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小毛莨内酯对结核休眠菌感染病人GLS mRNA表达的影响
目的研究小毛莨内酯抗人体结核休眠菌感染的分子免疫学机理.方法采用PCR方法检测结核病人PBLs中结核菌16kD α-晶状体同源蛋白DNA阳性的56例患者为本研究对象;采用反转录聚合酶链反应半定量(QC-RT-PCR)方法,测定不同剂量的Tern.对以上病人PBL颗粒裂解肽mRNA表达水平的影响.结果当Tern.在100mg/L,200mg/L浓度时,能诱导结核休眠菌感染病人体外活化的PBL GLS mRNA的表达.结论 Tern.可能通过促进颗粒裂解肽mRNA的表达,增强机体CTL杀菌能力,达到抗结核休眠菌的作用.
关键词： 小毛莨内酯 颗粒裂解肽 结核 休眠菌 16kD α-晶状体同源蛋白 -
小毛茛内酯影响耐药结核患者外周血淋巴细胞SHSP和GLS表达的研究
目的:研究小毛茛内酯(Ternatolide, Tern)抗人PBL内结核休眠菌感染的分子免疫学机理.方法: 用Tern 200 mg*L-1体外分别培养PBL 24,36,48,60,72,84 h后,采用PCR方法检测84 例耐药、多耐药结核患者体外PBL内结核菌小热休克蛋白(16 KDa SHSP)基因的表达;采用反转录聚合酶链反应半定量(QC-RT-PCR)方法,测定其PBL内颗粒裂解肽 (Granulysin,GLS) mRNA的表达.结果:Tern 能显著减少耐药结核患者PBL内结核菌16 KDa SHSP基因拷贝表达量(P<0.001),这种表达减少与培养时间成正比;同时显著增加了PBL GLS mRNA 的表达水平(P<0.001).结论:Tern可能通过减少结核休眠菌16KDa SHSP的表达,激活休眠菌的同时促进GLS mRNA高水平的表达,增强机体CTL杀菌能力,达到抗耐药的作用.
关键词： 小毛茛内酯 颗粒裂解肽 结核 休眠菌 16KDa SHSP -
人颗粒裂解肽突变子在大肠埃希菌中的构建与表达研究
目的 构建NKG5突变基因的原核表达载体并进行表达研究.方法 采用寡核苷酸合成的方法,拼接成为NKG5-Ser的编码序列,克隆到pGEMT载体上,测序正确后,再切下编码序列连接到质粒pGEX-4T-1中,重组表达载体转化大肠埃希菌BL21(DE3)pLysS,用IPTG诱导使融合蛋白高效表达.结果 成功获得重组表达载体pGEX-4T-1-NKG5-Ser,转染大肠埃希菌BL21(DE3)pLysS,诱导表达后,SDS-PAGE和免疫印迹反应均显示显示出相对分子量(Mr)为35 kD的蛋白条带,证明融合蛋白表达成功.结论 获得了突变NKG5与GST的融合蛋白,为进一步的工作打下了基础.
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颗粒裂解肽G13结构域的表达及其对大肠杆菌活力的影响
目的 构建携带颗粒裂解肽G13结构域的原核表达质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达目的 蛋白,并检测其对大肠杆菌活力的影响.方法 人工合成G13结构域编码DNA序列,PCR扩增后,用T.A克隆法与pBAD/TOPO ThioFusion表达载体连接.通过PCR鉴定及测序筛选阳性重组质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),经阿拉伯糖诱导表达,SDS-PAGE检测表达情况,同时监测诱导表达前后工程菌A600值的变化及菌液中的突变体.结果 工程菌经诱导,表达出相对分子质量约15 000的特异蛋白,表达量占菌体总蛋白的3%左右.随着外源蛋白的表达,菌液A600值下降,随后又缓慢上升.提取的质粒测序结果 表明,其启动子的-35区和-10区均发生了突变,随着诱导时间的增加,突变细胞的比例不断增加.结论 已成功构建了G13结构域原核表达质粒,并在大肠杆菌中表达出G13融合蛋白.该异源蛋白的表达导致丁程菌的活力降低.
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小毛莨内酯对结核病人颗粒裂解肽基因表达的作用
目的研究小毛莨内酯(Ternatolide, Tern)对健康成人,初诊未治、耐药肺结核病人及儿童结核患儿周围血淋巴细胞(PBL)体外活化后颗粒裂解肽(granulysin,GLS)mRNA表达的作用,探索其抗结核菌的分子免疫学机理.方法采用反转录聚合酶链反应半定量(QC-RT-PCR)方法,测定不同剂量的Tern对以上4组人群PBL颗粒裂解肽mRNA表达水平的影响.结果当Tern在100 mg*L-1,200 mg*L-1浓度时,均能诱导以上4组人群体外活化的PBL GLS mRNA的表达,且各组诱导表达水平无显著差异.结论 Tern可能是通过提高CTL的效应分子GLS mRNA表达的水平,杀灭胞内致病菌MTB,其诱导作用呈现剂量依赖性.特别是对休眠菌感染所致的耐药结核病人体外PBL GLS mRNA的表达亦有高水平的诱导.
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猫爪草有效成分抗结核治疗进展
临床研究证明,中药猫爪草抗结核效果显著,但机制尚未明了.因此,了解结核杆菌休眠和复苏的机制以及猫爪草提取物对结核分枝杆菌临床分离株的可能作用靶标意义重大.
