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结核分枝杆菌肝素结合血凝素在肺结核及肺外结核中的免疫作用研究
目的 探讨结核分枝杆菌肝素结合血凝黏附素(heparin-binding hemagglutinin adhesin,HBHA)在不同结核感染状态人群中免疫反应及可能的诊断价值.方法 用天然的HBHA刺激选取阴性对照、潜伏感染者、肺结核和肺外结核患者,分离外周血单个核细胞,加入共培养,收集细胞培养上清,ELISA方法检测上清中IFN-γ的浓度,运用非参数检验的方法统计分析.结果 4组HBHA特异的IFN-γ分泌水平分别为49.5、781.9、341.8、214.4 pg/ml,潜伏感染者组远高于其他各组,HB-HA刺激后肺结核和肺外结核之间的IFN-γ分泌水平无统计学差异(U=1 901.5,P=0.448).结论 HBHA特异的IFN-γ分泌水平,有利于鉴别健康人群中的潜伏感染者,HBHA可能具有一定的免疫保护作用,尽管HBHA与肺外结核发病相关,其特异的细胞免疫在肺结核和肺外结核间无统计学差异.
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复苏促生长因子结构域及其突变体重组蛋白诱导小鼠免疫应答的研究
目的 评价复苏促生长因子结构域蛋白(Rpfd)及其突变体蛋白(Rpfd1、Rpfd2)等3种重组蛋白的免疫效能.方法 2011年11月至2012年2月间,分别以本实验前期制备的重组蛋白Rpfd(A组)、Rpfd1(A1组)、Rpfd2(A2组)分别于0、2、4周免疫无特定病原体(SPF)级BALB/c小鼠,每组14只,并分别以BCG(B组)和生理盐水(C组)同期免疫同种小鼠各14只作为对照.第5周,每组取7只小鼠摘眼球取血,ELISA法检测血清特异性抗体、血清IFN-γ和IL-2表达水平；第8周,每组剩余7只小鼠用1×105 CFU结核分枝杆菌标准株H37Rv感染小鼠,第9周检测感染后小鼠血清细胞因子IFN-γ和IL-2水平.结果 (1)抗体水平:①Rpfd抗原包被.A1组刺激小鼠产生抗体A450的检测值(0.990±0.272)高于B组(0.631±0.180) (t=4.635,P＜0.05)；A2组(1.470±0.455)高于B组(t=6.634,P＜0.05).②Rpfd1抗原包被.A组刺激小鼠产生抗体A450的检测值(1.030±0.304)高于B组(0.573±0.004)(t=5.276,P＜0.05)；A1组(1.368±0.171)高于B组(t＝17.20,P＜0.05)；A2组(2.766±0.245)高于B组(t＝31.643,P＜0.05)；③Rpfd2抗原包被.A1组刺激小鼠产生抗体A450的检测值(1.055±0.202)高于B组(0.538±0.100)(t＝8.009,P＜0.05)；A2组(1.605±0.544)高于B组(t=8.192,P＜0.05).(2) IFN-γ水平:①感染前.A组刺激小鼠产生IFN-γ水平[(553.47±132.00) pg/ml]高于B组[(385.28±129.07) pg/ml](t=3.150,P＜0.05)；②感染后.A1蛋白组刺激小鼠产生IFN-γ水平[(492.41±211.74) pg/ml]高于B组[(335.36±207.72) pg/ml](t＝2.874,P＜0.05)；A2组[(543.09±223.07) pg/ml]高于B组(t=3.15,P＜0.05).(3) IL-2水平:①感染前.A组刺激小鼠产生IL-2水平[(1490.05±215.35) pg/ml]高于B组[(718.70±269.29) pg/ml](t=7.763,P＜0.05)；A1组[(1738.91±358.40) pg/ml]高于B组(t=7.903,P＜0.05)；A2组[(2270.74±193.40) pg/ml]高于B组(t=16.308,P＜0.05)；②感染后.A组刺激小鼠产生IL-2水平[(806.81±306.39) pg/ml]高于B组[(335.26±176.81) pg/ml](t=4.627,P＜0.05)；A1组[(1373.22±143.75) pg/ml]高于B组(t=15.90,P＜0.05).结论 Rpfd、Rpfd1、Rpfd2蛋白具有启动宿主体液免疫功能及增强宿主细胞免疫功能的双重作用,可能成为预防及治疗Mtb感染的免疫新策略.
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干扰素体外释放酶联免疫法在结核病诊断中的价值
目的 分析于扰素体外释放酶联免疫法(quantitative diagnostic kit for Mycobacterium tuberculosis IFN-γ release assay,TB-IGRA)在结核病诊断中的应用价值.方法 用北京万泰生物药业股份有限公司生产的结核分枝杆菌相关γ-干扰素检测试剂盒(体外释放酶联免疫法)(Wantai quantitative diagnostic kit for Mycobacterium tuberculosis IFN-γ release assay,WT-IGRA)(简称WT试剂)和澳大利亚Cellestis有限公司生产的QuantiFERON(R)-TB( QuantiFERON(R)-TB GOLD in tube,QFT-GIT)(简称QFT试剂)检测病区与门诊结核患者(249例)及健康者(140例)的全血标本,结果与其结核菌素试验( PPD)、痰结核分枝杆菌培养及痰涂片结果相比较,分析TB-IGRA阳性率、特异度及试剂间的相关性.结果 249例结核病患者,WT试剂和QFT试剂阳性率分别为76.3%(190/249)和67.1%(167/249),特异度都是83.3%(100/120)；痰菌阳性和痰菌阴性结核病组,WT试剂阳性率分别为74.1%(43/58)和76.1%(83/109),差异无统计学意义(x2=0.082,P＞0.05)；QFT试剂阳性率分别为67.2%(39/58)和65.1%(71/109),差异无统计学意义(x2=0.075,P＞0.05)；WT试剂与QFT试剂总符合率为84.3%.结论 TB-IGRA对结核病有一定的诊断价值.
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γ干扰素和转化生长因子β水平与支气管结核治疗效果的关联性研究
目的 探讨血清和支气管灌洗液中γ干扰素(IFN-γ)和转化生长因子β(TGF-β)水平与支气管结核(EBTB)治疗效果之间的关联性.方法 采用酶联免疫吸附(ELISA)方法测定78例EBTB患者支气管镜下介入治疗前后血清和支气管灌洗液中IFN-γ和TGF-β的水平,以及50名健康对照血清中IFN-γ和TGF-β的水平.EBTB患者被分成2组:一组治疗后表现为支气管狭窄,另一组治疗后未表现为支气管狭窄.结果 研究显示:(1)与对照组相比,EBTB患者组支气管灌洗液中IFN-γ和TGF-β水平升高.(2)78例EBTB患者治疗后,27例患者显示有支气管的纤维狭窄,51例患者没有支气管狭窄.支气管狭窄组治疗前血清TGF-β水平[(783.21±478.67) pg/ml]比无支气管狭窄组[(1258.60±573.29) pg/ml]低(U=3.8905,P＜0.01),而支气管灌洗液中TGF-β[(1219.54±439.27) pg/ml]和IFN-γ [(2152±1594.33) pg/ml]水平明显高于无狭窄组[(779.24±395.91)pg/ml,(1006.30±752.57)pg/ml] (U值分别为4.3553和3.5315,P值均＜0.01).结论 (1) EBTB患者支气管灌洗液中IFN-γ和TGF-β水平升高可能与支气管结核发病机制有关.(2)初始血清TGF-β低水平和支气管灌洗液IFN-γ和TGF-β高水平与治疗后支气管纤维狭窄有关.
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ADA、IFN-γ及结核分枝杆菌抗体联合检测对结核性胸膜炎的诊断价值
目的 探讨ADA活性、IFN-γ含量和结核分枝杆菌抗体联合检测对结核性胸膜炎的诊断价值.方法 检测56例已经经组织病理学或病原学明确诊断的结核性胸膜炎患者,20例经细胞学或组织病理学明确诊断的恶性胸腔积液患者,以及12例其他渗出性胸腔积液患者的胸液和血清中的ADA活性和IFN-γ含量以及抗结核分枝杆菌抗体阳性率,经统计学处理后,评价各项指标对结核性胸膜炎诊断的灵敏度、特异度及临床诊断符合率.结果 结核性胸液中ADA活性、IFN-γ含量分别为(50.98士13.07)U/L;(139.46±70.43)pg/ml,结核分枝杆菌抗体阳性率60.7%,与恶性胸液组和其他组比较差别有统计学意义,P<0.05.以45 U/L为临界值,ADA对结核性胸膜炎诊断的灵敏度为80.4%,特异度96.9%,临床诊断符合率为86.4%;IFN-γ以100pg/ml为临界值对结核性胸膜炎诊断的灵敏度为83.9%,特异度93.8%,临床诊断符合率为87.5%;胸液中结核分枝杆菌抗体检测对结核性胸膜炎诊断的灵敏度为60.7%,特异度为87.5%,临床诊断符合率为70.5%.以3项指标联合检测任何2项阳性对结核性胸膜炎诊断的灵敏度为92.9%,特异度100%,临床诊断符合率为95.5%.结论 ADA活性、IFN-γ含量和结核分枝杆菌抗体联合检测可极大地提高结核性胸膜炎的诊断效能.
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两种结核分枝杆菌相关r-干扰素定量检测试剂盒检测结核分枝杆菌感染结果比较研究
目的 评价新的国产结核分枝杆菌相关r-干扰素定量检测试剂盒(TB-IGRA)--体外释放酶联免疫法诊断结核病的敏感性和特异性.方法 采用TB-IGRA试剂盒对319例肺结核、23例肺外结核、39例排除结核的肺部疾病和104例健康人群的血清标本进行检测,同时与澳大利亚Cellestis公司的QuantiFERON-TB GOLD in tube(QFT-GIT)试剂进行平行比较分析.结果 采用TB-IGRA试剂,检测肺结核病人的敏感性为90.9%,肺外结核的敏感性为78.3%,特异性为76.9 %;采用QFT-GIT试剂,检测肺结核病人的敏感性为88.4%,肺外结核的敏感性为78.3%,特异性为80.4%,2种试剂进行平行比较,敏感性和特异性方面差异无统计学意义.结论 TB-IGRA试剂盒对诊断结核病有较高的敏感性和特异性,可用于结核病尤其是涂阴肺结核和肺外结核的辅助诊断.
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结核分枝杆菌CFP10-ESAT6-CFP21融合蛋白克隆表达及全血IFN-γ的检测
目的 构建结核分枝杆菌CFP10-ESAT-6-CFP21(CE21)融合蛋白的重组质粒,通过IFN-γ的检测探讨CE21在结核病检测中的价值.方法 通过聚合酶链式反应(PCR)扩增获得CFP21和CFP10-ESAT-6(CE)基因片段,分别连接到pMD18-T,并将两片段2次连接到表达载体pET21a(+)中,获得pET21a-CFP10-ESAT-6-CFP21重组质粒;经表达纯化和复性后,去除内毒素,利用酶联免疫吸附试验检测48例结核病患者、30例非结核肺部疾病患者及32例健康对照者全血中IFN-γ的释放量.结果 CE21经SDS-PAGE分析后相对分子质量为45,与预期大小一致.CE21融合蛋白全血标本IFN-γ的检测,结核组阳性率为72.9%,非结核疾病对照组和健康对照组阳性率 分别为3.3%和3.1%.结论 成功获得CE21融合蛋白,IFN-γ的检测证明该融合抗原具有良好的结核病检测价值.
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γ干扰素活化的THP-1源巨噬细胞杀伤荧光BCG的实验研究
目的 研究γ干扰素(IFN-γ)活化的THP-1源巨噬细胞对BCG的杀伤作用,并探讨其杀伤机制是否与自噬有关.方法 Phorbol-12-myristate-13-acetate(PMA,也称佛波酯)诱导THP 1分化成巨噬细胞.牛分枝杆菌减毒株荧光BCG以感染复数MOI(multiplicity of infection,细菌数与细胞数的比例)10∶1感染未活化(Control组)、IFN-γ活化(IFN γ组)、Rapamycin诱导自噬(Rapa组)、3甲基腺嘌呤(3-MA)抑制自噬(IFN-γ+3-MA组)4组不同预处理的巨噬细胞.感染48 h后,超纯水裂解细胞,收集裂解液和培养上清混合,相同比例取各组混合液10μl,连续10倍稀释3次涂7H10平板培养基,置37℃生化培养箱培养,第3至4周观察记录菌落数,计算生存率[control组的菌落数为分母,其他组(包括control组)的菌落数为分子相除得到的数值为生存率].同时在感染过程的不同时间点裂解细胞提取总蛋白,以Western blot方法检测自噬标志蛋白LC3B的表达,监测细胞自噬水平的变化.实验结果数据以3次重复实验数据的“(-x)±s”形式展示(Western blot结果除外,只采用其中一个结果数据为代表).用SPSS 17.0软件进行统计分析:巨噬细胞贴壁率比较和凋亡率比较用两独立样本t检验;巨噬细胞活化后不同时间点分泌的TNF-α浓度比较和BCG感染各组巨噬细胞后的生存率比较用One-Way ANOVA检验,以P＜0.05为差异有统计学意义.结果 BCG感染各组巨噬细胞48 h后的生存率:Control组为(100％±0％),IFN-γ组(45％±3％),Rapa组(48％±3％),IFN-γ+ 3-MA组(91％±2％).BCG生存率经One-Way ANOVA检验,与Control组(未活化组)比较:IFN-γ组BCG生存率明显下降(P=0.01),细胞自噬水平明显增高;Rapa组BCG生存率明显下降(P=0.01),细胞自噬水平明显增高;IFN-γ+ 3-MA组BCG生存率无下降(P=0.13),细胞自噬水平无增高.结论 BCG感染巨噬细胞,或者说巨噬细胞吞噬BCG,两者的相互作用微妙而复杂.巨噬细胞在IFN-γ活化期间遭遇BCG,可以明显杀伤BCG,杀伤机制与自噬有关.
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结核分枝杆菌IFN-γ酶联免疫斑点检测的建立和初步应用
目的 建立结核分枝杆菌特异性IFN-γ酶联免疫斑点(Elispot)检测技术,初步评价其在诊断结核分枝杆菌感染的敏感性和特异性.方法 采用以早期分泌抗原靶6 kDa蛋白(ESAT-6)抗原为主的重组蛋白库、多肽库为抗原,建立结核分枝杆菌特异性IFN-γElispot检测技术(简称Elispot);应用该技术对32例肺结核病患者、205例健康对照者和18例肺部其他疾病对照的外周血结核菌特异性IFN-γ水平进行检测;结核病人和部分健康对照同时采用全血干扰素试剂(Quantiferon-TB-Gold,QFT-G)进行平行检测.结果 采用Elispot检测,结核患者的阳性率高(75.0%),显著高于健康对照(7.3%)和其他肺部疾病患者(11.1%),结核患者反应水平与其他两组比较均差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.05).采用QFT-G在结核病人中的IFN-γ应答阳性率为78.1%,与Elispot检测结果进行配对比较无显著性差别(χ2=1.6,P＞0.05).结论 建立了结核菌特异性IFN-γElispot检测技术,该技术在诊断结核菌感染的初步应用显示出较好的特异性和敏感性,但仍需进一步扩大样本数观察.
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联合检测IFN-γ、VEGF-C、CRP及ADA对结核性与恶性胸腔积液鉴别诊断的价值
目的 探讨干扰素-γ(IFN-γ)、血管内皮生长因子(VEGF-C)、C-反应蛋白(CRP)及腺苷脱氨酶(ADA)在结核性与恶性胸腔积液鉴别诊断中的应用价值.方法 检测122例临床:确诊的胸腔积液患者(恶性胸腔积液56例,结核性胸膜炎48例,其他类型18例)胸水和血清中的IFN-γ、VEGF-C、CRP及ADA含量.结果 结核组的IFN-γ、CRP浓度及ADA活性明显高于恶性肿瘤组,差异有统计学意义(P＜0.01),根据受试者工作特征(ROC)曲线结果判断,以100ng/L为临界值,IFN-γ对结核性胸腔积液诊断的灵敏度、特异性分别为83.1％、92.3％；以45U/L为临界值,ADA对结核性胸腔积液诊断的灵敏度、特异性分别为85.6％、96.3％；以110mg/L为临界值,CRP对结核性胸腔积液诊断的灵敏度、特异性分别为79.1％、84.2％;三项指标联合检测,其灵敏度、特异性分别达到87.8％和86.0％.恶性胸腔积液中VEGF-C高于结核性及其他类型胸腔积液(P＜0.01)；VEGF-C/ADA≥8对恶性胸腔积液诊断的灵敏度、特异性分别为86.3％、82.6％；VEGF-C/ADA≤3对结核性胸腔积液诊断的灵敏度、特性度分别为85.1％、87.1％.结论 联合检测IFN-γ VEGF-C、CRP及ADA可以提高结核性胸膜炎诊断的灵敏度及特异性,VEGF-C与ADA浓度比值对胸腔积液的鉴别诊断具有较好的临床价值.
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干扰素-γ质粒基因转染对哮喘小鼠支气管肺泡灌洗液炎症细胞的影响
目的观察气道内干扰素-γ(IFN-γ)基因转染对哮喘小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)嗜酸性粒细胞、中性粒细胞和淋巴细胞的影响.方法 C57BL/6小鼠40只,随机分为4组,每组10只,分别为正常对照组、哮喘组、模型空质粒干预组(空质粒组)和模型干扰素质粒干预组(干扰素组).卵白蛋白(OVA)抗原溶液腹腔注射致敏,滴鼻激发造模.对照组用生理盐水代替OVA;空质粒组和干扰素组分别经鼻滴入空质粒或重组干扰素质粒.观察各组实验小鼠的哮喘症状以及BALF中IFN-γ水平和各类炎症细胞的变化.结果哮喘组BALF中IFN-γ水平比正常对照组显著降低;哮喘小鼠干扰素质粒气道内转导后哮喘症状明显减轻,BALF中IFN-γ水平显著升高,同时嗜酸性粒细胞、中性粒细胞和淋巴细胞显著减少.结论气道内转染干扰素质粒能有效改善哮喘小鼠的症状和气道炎症.
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γ-干扰素对大鼠肾系膜细胞转化生长因子β/Smad信号通路和基质金属蛋白酶2及其组织抑制因子2表达的影响
目的 观察γ-干扰素(IFN-γ)处理培养的大鼠肾系膜细胞(mesangial cell,MsC)的增殖、转化生长因子(TGF)-β/Smad信号通路和基质金属蛋白酶2(MMP-2)及其组织抑制因子2(TIMP-2)基因的转录及蛋白表达的变化,探讨IFN-γ减轻肾纤维化的可能作用机制.方法 用不同浓度的IFN-γ刺激MsC,MTT法检测对细胞增殖的影响;100 IU/ml IFN-γ作用于MsC后,在不同时间(0、0.5、1、2、4、6、12、24 h)收集细胞,分别应用即时逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot检测其TGF-β/Smad信号通路(Smad3、Smad7)、MMP-2/TIMP-2转录及蛋白表达的变化.结果 经IFN-γ处理的MsC,其增殖不受影响;Smad7的基因转录及蛋白表达在IFN-γ作用0.5 h后立即升高,仅维持在6 h内,而Smad3的升高则在作用6 h之后;MMP-2的基因转录及蛋白表达在作用6 h时升高,而TIMP-2在6 h时则降低.结论 IFN-γ可能通过影响MsC的TGF-β/Smad信号通路,增强MMP-2和降低TIMP-2的转录和表达而起到减轻肾组织纤维化的作用.
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HIV-1B/C重组病毒感染者Gag特异性T淋巴细胞免疫应答的研究
目的 研究中国主要流行的HIV-1 B/C重组毒株感染者Gag特异性T淋巴细胞反应特征.方法 本研究以10例感染时间＜1年和25例感染时间＞3年未接受抗病毒治疗的HIV-1 B/C重组毒株感染者为研究对象,以10例HIV-1阴性健康人作为对照,用Elispot方法检测其针对HIV-1B/C同义B Gag重叠多肽产生γ干扰素的特异性T淋巴细胞反应.结果 8例(8/10)感染时间＜1年的HIV-1 B/C重组毒株感染者产生Gag特异性分泌γ干扰素的T淋巴细胞反应,主要识别散在分布的五条多肽;17例(68％)感染时间＞3年的感染者产生反应,主要识别p17区域内的一条和p24区域内六条多肽.感染时间＞3年组产生IFN-γ的特异性T淋巴细胞反应强度与病毒载量呈明显正相关(P =0.0318,r=0.519),感染时间＜1年的感染者反应强度明显高于感染时间＞3年的感染者(P=0.021).健康人对照组无阳性反应.结论 HIV-1 B/C重组病毒感染者在疾病进程不同阶段识别Gag的不同区域.
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慢性乙型病毒性肝炎患者趋化因子IP-10、Rantes与氧化损伤的关系研究
目的 观察慢性乙型病毒性肝炎(CHB)患者血清趋化因子IP - 10、Rantes和氧化损伤的改变,探讨趋化因子和氧化应激在CHB发病机制中的作用.方法 采集70例CHB患者和10例健康志愿者血液标本,采用ELISA法检测血清趋化因子IFN-γ诱导蛋白10(IP-10)、正常T细胞表达分泌的活化调节因子(Rantes)表达水平及还原型谷胱甘肽(GSH)、氧化型谷胱甘肽(GSSG)水平,并进行相关性分析.结果 CHB患者血清IP-10、Rantes水平均明显高于健康对照者,并且IP-10、Rantes水平分别与丙氨酸转氨酶水平呈正相关.CHB患者GSH、GSH/GSSG水平均明显低于健康对照者,降低的GSH、GSH/GSSG水平分别与患者ALT水平呈负相关.IP-10、Rantes水平分别与GSH、GSH/GSSG呈负相关.结论 趋化因子和氧化应激相互作用,参与慢性乙型病毒性肝炎的发生和发展.
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慢性乙型肝炎患者树突状细胞体外功能恢复及诱导T细胞反应研究
目的 研究慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血树突状细胞(DC)和T细胞体外功能,并尝试恢复功能的方法.方法 12例CHB患者作为研究对象,10例健康人作为正常对照研究.对外周血DC进行表型分析和混合淋巴细胞反应(MLR)测定,并分别用HBsAg或HBcAg作为抗原负载DC,后用ELIspot法检测产生IFN-γ的细胞频数.结果 CHB患者外周血DC共刺激分子水平表达降低,刺激MLR能力不足.经过体外补充促成熟细胞因子,DC缺陷能够得到部分纠正.成熟DC较不成熟Dc刺激MLR和诱导产生IFN-γ的T细胞能力强,HBcAS比HBsAS有更强的免疫原性.结论 慢性CHB患者外周血DC功能缺陷,能够通过补充促成熟因子纠正.成熟DC比不成熟DC显示出更强的MLR反应和诱导IFN-γ产生细胞的能力,这提示HBV蛋白负载DC作为治疗性疫苗具有可行性.
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实验性肝纤维化TGF-β1/Smad的表达及γ-干扰素对其的作用
目的 观察γ-干扰素(IFN-γ)对四氯化碳(CCl4)诱导的大鼠肝纤维化的治疗效果,并探讨其可能的机制.方法 30只雄性大鼠用CCl4诱导致肝纤维化,随机分成2组(模型组、IFN-γ治疗组),连续用药12周,观察肝组织病理、血清透明质酸(hyaluronic acid,HA)、血清转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGF-β1)、肝组织切片TGF-β1、转化生长因子βⅠ型受体(transforminggrowth factor β receptor,TβR-Ⅰ)、Smad2/3的表达.结果 ①肝组织病理:与正常组比较,模型组大鼠肝组织都有不同程度的炎症和纤维化产生.模型组纤维化程度较正常对照组明显,差异有统计学意义(P＜0.05)；γ-干扰素治疗组纤维化程度较模型组显著改善,差异有统计学意义(P＜0.05)；②肝纤维化指标(HA、TGF-β1):γ-干扰素治疗组大鼠HA及TGF-β1较模型组均降低(P＜0.05),③TGF-β1/Smad基因蛋白:免疫组织化学检测显示,与模型组相比,IFN-γ治疗组大鼠肝脏中TGF-β1、TβR-Ⅰ和Smad2/3蛋白表达均显著减弱,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 IFN-γ治疗组具有显著抗肝纤维化作用,对TGF-β1/Smad信号转导通路的影响可能为其作用机理之一.
关键词： 肝硬化 受体/转化生长因子β 蛋白质Smad 干扰素Ⅱ型 -
IFN-γ释放试验、腺苷脱氨酶活性检测和结核抗体检测用于结核性胸腔积液鉴别诊断的差异研究
目的 目前有多种方法可以用于结核性胸腔积液的诊断.本研究比较了IFN-γ释放试验(IGRAs)、腺苷脱氨酶活性检测(ADA)和结核抗体检测(TB-ab)三种方法.方法对63例胸腔积液患者分别使用IFN-γ释放试验、腺苷脱氨酶活性检测和结核抗体检测三种方法进行鉴别诊断.IFN-γ释放试验、腺苷脱氨酶活性检测和结核抗体检测均根据厂家提供的方案进行.结果 三种方法都有一定的诊断意义,但在效果上有差别.其中,结核抗体检测敏感性和特异性低.尽管腺苷脱氨酶活性检测的特异性较高,但其仅仅检测到58.14％的患者,敏感性较低.IFN-γ释放试验检测到了79.07％的患者,并且具有较高的特异性.结论IFN-γ释放试验检测具有比腺苷脱氨酶活性检测和结核抗体检测更好的效果,推荐在结核性胸腔积液的诊断中使用IFN-γ释放试验.
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乙型肝炎病毒C蛋白对NK细胞功能影响的体外研究
目的 研究乙型肝炎病毒C蛋白在NK细胞中的表达及其对NK细胞功能的影响.方法 用脂质体转染法将HBV C基因真核表达载体pHBI-CMV-HBC转入NK-92细胞,通过WesternBlot检测C基因在NK-92细胞中表达,用ELISA法检测NK细胞分泌IFN-γ水平,MTT法检测NK细胞对HepG2细胞的细胞毒作用.结果 Western Blot证实转染有pHBI-CMV-HBC的NK-92细胞能表达HBV C蛋白.转染了重组真核表达质粒的NK-92细胞IFN-γ水平均高于空质粒对照组和空白对照组(P<0.01).与两对照组相比,重组真核表达质粒转染组NK-92细胞对于HepG2细胞的细胞毒活性明显提高,差异具有统计学意义(P<0.01).结论 HBc基因瞬时高表达可影响NK-92细胞分泌IFN-γ和细胞毒功能.
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卡维地洛(carvedilol)对柯萨奇病毒B3感染小鼠γ-干扰素活性及氧自由基的影响
目的 探讨卡维地洛对柯萨奇病毒B3(CVB3)病毒性心肌炎小鼠的作用.方法 随机将80只小鼠分为3组:正常对照组(n=20),心肌炎组(n=30)与卡维地洛组(n=30),利用BALB/c小鼠感染CVB3建立病毒性心肌炎模型,感染24 h后每日灌胃给予卡维地洛10 mg/kg直至第14天末,分别于接种第7天和第14天随机从各组抽取若干只小鼠取血后处死并留取心脏等标本.结果 卡维地洛降低病毒性心肌炎小鼠急性期的病死率,显著减轻心脏病理损伤,显著减低HW/BW(HW,心脏重量;BW,身体重量)比值;卡维地洛干预后第7天小鼠心肌IFN-γ表达水平显著高于心肌炎对照组,MDA含量显著降低;干预后第14天SOD含量显著增加,MDA含量显著降低.结论 卡维地洛通过增加心肌IFN-γ表达水平与抗氧化的双重作用减轻感染小鼠的心肌损害,提高生存率,起到保护性作用.
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不同药物雾化吸入对重型颅脑损伤大鼠继发肺损伤的作用研究
目的 探讨γ-干扰素(γ-IFN)和庆大霉素雾化吸入对重型颅脑损伤大鼠继发肺损伤的作用,并从炎性因子角度探讨其作用机制.方法 将76只雄性SD大鼠随机分为正常对照组(N)、单纯损伤组(T)、生理盐水对照组(C)、γ-IFN雾化吸入组(Ⅰ)、庆大霉素雾化吸入组(G)共5组.用光镜、电镜观察肺组织形态学改变,用放射免疫法监测支气管肺泡灌洗液(BALF)中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-8(IL-8)的水平.结果 Ⅰ组肺组织形态学改善明显,其次为G组;Ⅰ组大鼠BALF中TNF-α水平在创伤后1～3d显著低于C、G组(P＜0.05);Ⅰ组大鼠BALF中IL-8水平在损伤3～7d时显著低于C组(P＜0.01),7d时明显低于G组(P＜0.05).结论 γ-IFN和庆大霉素雾化吸入均对重型颅脑损伤大鼠的继发肺损伤具有一定改善作用,但γ-IFN的效果明显优于庆大霉素,其作用机制可能与下调肺局部TNF-α、IL-8等炎性因子的分泌有关.
