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结核分枝杆菌肝素结合血凝素在肺结核及肺外结核中的免疫作用研究
目的 探讨结核分枝杆菌肝素结合血凝黏附素(heparin-binding hemagglutinin adhesin,HBHA)在不同结核感染状态人群中免疫反应及可能的诊断价值.方法 用天然的HBHA刺激选取阴性对照、潜伏感染者、肺结核和肺外结核患者,分离外周血单个核细胞,加入共培养,收集细胞培养上清,ELISA方法检测上清中IFN-γ的浓度,运用非参数检验的方法统计分析.结果 4组HBHA特异的IFN-γ分泌水平分别为49.5、781.9、341.8、214.4 pg/ml,潜伏感染者组远高于其他各组,HB-HA刺激后肺结核和肺外结核之间的IFN-γ分泌水平无统计学差异(U=1 901.5,P=0.448).结论 HBHA特异的IFN-γ分泌水平,有利于鉴别健康人群中的潜伏感染者,HBHA可能具有一定的免疫保护作用,尽管HBHA与肺外结核发病相关,其特异的细胞免疫在肺结核和肺外结核间无统计学差异.
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Dectin-1介导香菇多糖诱导人单核细胞系THP-1细胞产生IL-12的研究
目的 探讨香菇多糖能否依赖Dectin-1介导而诱导人单核细胞系THP-1细胞产生IL-12.方法 香菇多糖作用THP-1细胞后,实时荧光定量RT-PCR检测Dectin-1、IL-12p35和IL-12p40的mRNA表达水平；ELISA法检测THP-1细胞分泌IL-12的含量；以Dectin-1抑制剂昆布多糖预处理THP-1细胞,比较香菇多糖诱导产生IL-12的变化.结果 香菇多糖可上调THP-1细胞表达Dectin-1的mRNA水平；能上调THP-1细胞IL-12p35和IL-12p40的mRNA表达和IL-12分泌；昆布多糖可明显抑制香菇多糖诱导THP-1细胞分泌IL-12.结论 Dectin-1能介导香菇多糖诱导人单核细胞系THP-1细胞产生IL-12.
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C型凝集素样自然杀伤(NK)细胞受体在结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤中表达及意义
目的 探讨C型凝集素样自然杀伤(NK)细胞受体CD94和NKG2在结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤中的表达及意义.方法 运用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测C型凝集素样NK细胞受体CD94和NKG2在经组织形态、免疫组织化学、EB病毒原位杂交及T细胞受体PCR克隆性重排分析确诊的21例结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤以及对照组同部位B细胞淋巴瘤8例、淋巴结外周T细胞淋巴瘤(PTCL)10例、脾脏5例、胸腺5例和慢性炎性鼻黏膜5例组织中的表达情况并进行随访.结果 21例结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤具有典型的形态学改变,表达CD3ε、CD56和细胞毒蛋白,TCR重排阴性,20例EB病毒阳性;RT-PCR扩增结果显示,在21例结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤中,18例(85.7%)CD94呈阳性表达;NKG2总阳性率为95.2%(20/21),各亚基表达阳性率依次为NKG2A/2B(85.7%)、NKG2D(61.9%)、NKG2F(14.3%)、NKG2C,/2E(4.8%).对照组中PTCL和B细胞淋巴瘤均不表达CD94和NKG2,仅2例脾脏和2例慢性炎性鼻黏膜组织表达CD94,1例脾脏组织表达NKG2A/2B,1例胸腺组织表达NKG2D.CD94和NKG2在结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤中的表达与T细胞淋巴瘤和B细胞淋巴瘤比较,差异均有统计学意义(P均<0.01).CD94和NKG2同时表达于17例结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤,共表达率为81.0%(17/21).结论 CD94和NKG2在结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤中呈特异性和顺序性表达,提示多数病例肿瘤细胞处于活化和功能NK细胞阶段.对这些分子的检测有可能成为NK细胞源性淋巴瘤诊断的重要手段.
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重组和天然HBHA蛋白制备及其活性研究
目的 制备天然和重组HBHA蛋白,并比较其诱导产生的抗体对其聚集BCG活性的抑制效应.方法 将7H9液体培养基中的BCG培养至稳定生长期,用CL-6B层析柱分离纯化HBHA蛋白(nHBHA).同时,克隆HBHA基因片段,表达于大肠杆菌BL-21中,经亲和层析法纯化蛋白,并以此免疫新西兰兔制备多克隆抗体.在BCG的液体培养基中分别加入不同浓度的HBHA蛋白,观察菌体的聚集情况.同时,用抗HBHA抗体与HBHA蛋白孵育后,加入BCG培养基中,观察菌体聚集情况.结果 获得天然HBHA蛋白纯度为99%,浓度为1.016 mg/ml.重组蛋白表达量约占菌体蛋白总量的36%,纯化得到纯度为97.1%,浓度为10.98 mg/ml的重组HBHA蛋白.所得天然和重组蛋白均有诱导BCG聚集的作用,当nHBHA浓度为0.2μg/ml时BCG出现少量聚集,而rHBHA浓度达到2μg/ml时BCG才出现聚集.并且此聚集现象均可被多克隆抗体抑制.结论 成功获得天然HBHA和重组HBHA蛋白;证实了两者均具有促进BCG聚集的功能,并可被由重组HBHA诱导产生的多克隆抗体所抑制.从而为进一步研究HBHA的临床诊断和疫苗价值提供了实验依据.
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甘露糖结合凝集素基因54号密码子多态性与川崎病易感性的研究
目的探讨甘露糖结合凝集素(MBL)基因第54号密码子多态性与中国汉族儿童川崎病的易感性和临床表型的关系.方法应用聚合酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性分析,对160例中国汉族健康儿童及95例川崎病患儿的MBL基因多态性进行检测.结果 (1)中国汉族健康儿童MBL基因多态性分布与文献报道的香港华人及高加索人种接近,无统计学差异. (2)川崎病患儿GAC等位基因频率高于健康对照组(0.258 vs 0.138,P＜0.01),而GGC等位基因频率低于健康对照组(0.742 vs 0.862,P＜0.01).GAC型等位基因与中国汉族儿童川崎病密切相关[OR=2.18,95% CI(OR值的95%置信区间)为1.38～3.44,P＜0.05].(3)在川崎病患儿中,GAC型等位基因携带者其病史有前驱感染史者多于GGC纯合子(P＜0.01).结论川崎病发病受遗传背景的影响,与 MBL第54号密码子基因多态性密切相关.
关键词： 外源凝集素类 粘膜皮肤淋巴结综合征 基因 多态现象(遗传学) 密码子 -
类几丁质酶YKL-40及Toll样受体4在慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉与不伴鼻息肉患者中表达的差异
目的 比较类几丁质酶YKL-40及Toll样受体4(TLR4)在慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉(chronic rhinosinusitis with nasal polyps,CRSwNP)与不伴鼻息肉(chronic rhinosinusitis without nasal polyps,CRSsNP)患者鼻窦黏膜中表达的差异及其临床意义.方法 选取在山东大学齐鲁医院住院治疗的CRSwNP患者22例,CRSsNP者17例作为试验组,取其鼻窦黏膜;收集18例鼻中隔偏曲患者的下鼻甲黏膜作为对照组,采用实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组中YKL-40、TLR4及核因子κB(NF-κB) mRNA的相对表达量;免疫组织化学染色检测YKL-40和TLR4蛋白在组织中的表达强度及分布.以SPSS 17.0软件分析各组中相关因子的表达差异及各因子间的相关性.结果 mRNA水平:YKL-40在CRSwNP组中的相对表达量为0.91 ±0.17,高于对照组的0.49±0.09,差异有统计学意义(=2.12 P ＜0.05).TLR4在CRSsNP组、CRSwNP中的相对表达量分别为0.88±0.19、0.67±0.13,均低于对照组的1.48±0.14,差异有统计学意义(t值分别为-4.11、-2.48,P值均＜0.05).NF-κB在CRSsNP组、CRSwNP中的相对表达量分别为0.69 ±0.13、0.72 ±0.14,均低于对照组的1.20 ±0.15,差异有统计学意义(t值分别为2.33、2.27,P值均＜0.05).蛋白质水平:YKL-40在CRSwNP组中的表达高于CRSsNP组和对照组(U值分别为72.5、73,P值均＜0.01);TLR4在CRSwNP和CRSsNP组中的表达低于对照组(U值分别为62、38,P值均＜0.01).CRSwNP组YKL-40与TLR4呈负相关(rmRNA=-0.741,P＜0.01;r蛋白质=-0.46,P＜0.05).结论 YKL-40在CRSwNP鼻窦黏膜组织高表达,且与TLR4呈负相关,提示二者可能存在交互作用,同时参与了CRSwNP的发生发展.
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CLEC4M介导HCV负载后树突状细胞的功能变化
目的 通过检测树突状细胞(DC)黏附HCV后的功能变化,探索CLEC4M介导HCV黏附DC的可能机制,初步揭示CLEC4M对DC介导的固有免疫应答的影响.方法 提取正常人外周血单个核细胞,并诱导分化为成熟DC,流式细胞术检测DC表面CLEC4M的表达情况.利用制备好的HCVcc病毒液感染成熟DC,并设置阳性对照组、甘露聚糖干扰组、CLEC4M单抗干扰组和空白对照组,分别收集感染各组的细胞上清液,采用ELISA法检测各组细胞上清液中IL-10与IL-12p70的水平变化.计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两组间比较采用LSD-t检验.结果 DC表面CLEC4M的表达阳性率高达82.6％.ELISA法检测各组细胞上清IL-10、IL-12p70的水平,4组间比较差异有统计学意义(F值分别为54.46、77.72,P值均＜0.001),其中阳性对照组中IL-10、IL-12p70的表达水平明显高于两干扰组(P值均＜0.001),阳性对照组、两干扰组IL-10、IL-12p70的水平均高于空白对照组(P值均＜0.001).结论 CLEC4M介导了HCV黏附DC,参与机体的免疫应答并调节DC免疫分子的表达.
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类几丁质酶YKL－40及Toll样受体4在慢性鼻窦炎伴鼻息肉与不伴鼻息肉患者中的表达差异
目的：探讨类几丁质酶YKL－40及Toll样受体（ TLR）4在慢性鼻窦炎伴鼻息肉与不伴鼻息肉患者中的表达差异。方法慢性鼻窦炎伴鼻息肉老年患者19例、不伴鼻息肉老年患者21例为研究组，取其窦口鼻道复合体黏膜；同期鼻中隔偏曲老年患者20例为对照组，取其下鼻甲黏膜。采用RT－PCR法检测各组标本中YKL－40、TLR4及核因子（ NF）－κB mRNA表达情况；免疫组化法检测标本中YKL－40、TLR4蛋白表达强度。结果mRNA水平：伴鼻息肉组和不伴鼻息肉组类几丁质酶YKL－40 mRNA表达均明显高于对照组（ P＜0．05）；伴鼻息肉组和不伴鼻息肉组 TLR4、NF－κB mRNA表达均明显低于对照组（P＜0．05）。不伴鼻息肉组YKL－40、TLR4之间无相关性（r＝0．087，P＞0．05）；伴鼻息肉组 YKL－40与 TLR4呈负相关（r＝－0．852，P＜0．05）。蛋白质水平：YKL－40在伴鼻息肉组的表达程度明显高于不伴鼻息肉组（P＜0．01）；不伴鼻息肉组与对照组 YKL－40表达程度之间差异无统计学意义（P＞0．05）。 TLR4在伴鼻息肉组和不伴鼻息肉组表达均明显低于对照组（P＜0．01）；伴鼻息肉组与不伴鼻息肉组 TLR4表达程度之间无统计学差异（P＞0．05）。伴鼻息肉组YKL－40与TLR4蛋白质表达呈负相关（r＝－0．571，P＜0．05）；不伴鼻息肉组YKL－40与 TLR4蛋白质表达无相关性（r＝－0．251，P＞0．05）。结论类几丁质酶 YKL－40在慢性鼻窦炎伴鼻息肉组织中高表达，且与 TLR4呈负相关，提示二者存在交互作用，同时参与了慢性鼻窦炎伴鼻息肉的发生、发展。
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European and Far East Mistletoes: Potential in Adjuvant Cancer Therapy
槲寄生属半寄生类植物,主要分布于欧洲及东亚,中国、韩国和日本很早以前就将其作为治疗用药.自上世纪二十年代,欧洲槲寄生提取物因具有免疫调节、抑制细胞生长/细胞毒素和稳定DNA,~性的作用,在欧洲被广泛应用于癌症的辅助治疗.对于槲寄生,其主要生物活性是糖粘合蛋白,槲寄生外源凝集素类和名为粘毒素的微蛋白.槲寄生外源凝集素类是毒性植物血凝素,糖和复合糖类(包括半乳糖和/或N-乙酰半乳糖胺)家族中的成员.活体内、外实验证实,植物体内分离出的槲寄生植物血凝素与重组合成的相比,在槲寄生提取物中起着更重要的生物活性作用.实验提示:甙类,多糖,胺类等其他成份也有抗癌活性.目前,在欧洲,关于抗癌治疗中是使用纯植物提取物还是植物血凝素的单一成份这一原则问题,包括使用野生植物凝血素还是重组的,正在讨论中.而商业性槲寄生的制备、鉴定、标准化及其生物活性测定也在讨论中.
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C型凝集素受体Langerin的研究进展
朗格汉斯细胞是存在于上皮能提呈抗原的树突细胞.Birbeck颗粒是其电子显微镜下的特征性细胞器,Langerin(CD207)是其细胞表型特征.Langerin除了表达于朗格汉斯细胞表面,也表达在真皮的树突细胞和机体其他组织细胞.近年来研究发现,Langerin能降低HIV-1感染的风险、抗真菌感染、调节接触超敏反应、辅助朗格汉斯细胞相关疾病的诊断及增强疫苗功效,希望能为探索相关皮肤疾病新的预防和治疗手段提供思路.
关键词： 朗格尔汉斯细胞 外源凝集素类 C型 Langerin/CD207 -
与皮肤过敏性疾病相关的C凝集素受体介导的信号传导通路研究现状
树突细胞通过其表面模式识别受体而识别病原体,并介导细胞内部的信号传递是诱导获得性免疫反应的关键.现已明确C型凝集素受体作为一种模式识别受体识别病原体上碳水化合物成分.大多数病原体和过敏原表面富含碳水化合物结构,这一结构义被称作糖指纹结构被C型凝集素受体所识别.识别碳水化合物结构后,树突细胞即被激活,触发细胞内信号级联反应,启动特异性细胞因子产生及调节,极化针对抗原的特异性T淋巴细胞.目前这一领域已渐渐被人们认识,并成为研究热点,介绍部分常见C型凝集素受体天然免疫信号途径及这一途径如何影响获得性免疫反应的一些进展.
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树突细胞相关C型凝集素-1受体介导的抗白念珠菌免疫作用及机制
树突细胞相关c型凝集素-1是一种主要的C型凝集素样受体,存在于多种细胞和组织中.它能够特异性识别白念珠菌细胞壁主要成分β-葡聚糖,进而诱导机体产生固有免疫反应和适应性免疫反应.其可单独或与其他模式识别受体相互协同完成上述过程.白念珠菌β-葡聚糖的暴露、树突细胞相关C型凝集素-1表达水平等因素可影响机体免疫效应的强度,对其进行调控将为自念珠菌感染预防和治疗提供一个新的方向.
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转谷氨酰胺酶3与树突细胞特异性捕获非整合素的细胞间黏附分子体外结合能力研究
目的 检测树突细胞特异性捕获非整合素的细胞间黏附分子(DC-SIGN)转染的HEK293T细胞和单核细胞来源的树突细胞(MDDC)膜表面DC-SIGN受体对转谷氨酰胺酶3(TG3)的识别和摄取能力.方法 采用脂质体转染的方法将融合有DC-SIGN基因片段及真核表达载体pGCMV-EGFP(增强绿色荧光蛋白)的质粒转染至HEK293T细胞,制备DC-SIGN-EGFP-HEK293T细胞;通过磁珠阴性分选出外周血中CD14+单核细胞,并通过粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和白细胞介素4诱导获得MDDC.利用激光共聚焦显微镜及流式细胞仪检测转染的HEK293T细胞及MDDC上DC-SIGN受体对TG3蛋白的识别和摄取,并设立空白对照组(不加入Alexa Fluor-647染料标记的TG3)和阴性对照组(仅加入Alexa Fluor-647染料).结果 TG3与HEK293T和MDDC细胞孵育3h后,激光共聚焦显微镜及流式细胞仪均显示,TG3可以被HEK293T及MDDC细胞上DC-SIGN受体识别并结合摄取入细胞内,流式细胞仪检测显示TG3与MDDC的结合可被DC-SIGN阻断抗体部分阻断.阴性对照组和空白对照组未见HEK393T或MDDC细胞对TG3的识别和结合.结论 TG3可以作为一种自身抗原被DC-SIGN受体识别、结合,并被介导摄取进入树突细胞.
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C型凝集素1受体参与人中性粒细胞体外杀伤白念珠菌活性的实验研究
目的 探讨人中性粒细胞能否通过C型凝集素1受体(dectin-1)识别白念珠菌细胞壁不溶性β葡聚糖来介导体外杀伤白念珠菌的活性.方法 100 mg/L β葡聚糖体外作用于中性粒细胞1、6、24 h后,实时荧光定量逆转录PCR分析dectin-1和Toll样受体2 mRNA表达水平.100 mg/Lβ葡聚糖体外分别刺激中性粒细胞15 min、2h、6h,或先用dectin-1抑制剂昆布多糖100 mg/L和50 mg/L预处理30 min后,再予100 mg/L β葡聚糖刺激2h,微量培养板荧光分析法检测中性粒细胞H2O2释放水平.昆布多糖预处理的中性粒细胞与白念珠菌体外共培养后,检测菌落形成单位(CFU).结果 β葡聚糖作用中性粒细胞1、6、24 h后,dectin-1 mRNA水平分别为2.8195±0.1669、5.4859±0.7244、3.6041±0.5372,均明显高于空白对照组(均P＜ 0.01).β葡聚糖刺激中性粒细胞15 min后H2O2水平为(64.55±15.67) μmol/L,2h时为(290.34±30.56)μmol/L,6h时为(208.54±26.88) μmol/L,与空白对照组(22.05±3.99) μmol/L比较,差异均有统计学意义(均P＜ 0.01)；100 mg/L和50 mg/L昆布多糖预处理组分别为(80.45±22.41) μmol/L和(130.42±44.55) μmol/L,与β葡聚糖刺激组相比,分别降低了73％和45％,差异均有统计学意义(P＜0.01).昆布多糖能明显抑制中性粒细胞体外杀伤白念珠菌的活性(均P＜ 0.01).结论 Dectin-1参与人中性粒细胞分泌H2O2以及对白念珠菌杀灭活性,为过继性粒细胞转输治疗系统性念珠菌感染提供初步依据.
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外阴营养不良、外阴鳞状上皮细胞癌凝集素标记免疫组化分析
目的:探讨外阴营养不良增生型、硬化苔藓型表皮细胞和外阴鳞状上皮细胞癌等细胞膜结构与凝集素受体结合表达特征及它们三者之间的关系.方法:对慢性外阴营养不良表皮增生型、苔藓硬化型及外阴鳞状上皮细胞癌3种状态下的细胞进行了8种凝集素免疫组织化学标记、分析、比较.结果:外阴营养不良增生型表皮各层细胞细胞膜与刀豆凝集素(ConA)、扁豆凝集素(LCA)、花生凝集素(PNA)、蓖麻凝集素(RCA-1)和大豆凝集素(SBA)结合强度弱,其表皮细胞细胞核膜与ConA、PNA和麦胚凝集素(WGA)有中等强度结合.外阴营养不良硬化苔藓型表皮各层细胞细胞膜与ConA 、RCA-1、SBA和WGA结合强度弱,而与LCA不结合,其12例中的8例与荆豆凝集素(UEA-1)发生较弱的结合.外阴鳞状上皮细胞癌癌细胞与8种凝集素均结合,其12例中的7例其癌细胞膜与双花扁豆凝集素(DBA)弱结合,癌细胞膜与UEA-1强结合,但癌巢中央细胞团不与UEA-1结合,癌细胞细胞核膜与ConA、LCA、RCA-1呈强结合.结论:凝集素标记免疫组织化学染色可作为诊断、鉴别诊断外阴营养不良增生型、硬化苔藓型和外阴鳞状上皮细胞癌新的指标.具有恶变潜能的增生型外阴营养不良与外阴鳞状上皮细胞癌,两者细胞核膜凝集素标记有相似之处,提示在外阴组织的癌变过程中,细胞核膜凝集素标记的异常表达是一个早期标识,糖基和糖蛋白代谢的异常可能是细胞发生癌变早期的表现之一.
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肝癌发生过程中的血清糖蛋白凝集素亲和谱比较
目的 应用凝集素亲和技术寻找肝癌高危人群进展为肝癌过程中的特征性血清糖蛋白凝集素亲和谱,并探讨其生物学意义.方法 对广西肝癌高发区肝癌高危队列定期进行复查随访,将队列中陆续新发的肝癌、肝硬化、肝炎患者分别组成肝癌组、肝硬化组、肝炎组,并匹配正常对照组;应用凝集素芯片技术,比较肝癌组、肝硬化组、肝炎组及正常对照组的血清糖蛋白凝集素亲和谱,并用Western blot方法对有意义的差异性糖蛋白进行验证.采用独立样本t检验对组间亲和信号强度进行比较.结果 在肝癌的发生过程中,血清糖蛋白表现出对橙黄网胞盘菌凝集素、尾穗苋凝集素(ACL)、伴刀豆凝集素(ConA)、小扁豆凝集素(LCA)、桑橙凝集素、槲寄生凝集素、红腰果E型凝集素(PHA-E)、红腰果L型凝集素(PHA-L)、豌豆凝集素(PSA)、蓖麻凝集素(RCA-I)、西泽接骨木凝集素(SNA)、马铃薯凝集素(STL)、槲寄生凝集素(VAL)和麦胚凝集素(WGA)14种凝集素的亲和信号增强(P＜ 0.05),提示在肝癌的发生过程中,患者血清里可能存在增多的岩藻糖、N-乙酰葡糖胺、N-乙酰半乳糖胺、甘露糖、平分型GlcNAc、末端β 1-4链接半乳糖等结构.将肝癌组的亲和信号增强与其他各组比较,除SNA在肝癌组与肝炎组的亲和信号强度差异无统计学意义(P＞0.05)外,其他凝集素的肝癌组与其他组比较,差异均有统计学意义(P值均＜0.05).结论 广西肝癌高危人群从HBsAg阳性、肝炎、肝硬化,直至进展为肝癌的过程中,血清糖蛋白聚糖的变化具有特征性的差异,提示其与肝癌的发生和发展密切相关,为寻找肝癌早期诊断相关的糖标志物提供了重要参考.
