩短(SEP:3.71±0.37比5.22±0.26、4.64±0.32; MEP:3.73±0.11比4.72±0.35、4.24±0.31),差异有统计学意义(均P＜0.05).结论 人参与AECs移植联合治疗能有效促进脊髓损伤大鼠功能的恢复.
-
人羊膜上皮细胞分化为成骨细胞的特性
背景:研究发现人羊膜上皮细胞系WISH和FC植入裸鼠体内均可分化成软骨和成骨,作者检索关于足月分娩人胎膜的羊膜上皮细胞是否具有成骨特性国内外报道少见.目的:以足月分娩胎膜的人羊膜上皮细胞为前体细胞,观察其在体外定向诱导条件下分化为成骨细胞的能力.设计、时间及地点:细胞分子水平检测,于2005-09/2006-12在贵州省细胞工程重点实验室完成.材料:经产妇知情同意,无菌采集健康足月剖宫产胎盘6份,实验经医院医学伦理委员会批准.方法:采用机械法剥离胎盘羊膜组织,用胰蛋白酶消化法分离人羊膜上皮细胞,按3×108 L-1密度接种进行原代培养.取第1代人羊膜上皮细胞,设立两组:诱导组以1×108 L-1密度接种于培养皿内,24 h后更换为含体积分数为0.1的胎牛血清、 100 nmol/L地塞米松、50 mg/L抗坏血酸、5 mmol/Lβ-甘油磷酸的诱导培养液.对照组换液成分为仅含体积分数为0.1的胎牛血清的LG-DMEM培养液.主要观察指标:原代细胞用流式细胞仪分析其表型,免疫细胞化学法检测细胞角蛋白19的表达.诱导后采用钙-钴法检测成骨细胞特异性碱性磷酸酶的表达,茜素红S检测钙盐沉积情况.结果:人羊膜上皮细胞表达间充质干细胞表面标志CD29、CD44和上皮细胞标志细胞角蛋白19.向成骨细胞诱导分化21 d后,人羊膜上皮细胞由圆形变成梭形、三角形,细胞胞浆内碱性磷酸酶呈阳性表达,且可见钙盐沉积.结论:源自足月分娩胎盘的人羊膜上皮细胞具有分化为成骨细胞的特性.
-
不同途径移植羊膜上皮细胞在肝脏的定居
背景:细胞移植对肝脏疾病具有一定的疗效,与肝脏移植相比有其自身的优点,但有诸多问题尚待解决.目的:探讨不同途径移植的人羊膜上皮细胞在肝脏内定居情况.方法:从剖腹产后的人胎盘羊膜中分离人羊膜上皮细胞,PKH26荧光标记后计数1×107细胞通过大鼠腹腔、门静脉、尾静脉及肝脏内直接注入方式移植入大鼠体内.结果与结论:门静脉、尾静脉及肝脏直接注入途径移植的细胞均在肝脏内定居,但移植细胞数过量时造成局部肝组织的缺血坏死等不良反应.腹腔途径移植入体内的细胞未转移肝脏内.通过门静脉移植入体内的人羊膜上皮细胞在大鼠肝脏内维持存活至少16 d.移植细胞过量时,导致肝脏血管堵塞及坏死.证明人羊膜上皮细胞至少在大鼠肝脏中存活2周,提示低免疫原性的羊膜来源细胞可成为肝脏病治疗的候选细胞之一.
-
人羊膜上皮细胞分泌神经营养因子诱导人脐血间充质干细胞向神经元样细胞的分化:可能性验证
背景:课题组前期实验已证实人羊膜上皮细胞条件培养液可以诱导人脐血间充质干细胞分化为多巴胺能神经元样细胞,在此过程中人羊膜上皮细胞分泌的神经营养因子及其受体可能起到了重要作用.目的:探讨人羊膜上皮细胞分泌的神经营养因子对人脐血间充质干细胞神经分化的作用.方法:将P1代人脐血间充质干细胞按2×10~8 L~(-1)密度接种,分为3组:对照组加入HG-DMEM培养基;诱导组加入人羊膜上皮细胞条件培养液;阻断剂组预先加入阻断剂K252a工作液,36 ℃孵育40 min后更换为羊膜上皮细胞条件培养液.免疫荧光化学检测诱导后人脐血间充质干细胞神经元特异性烯醇化酶及多巴胺转运体的表达,实时定量PCR法检测诱导后人脐血间充质干细胞中神经元特异性烯醇化酶、多巴胺转运体及酪氨酸羟化酶的表达.结果与结论:人羊膜上清中有神经生长因子和脑源性神经营养因子的表达,且P1代人脐血间充质干细胞表达神经营养因子高黏附性受体Trka及Trkb.诱导48 h后与对照组比较,诱导组及阻断剂组神经元特异性烯醇化酶、多巴胺转运体阳性细胞数均明显增加(P < 0.05),且诱导组阳性细胞数多(P < 0.05).诱导组、阻断剂组神经元特异性烯醇化酶、多巴胺转运体及酪氨酸羟化酶mRNA含量均显著高于对照组(P < 0.01),且诱导组各基因mRNA含量明显高于阻断剂组(P < 0.01).结果证实人羊膜上皮细胞分泌的神经营养因子对人脐血间充质干细胞的神经分化有重要作用,其促神经分化作用是通过酪氨酸激酶受体介导的.
-
人胎盘羊膜上皮细胞的分离鉴定及多向诱导分化
背景:人羊膜上皮细胞来源稳定,正逐渐成为广受关注的再生医学种子细胞来源.目的:建立人羊膜上皮细胞体外分离培养、成脂、成软骨、成骨诱导分化的方法.方法:通过胰蛋白酶消化法从人胎盘羊膜中分离羊膜上皮细胞,进行体外培养与鉴定,观察培养12 d内的细胞生长曲线.取P1代羊膜上皮细胞,分别进行成脂、成软骨、成骨诱导,以常规培养细胞为对照,诱导16 d后,分别进行油红O染色、Masson染色及碱性磷酸酶染色,同时采用荧光定量PCR检测诱导过程中成脂转录因子、Ⅱ型胶原蛋白、骨桥蛋白、碱性磷酸酶mRNA表达变化.结果与结论:①从人羊膜中分离出的羊膜上皮细胞,免疫荧光检测表达上皮细胞标记物CK19;②P1代细胞具有较强的分裂增殖能力,P2细胞与P1相比增殖能力略有下降,P3细胞增殖能力差;③羊膜上皮细胞经成脂、成软骨、成骨诱导后,油红O染色有红色脂滴,Masson染色有亮蓝色软骨基质,碱性磷酸酶染色有红褐色钙结节;随着诱导时间的延长,成脂转录因子、Ⅱ型胶原蛋白、骨桥蛋白、碱性磷酸酶表达量升高;④结果表明,采用酶消化法可从人羊膜中分离得到羊膜上皮细胞,羊膜上皮细胞可向脂肪细胞、成软骨细胞、成骨细胞分化.
-
人羊膜间充质干细胞生物学特征及向多巴胺能神经元样细胞的分化
背景：羊膜间充质干细胞具有类似胚胎干细胞多潜能的特点，在再生医学等多种领域的临床应用具有广泛的实用性和明确的良好前景。然而，目前对于羊膜间充质干细胞的生物学特性和分化潜能的认识仍然了解甚少。目的：建立体外分离和纯化人羊膜间充质干细胞的方法，检测羊膜间充质干细胞的体外分化特点，确定羊膜间充质干细胞在体外诱导条件下向多巴胺能神经元样细胞分化的潜能。方法：采用胰蛋白酶和胶原酶Ⅱ分步消化法从羊膜中分离羊膜间充质干细胞和羊膜上皮细胞；采用percol 梯度离心方法对羊膜间充质干细胞和羊膜上皮细胞进行纯化；流式细胞术检测羊膜间充质干细胞的表面标志，确定羊膜间充质干细胞细胞表面抗原的表达特征；对体外培养的羊膜间充质干细胞进行成脂肪和成骨诱导，确定其多向分化的潜能；采用神经细胞条件培养体系诱导羊膜间充质干细胞向多巴胺神经细胞分化，通过免疫荧光染色和激光共聚焦荧光显微镜观察和鉴定诱导后多巴胺神经元样细胞的生成。结果与结论：从羊膜组织成功分离、纯化和培养出羊膜间充质干细胞和羊膜上皮细胞。羊膜来源的间充质干细胞不仅具有典型的间充质干细胞标志，而且保留了一些胚胎干细胞的OCT-4，SOX-2和KLF4等特有干细胞标志，可以诱导分化成为脂肪细胞和骨细胞，显示羊膜间充质干细胞保持了较为原始的胚胎干细胞的特点，具有多向分化的潜能。诱导分化之前的原代羊膜间充质干细胞表达固有的多种神经细胞标记，体外诱导后羊膜间充质干细胞可分化成为β-微管蛋白Ⅲ、神经元特异性核蛋白、酪氨酸羟化酶、胶质纤维酸性蛋白、髓鞘碱性蛋白和巢蛋白等阳性表达的多巴胺能神经元样细胞。结果表明人羊膜来源的间充质干细胞所保留的多向分化潜能和有效分化成为多巴胺能神经元样细胞的特性。
-
体外培养人羊膜上皮细胞的表型及分化能力
背景：人羊膜上皮细胞具有多系分化能力，是再生医学中重要的细胞来源。目前的研究多集中于对其分化能力的考察，而体外培养过程中羊膜上皮细胞的生物学特征如何变化尚不清楚。
目的：分析体外培养对人羊膜上皮细胞生长、表型及向心肌样细胞分化的能力等生物学特性的影响，探讨原代人羊膜上皮细胞干性标志物SSEA-4的表达水平与人羊膜上皮细胞生物学特性变化之间的关联性。
方法：使用统一分离方法获得原代羊膜上皮细胞并进行体外培养。利用CCK-8、流式细胞仪及real-time PCR等手段检测不同培养阶段人羊膜上皮细胞的增殖、表型以及向心肌样细胞分化的能力。
结果与结论：不同胎儿样本来源的原代人羊膜上皮细胞的SSEA-4表达在26.7%-97%，存在很大的个体差异。并且，随着传代次数的增加，人羊膜上皮细胞的SSEA-4表达水平显著降低，其下降程度与原代SSEA-4的表达水平无关。另外，培养后人羊膜上皮细胞的心肌分化潜能也存在很大个体差异，且其差异与原代人羊膜上皮细胞的 SSEA-4表达水平的高低无关。结果提示，不同胎儿样本来源的原代人羊膜上皮细胞的 SSEA-4表达水平受到个体差异的影响，需要建立更准确的临床样本筛选指标来稳定获得原代高表达 SSEA-4的胎儿样本，以实现对人羊膜上皮细胞的质量监控。另外，体外培养过程中 SSEA-4的表达水平受到培养条件的影响，需要继续优化培养条件以维持其高表达。此外，人羊膜上皮细胞向心肌样细胞分化的能力受到样本个体差异以及培养条件的影响，在今后还需要进一步研究。 -
羊膜上皮细胞和羊膜间充质干细胞构建组织工程皮肤
背景：由于人胎盘来源的间充质干细胞具有多方面的优点，近年来已成为干细胞研究的热点。目的：分析鉴定羊膜间充质干细胞和羊膜上皮细胞的生物学特性，探讨其作为皮肤种子细胞在三维气液培养构建组织工程皮肤中的应用情况。方法：用胰酶胶原酶多步消化法获取羊膜间充质干细胞和羊膜上皮细胞，通过流式细胞术、反转录-聚合酶链反应和免疫荧光染色技术，鉴定两种细胞的表面分子标记、干细胞特性、与皮肤角质形成细胞的相似性，并利用两种细胞为种子细胞以鼠Ⅰ型胶原为基质进行三维气液培养。结果与结论：①流式细胞术检测体外培养羊膜间充质干细胞和羊膜上皮细胞均高表达CD90、CD73、CD105，不表达造血干细胞标志CD34以及MHC-Ⅱ类分子HLA-DR。②反转录-聚合酶链反应检测到羊膜间充质干细胞表达干细胞特性基因CMCY和NANOG，羊膜上皮细胞表达干细胞特性基因CMCY和 KLF4，两种细胞均有干细胞特性。③反转录-聚合酶链反应检测羊膜间充质干细胞表达皮肤角质形成细胞特性基因 K19、β1-integrin、K8，羊膜上皮细胞表达K19、β1-integrin、K5、K8，免疫荧光染色见羊膜上皮细胞表达与角质形成细胞增殖相关的的特性蛋白 K14，说明羊膜上皮细胞与皮肤角质形成细胞更具相似性,在特定条件下更易于分化为皮肤角质形成细胞。④利用两种细胞成功构建组织工程皮肤，苏木精-伊红染色切片显示其具有一定的皮肤结构，且羊膜上皮细胞发生了初步分化。以上结果说明羊膜间充质干细胞与羊膜上皮细胞通过三维培养构建人皮肤组织是可行的。
-
羊膜上皮细胞移植治疗帕金森病大鼠的实验研究
目的探讨羊膜上皮细胞纹状体内移植对帕金森病(PD)大鼠的治疗作用.方法采用RT-PCR方法检测人羊膜上皮细胞株FL表达脑源性神经营养因子(BDNF)、神经营养因子-3(NT-3)mRNA;Hoechest33342标记后微移植方法将其移入PD大鼠模型纹状体内,免疫荧光技术检测移植细胞表达BDNF、NT-3状况.结果羊膜上皮细胞能够表达BDNF、NT-3,植入纹状体内能够存活,并在第2周内明显改善PD大鼠的行为学症状.结论羊膜上皮细胞可作为表达神经营养因子治疗PD的移植细胞.
-
甲强龙、电针及羊膜上皮细胞在脊髓损伤治疗中的研究进展
脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)是交通、工矿事故及运动意外中常见的中枢神经系统损伤性疾病,是人类致残率高的疾患之一.在美国每年发生外伤性脊髓损伤近14000例,对这些SCI患者年支出的医疗费用超过60亿美元[1].在中国,据不完全统计,现有截瘫患者约40余万,另每年新增约1万,给个人和国家带来沉重的负担[2].因此,寻找一种更加经济、有效的治疗方法迫在眉睫.
-
人羊膜上皮细胞对脂多糖刺激下的RAW264.7细胞向M1极化的预防作用及其初步作用机制
目的:本实验探讨人羊膜上皮细胞(human amniotic epithelial cells,hAECs)预防RAW264.7细胞在脂多糖(LPS)刺激后向M1极化的作用以及可能机制.方法:采用流式细胞仪检测细胞凋亡,划痕实验检测细胞迁移,ELISA检测细胞释放NO浓度,Real-time PCR检测白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、一氧化氮合成酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)、精氨酸酶1(arginase-1,Agr-1)及甘露糖受体(mannose receptor,MR又称CD206)等基因表达情况,Western blotting检测RAW264.7胞质蛋白p-IκBα以及胞核蛋白NF-κB的表达.结果:RAW264.7培养基组与hAECs条件培养基干预组的凋亡率分别为5.68％±2.3％、6.68％±2.1％(p＞0.05).LPS刺激组与hAECs条件培养基干预组两组的迁移率分别为42.03±0.07％、14.71±0.04％ (p＜0.05);LPS刺激组与hAECs干预组两组NO释放量分别为27.73± 10 μM、13.33±6.43 μM(p＜0.05);Real Time-PCR结果显示,hAECs干预组M1型巨噬细胞相关基因如IL-1β、TNF-α、iNOS以及rNF-β的表达显著下调,M2型巨噬细胞相关基因如Arg-1、CD206、CD36等表达上调(p＜0.01).Western blotting结果显示,hAECs干预组RAW264.7中胞质蛋白p-IκBa以及胞核蛋白NF-κB的蛋白含量降低.结论:hAECs与RAW264.7预培养能有效预防LPS刺激下RAW264.7向M1极化,其机制可能是通过抑制IκBα蛋白磷酸化来降低核内NF-κB的含量,从而抑制了M1型相关基因的表达.
-
甲强龙、电针联合羊膜上皮细胞移植对脊髓损伤大鼠神经传导通路的影响
目的:探讨甲强龙、电针与羊膜上皮细胞(AECs)联合治疗对脊髓损伤(SCI)大鼠神经传导通路的影响.方法:成年雌性Wistar大鼠随机分成5组:SCI损伤对照组、甲强龙(MP)治疗组、MP+电针治疗组、MP+电针+AECs移植治疗组和假手术组.各组术后30 d行荧光红(FR)逆行示踪和神经电生理检测.结果:荧光红逆行示踪显示MP+电针+AECs移植治疗组脊髓损伤处可见大量有序的FR阳性神经纤维,在对应大脑皮质运动区和脊髓灰质后角追踪到数量较多的FR阳性神经元胞体,结构清晰.神经电生理检测显示该组感觉诱发电位与运动诱发电位的峰-峰值都有明显增加,潜伏期均明显缩短,与其他组比较,差异有统计学意义.结论:甲强龙、电针与AECs联合治疗大鼠脊髓损伤能够有效恢复神经传导通路,促进神经纤维再生.
-
羊膜上皮细胞胶原海绵复合体的构建及其细胞特性变化
目的:构建羊膜上皮细胞(AECs)胶原海绵复合体,并研究其细胞生长及特性.方法:将大鼠AECs接种于胶原海绵支架中,一般贴壁培养细胞作对照,用CM-Dil及Hoechest33342标记细胞膜和细胞核、HE染色、扫描电镜等观察细胞的生长和形态,CCK-8法检测细胞活力,免疫细胞化学、实时荧光定量PCR检测细胞表型.结果:与一般贴壁培养AECs相比,AECs在胶原海绵中粘附生长良好,增殖能力强,直径变小,细胞表型变化不明显,仅Nestin mRNA表达上调.结论:胶原海绵支架与AECs生物相容性良好,能维持细胞原特性并促进其生长和增殖.
-
甲强龙、电针联合羊膜上皮细胞移植对损伤脊髓神经纤维再生及功能恢复的影响
目的:探讨甲强龙(MP)、电针与羊膜上皮细胞(AECs)移植联合治疗对脊髓损伤(SCI)后大鼠神经纤维再生和功能恢复的作用.方法:成年雌性Wistar大鼠随机分成5组,SCI对照组、甲强龙组、MP+华佗夹脊穴电针组、MP+电针+AECs组和假手术组.各组术后30d神经丝蛋白行(NF)、5-羟色胺(5-HT)和降钙素基因相关肽(CGRP)免疫荧光组织化学观察以及神经电生理检测.结果:MP+电针+AECs组损伤区可见大量有序的NF、5-HT和CGRP阳性神经纤维,其中5-HT阳性纤维假手术组比例高于CGRP阳性纤维所占比例;神经电生理检测显示该组与其他损伤组比较感觉诱发电位与运动诱发电位的峰-峰值增加,潜伏期明显缩短,差异有统计学意义,其中运动诱发电位恢复程度优于感觉诱发电位.结论:甲强龙、电针联合AECs移植治疗脊髓损伤促进了神经纤维的再生和大鼠后肢功能的恢复.
