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结核分枝杆菌肝素结合血凝素在肺结核及肺外结核中的免疫作用研究
目的 探讨结核分枝杆菌肝素结合血凝黏附素(heparin-binding hemagglutinin adhesin,HBHA)在不同结核感染状态人群中免疫反应及可能的诊断价值.方法 用天然的HBHA刺激选取阴性对照、潜伏感染者、肺结核和肺外结核患者,分离外周血单个核细胞,加入共培养,收集细胞培养上清,ELISA方法检测上清中IFN-γ的浓度,运用非参数检验的方法统计分析.结果 4组HBHA特异的IFN-γ分泌水平分别为49.5、781.9、341.8、214.4 pg/ml,潜伏感染者组远高于其他各组,HB-HA刺激后肺结核和肺外结核之间的IFN-γ分泌水平无统计学差异(U=1 901.5,P=0.448).结论 HBHA特异的IFN-γ分泌水平,有利于鉴别健康人群中的潜伏感染者,HBHA可能具有一定的免疫保护作用,尽管HBHA与肺外结核发病相关,其特异的细胞免疫在肺结核和肺外结核间无统计学差异.
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色氨酸-犬尿氨酸代谢中间产物对结核病患者T细胞免疫的影响
目的 明确结核病患者T细胞亚群的失衡状况,以期发现色氨酸(TRP)-犬尿氨酸(KYN)代谢中间产物对T细胞亚群的影响,以解释结核病患者T细胞亚群发生变化的可能机制.方法 结核病患者来源于首都医科大学附属北京胸科医院2012年9月至2012年12月期间,经细菌学、病理学和影像学检查明确诊断为肺结核的患者,无合并糖尿病等其他合并疾病,共104例,经数字表法随机抽样选取45例作为试验组;健康对照患者来源于同期北京市昌平区结核病防治所的健康体检志愿者,共100名,经数字表法随机选取其中39名作为健康对照组.采用流式细胞分析方法检测试验组和健康对照组的血细胞中调节性T细胞(Treg细胞)和T辅助细胞17(Th17)的水平;进一步通过体外添加TRP及其代谢中间产物KYN和喹啉酸(QA)来刺激CD4+和CD8+T淋巴细胞,观察其对细胞凋亡的影响,分析TRP及其代谢中间产物对T细胞分化的影响.采用SPSS 17.0软件进行统计学分析,流式细胞分析结果所获数据符合方差齐性和正态分布,以“-x±s”表示,采用t检验进行统计学分析,P＜0.05为差异有统计学意义.结果 与健康对照组[(0.41±0.26)％]相比,试验组的Treg细胞的比率[(1.49±0.82)％]显著上升(t=33.64,P=0.000),而Th17的比率[健康对照组(0.73±0.43)％、试验组(1.04±0.72)％]虽有所上升,但差异无统计学意义(t=44.46,P=0.071).体外细胞刺激试验发现:高浓度的KYN(2.0 mmol/L)对CD4+T淋巴细胞[健康对照组(8.40±3.28)％、试验组(30.07±7.37)％;t=7.49,P=0.000]和CD8+T淋巴细胞[健康对照组(15.31±1.88)％、试验组(26.36±1.09)％;t=4.89,P=0.003]具有明显的诱导凋亡作用.对CD4+T淋巴细胞而言,添加高浓度的TRP(2.0 mmol/L)和QA(2.0 mmol/L)后,试验组TRP和QA的细胞凋亡比率分别为(6.66±0.96)％和(6.85±0.43)％,与健康对照组(8.40±3.28)％和(8.40±3.28)％相比略有减少,但差异无统计学意义(t=6.42,P=0.189;t=8.21,P=0.107);对CD8+T淋巴细胞而言,添加高浓度的TRP(2.0 mmol/L)和QA(2.0 mmol/L)后试验组的细胞凋亡比率分别为(16.48±4.75)％和(17.18±2.07)％,与健康对照组(15.31±1.88)％和(15.31±1.88)％相比,凋亡比率略有增加,但差异无统计学意义(TRP:t=7.41,P=0.238;QA:t=8.02,P=0.121).结论 Treg细胞的含量在结核病患者中有明显的升高.TRP-KYN途径代谢中间产物KYN能够影响CD4+T和CD8+T淋巴细胞凋亡,推测通过这种细胞凋亡的途径促进了T细胞分化.
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衔接分子胱天蛋白酶募集域蛋白9与抗结核免疫的相关性
结核病是一种慢性传染病,全球每年有170万例患者死于结核病.我国结核病患者例数居世界第二位,也是耐药结核病流行严重的国家之一,因结核病死亡的人数超过其他传染病死亡人数的总和.因此,研制有效的抗结核药物和新型疫苗迫在眉睫.这需要对宿主与Mtb相互作用机制、抗原提呈细胞(antigen presenting cell.APC)内部信号传导机制及其关键分子进行深入理解.宿主感染Mtb后,通过模式以别受体(pattern recognition receptors,PRRs)识别Mtb表面病原体相关分子模式(pathogen-associated molecular patterns,PAMPs),并将信号传递给衔接分子,后者启动下游的信号级联反应,诱导固有免疫细胞合成细胞因子,活化宿主免疫机制.本综述对一种重要的衔接分子胱天蛋白酶募集域蛋白9(caspase rccruitment domain-containing protein 9,CARD9)及其与抗结核免疫的相关性进行简要阐述,为结核病的治疗和疫苗的研制提供参考.
关键词： 结核/免疫学 CARID信号接头蛋白质类 -
我国结核病基础研究的回顾与展望
结核病基础科研围绕着人体与结核分枝杆菌斗争的方方面面全方位地展开,从结核分枝杆菌的基因组DNA到转录组RNA,从其表达的蛋白质到其代谢的产物,再到结核分枝杆菌对人体的致病作用及人体对其产生的免疫应答,希望寻找出干预的措施、控制的手段.研究内容非常丰富,篇幅所限,难以面面俱到,笔者只是根据中文文献试图阐述我国在细菌学、免疫学、分子生物学、疫苗、新药方面的主要研究和取得的重要进展,也试图指出研究的前景和存在的问题.
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结核病患者免疫学指标检测的临床意义
目的:探讨结核病患者免疫学指标检测的临床意义.方法:采用流式细胞术、散射比浊法和ELISA分别检测了56例结核病患者和32例健康人的T淋巴细胞亚群、自然杀伤细胞、血清免疫球蛋白及其亚类、白细胞介素-6和白细胞介素-2受体.结果:结核病患者CD3+细胞与对照组无差别(P>0.05),但CD8+细胞明显高于对照组(P<0.05),CD4+/CD8+明显低于对照组(P<0.05);自然杀伤细胞高于对照组血清IgG、IgM和IgA含量与对照组基本无区别(P>0.05),但IgG亚类差别较大,尤其是IgG1和IgG2(P<0.01)血清IL-6和IL-2R明显高于对照组.结论:机体的细胞免疫和体液免疫均参与了结核病的发生、发展过程.
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结核病患者体内抗原特异性多功能辅助性T细胞1的检测及分析
目的 了解结核分枝杆菌特异性多功能辅助性T细胞1(Th1)在外周血和胸腔积液中表达的变化及其临床意义.方法 纳入对象包括结核病(TB)患者93例,其中普通肺结核患者66例,结核性胸膜炎患者27例;结核分枝杆菌潜伏感染者(LTBI)30例;健康对照(HD) 66例.首先分离外周血和胸腔积液中的单个核细胞,特异性结核分枝杆菌抗原刺激后,进行胞内细胞因子染色,根据CD4+T淋巴细胞细胞因子产生的不同,将其分为7个不同亚群,分别为白细胞介素(IL)-2+干扰素(IFN)-γ+肿瘤坏死因子(TNF)-α+、I12+ IFN-γ+、ID2+ TNF-α+、IFN-γ+ TNF-α+、IL-2+、TNF-α+、IFN-γ+细胞亚群.结果 以“(x)±s”表示,所有数据均使用GraphPad Prism 4.0统计软件进行分析,两组间比较采用配对t检验,多组间比较采用ANOVA方差分析,以P＜0.05为差异有统计学意义.结果 TB患者外周血特异性多功能Th1细胞(II2+ IFN-γ+INF-α+)表达水平为(0.107±0.278)％,明显高于LTBI(0.019±0.032)％和HD(0.008±0.016)％(F=5.675,P-0.004);IL-2+TNF-α+细胞在TB和LTBI分别为(0.049±0.123)％和(0.046±0.050)％,均高于HD(0.003±0.014)％(F=5.435,P=0.005);TB患者IFN-γ+TNF-α+、IL-2+IFN-γ+细胞表达水平分别为(0.136±0.256)％和(0.146±0.347)％,明显高于HD(0.052±0.082)％和(0.029±0.042)％(F=3.774,P=0.024;F=4.912,P=0.008).结核性胸膜炎患者胸腔积液中特异性多功能Th1、IL-2+ TNFα+、IFN-γ+ TNF-α+、IL-2+、IFNγ++应答水平分别为(0.719±0.996)％、(0.628±1.284)％、(0.704±0.829)％、(0.955±1.538)％、(1.188±1.924)％,均高于外周血单个核细胞(0.033±0.065)％、(0.095±0.174)％、(0.137±0.317)％、(0.285±0.434)％、(0.318±0.598)％(t=3.700,P=0.001;t=2.125,P=0.043;t=3.216,P=0.003;t=2.144,P=0.041;t=2.412,P=0.023).结论 结核分枝杆菌特异性多功能Th1细胞应答激活与结核分枝杆菌感染的发病密切相关,多功能Th1细胞在TB的保护性免疫反应中起一定作用.
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IL-17在结核病免疫应答中的作用
随着新的CD4+T淋巴细胞亚群的不断发现,人们对结核病免疫的认识也在不断的更新之中.辅助性T细胞(T helper cell,Th) 17是一群分泌白介素(IL)-17的不同于Th1、Th2和调节性T细胞的一类新型CD4+T细胞亚群,新近被发现具有不同细胞表型.早期研究认为,IL-17和Th17细胞在自身免疫性疾病中起重要作用.近来发现在抗结核分枝杆菌感染免疫中也起着重要作用,但具体发挥免疫保护作用还是免疫病理作用尚存争议.本文就IL-17、Th17细胞在结核病免疫应答中的作用及其调控进行综述,以便今后在抗结核治疗中引入新的特异性免疫治疗.
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结核病免疫机制及疫苗研制开发研究进展
TB主要是由结核病病原体—— Mtb感染引起的具有重大公共卫生威胁的传染病.天然免疫细胞如巨噬细胞或树突状细胞,通过其表达的模式识别受体(PRRs)识别Mtb特有的病原相关分子模式(PAMPs)后,引起大量特异性的细胞因子表达及细胞活性的提高.被激活的巨噬细胞或树突状细胞不仅可以直接吞噬Mtb或Mtb感染的细胞,还可以通过释放各种活性分子与抗原提呈来激活适应性免疫应答.然而,Mtb在与宿主免疫系统的长期共同进化过程中发展出各种干扰或抑制免疫细胞功能的机制:如抑制细胞因子的产生；抑制吞噬体与溶酶体的融合；抑制巨噬细胞的自噬；抑制免疫细胞的凋亡；抑制树突状细胞的成熟和抗原提呈等,从而能够在巨噬细胞内存活.目前,惟一使用的减毒Mtb活疫苗——BCG却缺乏有效性.人们对TB发生机制的认识不足,严重限制了对TB新型高效的抗Mtb疫苗的研发.尽管近年来在新型疫苗研制开发方面已经取得一些进展,目前进入临床状态的候选疫苗已达十几种,但是距离实际应用还任重而道远.按照免疫策略和改进方法,新型疫苗可以分为重组BCG疫苗、亚单位疫苗、活载体疫苗和减毒Mtb疫苗.研发新型疫苗关键需要解决以下问题:一是如何筛选到优质的抗原；其次,如何筛选到优质的佐剂以增加抗原的免疫保护效果；再次如何保证抗原的正确加工和有效提呈；第四,如何增加BCG的免疫记忆；第五,如何进一步降低BCG的毒力；后,如何对疫苗的免疫保护效果进行评估.
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济南市0～12 a儿童结核免疫监测
根据卫生部的要求,济南市于1997年9月起停止卡介苗(BCG)的复种工作.为了解济南市停止BCG复种后各年龄组儿童结核免疫水平,为制定结核病控制措施提供科学依据.1998年3月对槐荫区、长清县共1 584名0～12 a儿童进行了卡介苗纯蛋白衍生物(PPD)实验抽样调查,结果报告如下.
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卡介苗配用腺苷对小鼠的免疫接种效果
目的 探讨腺苷(ADO)提高卡介苗(BCG)免疫接种的效果.方法 实验第2天,取小鼠接种部位皮肤与其脾细胞共育3 d,测定其上清液细胞因子浓度和腺苷脱氨酶(ADA)活性.实验第4周,小鼠经气道给予减毒结核分支杆菌(MTB)1×106>CFU,18～20 h后检测其血清ADA活性、肺免疫细胞类型、巨噬细胞(AM)溶酶体活性变化及脾细胞活化数.结果 ①局部接种部位皮肤与脾细胞共同培养3 d,ADO组TNF-α水平显著高于对照组,ADO组ADA活性明显低于对照组,而两组间IFN-γ、IL-13无明显差异;②MTB感染肺部后,ADO组AM数量及溶酶体活性均明显高于对照组,ADO组血清ADA活性显著低于对照组,而中性粒细胞、淋巴细胞、及脾活化细胞数两组均无明显差异.结论 卡介苗配用ADO能促进小鼠免疫接种效果.
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ELISA检测结核IgG抗体对结核病的诊断价值
目的探讨血清抗结核分支杆菌抗体对活动性结核病的诊断价值.方法采用快速酶联吸附法(ELISA)检测血清抗PPD-IgG在各类结核病中的特异性、敏感性及与痰菌、病情的关系.结果血清抗PPD-IgG诊断结核病的特异性为89.8%,敏感性为82.9%,其阳性率与痰菌关系不大,与病情变化有一定的相关性.结论血清抗PPD-IgG检测是活动性结核病一项有价值的诊断方法,并可用于评价结核病治疗的转归.
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肺结核和肺外结核患者外周血淋巴细胞亚群及血液相关指标的变化比较
[目的]分析肺结核和肺外结核患者的免疫特点及血液指标差异.[方法]采用流式细胞术检测174例肺结核(A组),51例肺外结核(B组),100例非结核疾病组(C组)及255例健康体检者(D组)外周血CD3+细胞、CD3+CD4+细胞、CD3+CD8+细胞、NK细胞、B细胞的百分比及CD3+CD4+/CD3+CD8+比值并进行比较分析,同时对四组人群的血液学指标腺苷脱氨酶(ADA),C-反应蛋白(CRP)和癌胚抗原(CEA)进行检测比较.[结果]A组和B组患者的CD3+、CD4+T淋巴细胞数量百分比和CD4+/CD8+比值较C组和D组均明显降低(P<0.05);B组患者的CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞数量百分比和CD4+/CD8+比值较A组患者明显降低(P<0.05).A组和B组患者的CD8+的T淋巴细胞数量百分比较C组和D组均明显升高(P<0.05);B患者的CD8+细胞百分比较A组患者明显升高(P<0.05).与B组患者的B淋巴细胞数量百分比较A,C组和D组明显升高(P<0.05).与A组和B组患者的NK细胞数量百分比相比较,C组和D组明显升高(P<0.05);A组和B组患者的NK细胞自然杀伤率较C组和D组明显降低(P<0.05).A和B组患者的ADA和CRP水平较C组和D组明显升高(P<0.05);B组患者的CRP水平较A组患者明显升高(P<0.05).[结论]肺结核和肺外结核患者常伴有免疫功能紊乱和血液学指标的异常,其可为临床免疫干预提供理论依据.
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小儿结核菌素试验及结核抗体检测分析
卡介苗(BCG)是预防小儿结核病的有效措施之一,且早已被列入我国计划免疫项目,在全国较好地得到了实施.为观测接种卡介苗后其免疫功能,作者等对516名小儿进行了PPD(结核菌纯蛋白衍生物)试验及PPD)抗体检测.
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结核分枝杆菌Rv3407免疫原特性及研究进展
据WHO估计,全球约有20亿人感染结核分枝杆菌(MTB),其中5％～10％会发展成结核病(TB)患者,大部分人会以潜伏感染状态持续终生[1].结核潜伏性感染(LTBI)是宿主感染结核分枝杆菌后皮肤结核菌素实验阳性,而无活动性结核的临床表现,无影像学改变或细菌学证据的一种尚未发病的特殊状态.潜伏感染阶段,MTB无代谢,无DNA复制和毒力.虽然休眠的MTB的毒力和对宿主细胞的破坏能力降低,但是同时也容易逃避免疫防御,通常难以被清除.
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肿瘤坏死因子-α抗结核免疫作用研究进展
肿瘤坏死因子-α(TNF-α)是一种多功能的细胞因子,在机体抗结核免疫中扮演着重要角色.它不仅参与巨噬细胞抵抗结核杆菌的感染和结核性肉芽肿的形成,还能诱导巨噬细胞凋亡和其他抗结核细胞因子的释放,同时在铁介导的结核杆菌生长抑制中起着重要作用.此外,TNF-α对结核杆菌休眠状态的维持也不可或缺.本文主要从上述几个方面简要介绍TNF-α抗结核的免疫保护作用.
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T-SPOT.TB 检测在结核病诊断中的临床应用价值
目的 分析结核分枝杆菌感染T 淋巴细胞斑点试验(T-SPOT.TB)法检测结核效应T 淋巴细胞和结核分枝杆菌无血清培养基(TB-BE)法检测人结核杆菌免疫球蛋白G(IgG)抗体在结核病诊断中的临床应用价值.方法 对确诊的165 例结核患者同时采用T-SPOT.TB 法和TB-BE 法进行检测,分析两种方法对结核病的诊断价值.结果 T-SPOT.TB法的阳性率为84.8%(140/165),TB-BE 法的阳性率为62.4%(103/165),T-SPOT.TB 法的阳性率明显高于TB-BE 法,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 通过对两种方法的比较,对选择正确的检查方法有指导意义.
