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转染干扰素-γ的神经前体细胞治疗小鼠脑胶质瘤的实验研究
目的:探讨小鼠干扰素-γ(mIFN-γ)基因修饰胚胎干细胞诱导而来的神经前体细胞(NPC)用于脑胶质瘤基因治疗的可行性.方法:小鼠胶质母细胞瘤G422经NPCs/pTracer/mIFN-γ条件培养液培养后,MTT法体外观测其对瘤细胞的抑制效应,TUNEL法观测凋亡.DAPI标记瘤细胞,建立小鼠脑胶质瘤模型,NPCs/pTracer/mIFN-γ经立体定向方法注入小鼠颅内,荧光显微镜下观察肿瘤生长情况.结果:NPCs/pTracer/mIFN-γ条件培养液培养的胶质瘤细胞生长受到抑制,与对照组比较差异有统计学意义,χ2=7.21,P=0.032.以50%条件培养液处理24、48和72 h后每中倍视野凋亡细胞数分别为2.5±0.9、3.4±1.2和6.6±2.0,显著高于对照组,t值分别为2.37、2.56和2.80,P值分别为0.041、0.034和0.022.将基因修饰的NPC移植到小鼠脑肿瘤模型后,该细胞能向肿瘤细胞方向迁移,与肿瘤浸润范围一致并可追踪远地浸润的瘤细胞.第14天瘤体积测量,对照组和治疗组分别为(62.09±0.55)mm3和(27.54±0.86)mm3,治疗组显著小于对照组,t=4.16,P=0.015.NPC/pTracer/mIFN-γ治疗组平均生存时间为(28.5±0.98)d,较对照组延长,t=3.81,P=0.012.结论:IFN-γ基因修饰胚胎干细胞诱导而来的NPC可稳定表达外源基因,是脑胶质瘤基因治疗的良好载体.
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IL-27基因转染人食管癌细胞诱导PBMC产生IFN-γ和IL-12的研究
目的:探讨小鼠白介素(mIL-27)基因转染人食管癌细胞株诱导正常人外周血单个核细胞(PBMC)产生IFN-γ和IL-12的作用.方法:以逆转录病毒作为载体,将mIL-27基因转染入人食管癌细胞株Eca109获得表达mIL-27的阳性细胞克隆(Eca109/mIL-27),RT-PCR检测目的基因的表达,用MTT法检测转基因mIL-27对细胞增殖的影响,用ELISA法检测其诱导正常人PBMC产生IFN-γ和IL-12的能力.结果:建立了表达mIL-27基因的人食管癌细胞株,Eca109/mIL-27细胞中有mIL-27p28和EBI3亚基基因表达,而Eca109/LXSN和Eca109细胞中未见表达,P＜0.01;Eca109/mIL-27与Eca109/LXSN和Eca109体外的体外增殖差异无统计学意义,P＞0.05;Eca109/mIL-27诱导正常人PBMC产生IFN-γ和IL-12的含量高于Eca109/LXSN和Eca109,P＜0.01.结论:IL-27基因转染人食管癌细胞后可以诱导PBMC产生IFN-γ和IL-12的能力提高,提示可以用于肿瘤的免疫治疗.
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γ-干扰素对TRAIL诱导人甲状腺癌细胞凋亡影响的研究
目的:探讨γ-干扰素(IFN-γ)对TRAIL诱导人甲状腺癌细胞凋亡作用的影响.方法:流式细胞术、蛋白质印迹法、蛋白质羰基测定法和共聚焦显微镜分别用于检测细胞凋亡、GAPDH蛋白表达、氧化损伤程度和细胞核内GAPDH免疫染色表达.运用微小RNA干扰技术下调GAPDH表达.结果:与耐药细胞系相比,TRAIL敏感的FRO和KTC2细胞核提取液中可见不同程度的GAPDH蛋白表达、细胞内羰基蛋白显著集聚.IFN-γ可增加耐药ARO细胞核中GAPDH水平.IFN-γ或TRAIL单药组细胞凋亡率均＜5%,而IFN-γ/TRAIL联合组细胞凋亡率达28.5%.siGAPDH组与siRNA对照组间细胞凋亡率差异有统计学意义(t=4.909,P=0.08),使对照组细胞凋亡率下降11%.结论:IFN-γ加强TRAIL诱导人甲状腺癌细胞凋亡可能是通过上调细胞核内GAPDH表达实现的.
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IFN-γ和IL-4对乳腺癌细胞MCF-7生长及雌激素受体亚型影响的观察
目的:探讨干扰素γ(IFN γ)和白细胞介素4(IL-4)对人乳腺癌细胞株MCF-7的生长特性及雌激素受体(ER)亚型表达的影响.方法:以不同浓度IFN-γ(50、100和150 μg/L)或IL-4(5、10和25 μg/L)分别作用MCF-7细胞24、48、72和96 h,MTT法检测细胞的增殖水平.选择100 μg/LIFN-γ或10μg/L IL-4作用细胞96h(M/IFN γ或M/IL-4),蛋白质印迹法检测ERα和ERβ的蛋白表达,流式细胞术分析细胞周期,RT-PCR检测凋亡抑制基因mRNA表达.结果:与对照组相比,IFN-γ作用96h后,细胞增殖活性受到抑制(100 μg/L组P=0.000,150 μg/L组P-0.003),G0～G1期细胞比例增多(P=0.003),S期减少(P=0.005),ERβ蛋白表达水平增加,P-0.038.IL-4作用96 h后,细胞增殖活性增强(10μg/L组P=0.006,25μg/L组P=0.002),Gn～Gt期细胞比例减少(P=0.008).S期增多(P=0.007),ERβ蛋白表达水平减少(P=0.021),凋亡抑制基因的表达水平增加,P值分别为0.002、0.000和0.004.结论:辅助性T淋巴细胞1型(Th1)类细胞因子IFN-γ和Th2类细胞因子IL-4可分别促进或抑制ERβ表达,进而抑制或促进肿瘤细胞生长；Th1/Th2偏移对乳腺癌细胞生长特性的作用,可能与改变ER亚型表达比例有关.
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大肠癌患者外周血Th1/Th2的检测及其临床意义
目的 检测大肠癌患者外周血CD+4细胞Th1、Th2细胞因子的表达水平,观察大肠癌患者Th1/Th2漂移的幅度,探讨Th1、Th2细胞因子与大肠癌发生、发展的关系.方法 采取实验对象的清晨空腹静脉血标本,用Th1、Th2细胞因子标记流式细胞技术检测Th1类细胞因子IFN-γ,Th2类细胞因子IL-4,计算Th1/Th2(IFNγ/IL-4),进行统计学分析.结果 大肠癌患者IFN-γ的表达率为(11.7±1.86)%,健康对照组IFN-γ的表达率为(16.4±6.07)%,大肠癌组比健康对照组明显减低,差异有统计学意义(P＜0.05).大肠癌患者IL-4的表达率为(2.8±0.32)%,健康对照组IL-4的表达率为(1.8±0.19)%,大肠癌组比健康对照组升高,差异有统计学意义(P＜0.05).大肠癌患者外周血IFN-γ/IL-4为4.2±0.94,健康对照组外周血IFN-γ/IL-4为9.7±1.11,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 大肠癌患者外周血CD+4细胞表达Th2型细胞因子占优势,Th1/Th2平衡失调,向Th2方向漂移,导致机体免疫功能低下,是大肠癌复发或转移的原因之一.
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脑缺血大鼠干扰素γ与细胞间黏附分子-1表达相关性研究
目的研究脑缺血时干扰素γ与细胞间黏附分子(ICAM)-1的表达是否具有相关性.方法将雄性SD大鼠54只随机分成6组(A、B、C、D、E、F组),每组9只.再将每组大鼠随机分成实验组(6只)和对照组(3只).A、B、C、D、E、F实验组用埋线法制造大鼠局灶性脑缺血-再灌注模型,分别于再灌注后1、3、6、9、12、24 h处死大鼠,取大鼠脑组织,应用免疫组织化学方法分别检测干扰素γ及ICAM-1的表达.高倍显微镜下计数10个不同视野阳性细胞的平均值.结果大鼠脑缺血-再灌注1、3、6、9、12、24 h时,干扰素γ及ICAM-1的表达逐渐增高,其中干扰素γ阳性的细胞是圆形、以细胞核为主的淋巴细胞,1 h阳性细胞表达数为3.2±1.3;6 h为7.0±2.2;24h为14.8±1.8.ICAM-1阳性细胞是扁平的血管内皮细胞,1 h的表达数为12.1±2.1;6 h为19.3±3.2;24 h为27.6±2.8.结论脑缺血时干扰素γ、ICAM-1的表达随时间延长动态地增高,两者具有相关性.干扰素γ也可能是脑缺血时ICAM-1表达上调的前炎性细胞因子.
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连翘提取物对实验性自身免疫性脑脊髓炎抗原特异性T细胞增殖和细胞因子分泌的影响
目的 探索连翘提取物对髓鞘蛋白脂质蛋白(PLP)139-151特异性T细胞增殖及细胞因子分泌的影响.方法 应用PLP139-151免疫SJL/J小鼠,免疫后10d取淋巴结细胞进行体外培养,按处理条件将淋巴细胞分为对照组、PLP抗原刺激组、大剂量连翘组、中剂量连翘组、小剂量连翘组.采用MTT法测定吸光度[D(λ)]值,以观察连翘提取物对淋巴细胞增殖的影响；ELISA法测定IFN-γ、IL-10的水平.结果 对照组、PLP抗原刺激组、小剂量连翘组、中剂量连翘组、大剂量连翘组D(λ)值分别为0.20±0.017、0.47±0.022、0.60±0.041、0.74±0.027、0.80±0.073,PLP抗原刺激组与对照组比较差异具有统计学意义(t=-30.710,P＜0.01)；后四组比较差异具有统计学意义(F=416.06,P＜0.001).与对照组相比,PLP抗原刺激组IFN-γ水平增高(455.7±25.4vs.2507.0±79.8),IL-10水平降低(1702.2±87.4vs.1167.4±58.7)(t=-69.602,t=16.063,均P＜0.01).与PLP抗原刺激组相比,小剂量、中剂量、大剂量连翘提取物组IFN-γ水平降低(2507.0±79.8 vs.360.6±43.1、349.0±38.2、288.3±23.2)(F=4628.61,P＜0.001)；IL- 10水平增加(1167.4±58.7 vs.1189.1±75.4、1208.2±78.1、1515.5±92.7)(F=454.230,P＞0.05).结论 连翘提取物促进抗原特异性淋巴结细胞增殖,降低PLP139-151特异性淋巴细胞增殖分泌IFN,但对IL-10的分泌无影响.
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马索罗酚对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠T h1／T h2细胞炎症因子平衡的影响
目的：探讨马索罗酚对实验性自身免疫性脑脊髓炎（EA E ）小鼠白细胞介素‐4（IL‐4）、IL‐12、干扰素‐γ（IFN‐γ）表达的调节作用。方法将8～10周雌性C57BL／6小鼠54只随机分成对照组、模型组、治疗组。每组再随机均分为发病后10 d及20 d亚组，每亚组9只。采用皮下注射髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35‐55（MOG35‐55）多肽0.1 mL诱导EAE模型。自发病当天起，治疗组小鼠给予马索罗酚10 mg／（kg?d）治疗，模型组及对照组给予等量5％二甲基亚砜（DMSO）10 mL／（kg?d）处理。比较3组小鼠临床症状评分。应用实时定量PCR检测小鼠脊髓和脾组织中IL‐4、IL‐12、IFN‐γ mRNA表达水平。应用ELISA检测脑组织中 IL‐4、IL‐12、IFN‐γ蛋白表达水平。结果与模型组比较，治疗组小鼠临床症状较减轻（P＜0.05）。与模型组相比，治疗组小鼠10 d时脊髓和脾组织IL‐12、IFN‐γ mRNA表达水平降低（P＜0.05），IL‐4 mRNA水平增高（P＜0.05），脑组织IL‐12、IFN‐γ蛋白水平降低（P＜0.05），IL‐4蛋白水平增高（P＜0.05）；与模型组相比，治疗组20 d时脊髓组织IL‐12、IFN‐γmRNA表达水平降低（P＜0.05），脑组织IFN‐γ含量降低（P＜0.05）。结论马索罗酚可能通过降低脑、脊髓及脾组织中IL‐12、IFN‐γ表达，增加IL‐4表达，调节Th1／Th2细胞炎症因子平衡，进而改善EAE小鼠疾病严重程度。
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青蒿素对实验性自身免疫性重症肌无力大鼠R97-116抗体及细胞因子的影响
目的：探讨青蒿素（artemisinin）对实验性自身免疫性重症肌无力（EAMG）大鼠R97‐116抗体及干扰素γ（IFN‐γ）、白细胞介素17（IL‐17）表达水平的影响。方法采用鼠源AChRα亚基97‐116肽段免疫方法建立EAMG大鼠模型，将造模成功的大鼠20只随机分为青蒿素小、中、大剂量组和EAMG对照组。青蒿素小、中、大剂量组分别给予15、30、45 mg／（kg?d）青蒿素溶液灌胃治疗，1次／d ，模型对照组给予等浓度二甲基亚砜水溶液灌胃。评测各组大鼠体质量和临床症状，采用流式细胞术检测淋巴结单个核细胞悬液细胞因子IFN‐γ、IL‐17水平，ELISA法检测血清抗R97‐116 IgG／IgG1／IgG2b水平。结果青蒿素中、高剂量组大鼠体质量高于对照组（P＜0.05）；青蒿素各剂量组大鼠临床评分低于对照组（P＜0.05）。青蒿素各治疗组IFN‐γ、IL‐17水平均低于对照组（P＜0.01）。青蒿素15 mg／（kg?d）剂量组血清IgG、IgG1、IgG2b水平与对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05）；30 mg／（kg?d）剂量组血清 IgG（P＜0.05）、IgG1（P＜0.01）、IgG2b（P＜0.01）水平低于对照组；45 mg／（kg?d）剂量组血清IgG（P＜0.05）、IgG1（P＜0.01）水平低于对照组。结论青蒿素能改善EAMG大鼠临床症状，对EAMG大鼠具有免疫调节作用，其机制可能与其通过直接或间接降低血清抗 R97‐116抗体水平、抑制淋巴结单个核细胞分泌IFN‐γ和IL‐17促炎性因子有关。
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抑郁症患者血清细胞因子水平的研究
目的探讨细胞因子在抑郁症发病中的作用。方法用酶联免疫吸附法检测22例抑郁症患者（抑郁症组）和20名正常人（对照组）的血清白细胞介素（IL）1-β、IL-2、IL-6、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和γ-干扰素（IFN-γ）水平，均以nmol/L计。结果抑郁症组血清IL-2水平为0.46±0.52，明显高于对照组的0.15±0.19（t=2.517，P<0.05）。抑郁症组的IL-1β、IL-6、TNF-α和IFN-γ水平分别为0.32±0.57，0.14±0.37，0.03±0.05和0.05±0.13，与对照组（分别为0.23±0.25, 0.08±0.23，0.05±0.09和0.01±0.04）比较，差异无显著性（t分别为0.645，0.589，1.099和1.110，P>0.05）。结论抑郁症患者的血清IL-2水平升高，提示IL-2可能在抑郁症的发病中起一定作用。
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首发精神分裂症患者白细胞介素4,10,12及干扰素-γ水平与相关因素研究
目的研究首发精神分裂症患者血清白细胞介素(IL)4、IL-10、IL-12及干扰素-γ(IFN-γ)水平与病程及精神症状严重程度的相关性.方法患者组为30例符合入组标准的首发精神分裂症患者,对照组为58名符合入组标准的正常人.应用夹心酶联免疫吸附测定法测定血清中IL-4,IL-10,IL-12及IFN-γ浓度水平.应用简明精神病评定量表、阳性和阴性症状量表对患者进行精神症状评定.结果患者组IL-4[ (68±29) ng/L]、IL-10为[(61±25) ng/L]均明显高于对照组 [(50±23) ng/L,(32±18) ng/L],差异有非常显著性(P=0.01,P=0.00);IL-12 [(35±15) ng/L]明显低于对照组[(53±27) ng/L],差异有显著性(P=0.01); IFN-γ [(41±17) ng/L]与对照组 [(51±23) ng/L]的差异无显著性(P=0.09).首发精神分裂症患者血清IL-4、IL-10、IL-12及IFN-γ浓度水平与病程无相关(r=0.09,0.07,-0.20,-0.21;P=0.63,0.71,0.30 , 0.27), IL-4、IL-10、IL-12及IFN-γ浓度水平均与精神症状评定无显著相关(P＞0.05).患者组IL-4 浓度水平与IL-10的浓度水平正相关(r=0.52,P=0.03),IL-12与IFN-γ浓度水平也存在正相关关系(r=1.00,P=0.00).对照组4种细胞因子间均无相关(P＞0.05).结论首发精神分裂症患者IL-4、IL-10、IL-12及IFN-γ浓度水平存在紊乱,但与精神症状严重程度及病程长短无相关性.
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急性期Guillain-Barr(e)综合征患者人类肿瘤坏死因子样分子1A表达与T细胞分泌γ-干扰素水平的关系
目的 探讨人类肿瘤坏死因子样分子1A(hTL1A)在急性期Guillain-Barre综合征(GBS)中表达及其与T细胞分泌γ-干扰素(IFN-γ)水平的关系.方法 ①重组人可溶性hTL1A(rhsTL1A)免疫6周龄雌性Bal b/c小鼠,用人脐带静脉内皮细胞(HUVECs)以免疫荧光染色法鉴定rhsTL1A抗血清.②鉴定rhsTL1A的生物学活性:健康捐赠者外周血单个核细胞(PBMCs)接种于96孔板,设2 μg/ml植物血凝素(PHA)、2 μg/ml PHA+25 ng/ml rhsTL1A、2 μg/ml PHA+100 ng/mlrhsTL1A、2 μg/ml PHA+400 ng/ml rhsTL1A组,~3H-TdR掺入法检测T细胞增殖.③酶联免疫吸附(ELISA)法检测急性期GBS患儿血清中IFN-γ水平.④流式细胞术检测急性期GBS患儿外周血中CD_3~+ hTL1A~+ T/CD_3~+ T细胞的百分比.⑤分离急性期GBS患儿PBMCs,给予2 μg/ml PHA和400ng/ml rhsTL1 A,培养72 h后ELISA法检测IFN-γ水平.结果 ① rhsTL1A抗血清能够识别真核细胞HUVECs表达hTL1A.②T细胞增殖实验结果显示各组刺激指数(SI)均较对照组升高,400 ng/mlrhsTL1A组的SI大(2.65).③急性期GBS患儿血清IFN9-γ水平[(102.25±22.17)pg/ml]较对照组[(28.75±1.31)pg/ml]显著升高(t=3.309,P<0.05).④急性期GBS患儿外周血中CD_3~+TL1A~+T/CD_3~+ T细胞比例(18.22%±1.83%)较健康对照组(5.17%±0.48%)显著增高(t=6.884,P<0.01).⑤健康对照组和急性期GBS组PBMCs经2 μmg/ml PHA和400 ng/ml rhsTL1A孵育后,IFN-γ分泌量[(43.56±4.41)pg/ml、(180.64±38.39)pg/ml]均显著增高(t=4.523、2.600,P<0.01、0.05),并且急性期GBS组的IFN-γ水平显著高于健康对照组(t=3.545,P<0.05).结论 ①400 ng/ml rhsTL1A能有效促进2μg/ml PHA活化的T细胞增殖,rhsTL1A具有生物学活性.②急性期GBS患儿外周血中活化T细胞表达hTL1A增加,可通过与其受体DR_3相互结合,促进IFN-γ的分泌.
关键词： 格林巴利综合征 肿瘤坏死因子配体超家族成员15 干扰素Ⅱ型 细胞增殖 -
姜黄素对卵清蛋白致小鼠变应性鼻炎的治疗作用
目的 研究姜黄素对卵清蛋白(ovalbumin,OVA)致变应性鼻炎(AR)小鼠的防治作用,探讨作用机制.方法 40只BALB/C小鼠随机分为正常对照组,AR模型组,地塞米松组和姜黄素组,共4组,每组10只.除正常对照组外,其余3组均使用OVA致敏并激发制备AR模型,模型建立后地塞米松组腹腔注射地塞米松(5 mg/kg),姜黄素组腹腔注射姜黄素(0.6 mg/kg),均为1次/d,持续7d.AR模型组给予等量磷酸盐缓冲液(PBS)替代.评估小鼠鼻部症状,HE染色和免疫组化观察鼻黏膜炎症情况,ELISA检测血清白细胞介素4(interleukin-4,IL-4)、干扰素γ(interferon-gamma,IFN-γ)和OVA特异性IgE(specific IgE,slgE)水平.结果 与正常对照组相比,AR模型组小鼠鼻部症状明显,鼻黏膜可见大量嗜酸性粒细胞(eosinophils,Eos)浸润,组织间质水肿严重,IL-4表达增多.地塞米松组和姜黄素组小鼠鼻部症状均减轻,鼻黏膜组织中Eos局部浸润及鼻黏膜下组织间质水肿减少,鼻黏膜IL-4表达下调,血清IL-4浓度降低.此外,血清slgE浓度在姜黄素组小鼠中降低而地塞米松组小鼠未见下降,且地塞米松组小鼠血清IFN-γ降低.结论 姜黄素可减少鼻黏膜Eos浸润,抑制IgE释放,其机制可能是通过抑制Th2细胞因子反应,从而达到治疗AR的作用.
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白细胞介素-12和干扰素-γ表达与变应性鼻炎的相关性
目的 探讨变应性鼻炎患者白细胞介素12(interleukin-12,IL-12)和干扰素-γ(interferon-gamma,IFN-γ)的表达及两者与变应性鼻炎的相关性.方法 通过原位杂交染色法和酶联免疫吸附剂测定(enzyme-linked immunosorbnent assay,ELISA),检测30例变应性鼻炎患者和22例对照鼻黏膜组织中IL-12和IFN-γ的表达.结果在变应性鼻炎组和对照组,外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclearcell,PBMC)IL-12 mRNA杂交阳性率分别为0.13±0.03和0.77±0.15(t=11.1,P<0.05);血清IL-12的含量为(13.7±2.4)pg/L和(52.9±8.4)pg/L (t=6.2,P<0.05);血清IFN-γ的含量为(11.2±2.1)pg/L和(51.8±6.4)pg/L(t=7.9,P<0.05).结论变应性鼻炎的病理过程与IL-12和IFN-γ的表达下调有关.Th细胞分化偏移,Th2功能亢进是导致变应性鼻炎的重要原因.
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脐带血Th1／Th2细胞失衡与母亲变应性鼻炎及婴幼儿特应性皮炎的相关性研究
目的：观察母亲患变应性鼻炎（allergic rhinitis，AR）对脐带血T细胞亚型的影响，并探讨脐带血T细胞亚型对婴幼儿特应性皮炎（ atopic dermatitis，AD）的预测价值。方法前瞻性纳入70名就诊于北京同仁医院的母亲及其婴幼儿。收集母亲AR病史、分娩年龄、外周血总IgE、血清特异性IgE数据。采集母亲外周血及婴儿脐带血标本，应用流式细胞术分析Th1细胞和Th2细胞数量。随访其0～2岁婴幼儿是否确诊AD。应用多因素Logistic回归和受试者工作特征曲线评价脐带血T细胞亚型对婴幼儿AD的预测价值。结果70名母亲中AR阳性者21例，阴性者49名；其生产的婴幼儿（均为单胎）2岁内AD发病率为15.7％（11例）。母亲AR阳性时，其外周血及其婴儿脐带血中Th2细胞分别为7.10[1.18；16.1]％、1.02[0.57；1.34]％，与母亲 AR 病史阴性的0.37[0.25；0.72]％、0.21[0.15；0.42]％相比显著升高，差异有统计学意义（ U值分别为10.0、127.5， P值均＜0.05）。而脐带血Th1细胞在母亲AR阳性或阴性组分别为0.69[0.40；1.12]％和0.50[0.31；0.66]％，两组间差异无统计学意义（U＝361.0，P＞0.05）。脐带血Th1/Th2比例降低是AD的危险因素（ OR＝1.72，P＝0.001）。 Cox回归分析显示，脐带血Th1/Th2比值、母亲AR病史、分娩年龄、母亲外周血总IgE等预测婴幼儿发生AD的曲线下面积AUC＝0.907（95％可信区间为0.804～1.011， P＜0.001）。结论母亲患AR者，其新生儿脐带血Th2细胞升高。脐带血Th1/Th2失衡是婴幼儿在0～2岁患AD具有预测价值的生物学指标。
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大蒜新素对大鼠变应性鼻炎模型血浆中白细胞介素4和γ干扰素的影响
目的 探讨大蒜新素对大鼠变应性鼻炎模型外周血中愀扇潘和白细胞介素4(IL-4)的影响.方法 健康雌性SD大鼠30只,随机分为对照组、空白组和实验组,每组10只.实验组用卵清蛋白辅以氢氧化铝和灭活百日咳杆菌佐剂建立变应性鼻炎模型,成功后连续腹腔注射大蒜新素10 d;对照组造模方法同实验组,成功后腹腔注射等体积的生理盐水;空白组除无卵清蛋白致敏和激发外,方法同对照组.颈内静脉取血,分离血浆,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆中IL-4和INF-愕暮俊＝峁实验组、对照组和空白组大鼠外周血浆中IL-4水平(-x±s,下同)分别为(22.81±8.79)pg/L、(41.43±4.93)pg/L和(9.93±2.07)pg/L;INF-愕乃椒直鹗.32±11.20)pg/L,(11.35±2.45)pg/L和(21.69±5.93)pg/L.实验组血浆中IL-4的水平低于对照组而高于空白组,差异具有统计学意义(t值分别为3.22及4.17,P值均<0.05);实验组血浆中INF-γ水平高于对照组(t=3.84,P<0.05),而与空白组相比差异无统计学意义(t=1.47,P>0.05).结论 大蒜新素能降低大鼠变应性鼻炎模型外周血中IL-4的水平,同时提高INF-γ的水平,对Th1和Th2细胞因子水平具有调节作用.
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鼻腔吸入γ干扰素对大鼠变应性鼻炎的治疗作用
目的 探讨鼻腔吸入γ干扰素(interferon gamma,IFN-γ)对大鼠变应性鼻炎(allergic rhinitis,AR)的治疗作用及可能机制.方法 采用卵白蛋白、氢氧化铝建立大鼠AR模型,分为阳性对照组(B组)、IFN-γ组(c组)和丙酸倍氯米松组(D组),每组8只大鼠,分别于模型建立后第31～38天,每只每日每侧鼻腔滴入磷酸盐缓冲液50μl、IFN-γ1 μg和丙酸倍氯米松3.5 μg,另设阴性对照组(A组)大鼠8只.第39天取鼻腔灌洗液测定细胞成分、白细胞介素4和白细胞介素5浓度;取血测定血浆IgE水平;黏膜切片观察鼻腔组织病理学改变及GATA-3的表达.结果 C组鼻腔灌洗液中的嗜酸粒细胞数量(-x±s,下同)为(O.005±0.003)×104/ml,明显低于B组(0.225±0.060)x104/ml(P<0.01);C组鼻腔灌洗液中的白细胞介素4为(7.8±3.5)pg/ml,白细胞介素5为(12.5±4.3)pg/ml,均低于B组(P值均<0.01);C组血浆中总IgE为(38.5±9.6)μg/ml,卵白蛋白特异性IgE为(19.8±5.4)IU/ml,均低于B组(P值均<0.01).B组大鼠鼻腔黏膜充血、水肿,黏膜层增厚,并有嗜酸细胞为主的炎性细胞浸润,而c组大鼠上述炎性症状改变减轻.免疫组化显示B组鼻腔组织中GATA-3表达增加,而C组的表达减少.结论 鼻腔吸入IFN-γ可以抑制AR大鼠白细胞介素4和白细胞介素5的合成,抑制嗜酸粒细胞在鼻腔内的炎性浸润,降低血浆中总IgE和卵白蛋白特异性IgE水平,其机制可能与阻断GATA-3表达,从而继发抑制Th2型反应有关.
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白细胞介素5和13受体对变应性鼻炎大鼠血管细胞黏附分子1及γ干扰素的影响
目的 探讨鼻腔联合应用可溶性白细胞介素5受体α( soluble interleukin 5 receptor alpha,sIL-5 Rα)及sIL-13Rα2对变应性鼻炎(allergic rhinitis,AR)大鼠血管细胞黏附分子1(vascular cell adhesion molecule 1,VCAM-1)和γ干扰素(interferon gamma,IFN-γ)水平的影响.方法 将Wistar大鼠50只以随机数字表法随机分为A组(对照组)、B组(AR组)、C组(sIL-5Rα治疗组)、D组(sIL-13Rα2治疗组)及E组(sIL-5Rα联合sIL-13Rα2治疗组,简称联合治疗组).AR组及各治疗组用卵清蛋白( ovalbumin,OVA)和氢氧化铝致敏,用OVA激发,建立大鼠AR模型,对照组用生理盐水代替.其中sIL-5Rα治疗组、sIL-13Rα2治疗组及联合治疗组在第31 ～ 38天,于激发前30 min每只大鼠每日每侧鼻腔分别滴入100 μg sIL-5Rα、100 μg sIL-13Rα2、sIL-5 Rα及sIL-13Rα2各100 μg,AR组则于激发前30 min滴入磷酸盐缓冲液50μl.比较各组大鼠血清及鼻腔灌洗液中VCAM-1、IFN-γ水平的变化.以SPSS 17.0软件进行统计学分析.结果 B组血清及鼻腔灌洗液中VCAM-1含量较A组明显升高(P值均＜0.01),而IFN-γ含量明显降低(P值均＜0.01)；C、D、E组血清及鼻腔灌洗液中VCAM-1含量较B组明显降低(P值均＜0.01),而IFN-γ的含量明显升高(P值均＜0.01)；E组血清及鼻腔灌洗液中VCAM-1含量[分别为(283.5±5.7) μg/L、(101.8±4.8)μg/L]分别较C[分别为(311.5±12.6) μg/L、(133.9±5.8) μg/L]、D组[分别为(304.7±6.6) μg/L、(128.5±7.7) μg/L]明显降低(P值均＜0.01),而IFN-γ的含量[E组分别为(874.7±9.6)、(349.2±12.1) pg/ml;C组分别为(600.2±16.1)、(195.5±16.1)pg/ml；D组分别为(577.9±9.6)、(196.7±9.9) pg/ml]明显升高(P值均＜0.01).结论 联合应用sIL-5Rα及sIL-13 Rα2治疗大鼠AR,可明显降低血清及鼻腔灌洗液中VCAM-1含量,同时升高IFN-γ含量,从而达到缓解和治疗AR的目的.
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体外转染γ-干扰素基因抑制人眼球筋膜囊成纤维细胞的研究
目的探讨阳离子脂质体介导的γ-干扰素(IFN-γ)基因对体外培养的人眼球筋膜囊成纤维细胞增殖的抑制作用.方法采用脂质体介导的方法,以质粒pcDNA3 IFN-γ基因转染体外培养的人眼球筋膜囊成纤维细胞,同时以空载体重组质粒pcDNA3作为对照,G418筛选抗性克隆并扩增.以RT-PCR、免疫组化及流式细胞仪间接免疫荧光法检测IFN-γ基因的表达,应用流式细胞仪进行细胞周期分析,采用四甲基偶氮唑盐法检测IFN-γ基因对成纤维细胞的作用.结果转染pcDNA3 IFN-γ基因的成纤维细胞在转录水平和蛋白水平表达IFN-γ基因,转染的IFN-γ基因可明显抑制成纤维细胞的增殖.结论转染的IFN-γ基因对体外培养的人眼球筋膜囊成纤维细胞的增殖具有抑制作用.
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哮喘患儿T细胞亚群功能状态的研究
为观察哮喘患儿T细胞亚群功能状态,以探讨其发病机制,分别采用酶联免疫吸附试验(ELISA)、流式细胞术(FCM)检测哮喘患儿外周血单个核细胞(PBMC)培养上清液中IL-4、IFN-γ及PBMC细胞膜上CD30的表达.结果显示,发作组PBMC培养上清液中IFN-γ为338.98±90.49ng/L,IL-4 为37.75±11.94ng/L,IgE为282.39±83.33U/L,与对照组比较差异有显著性意义(P均<0.01);经治疗后IFN-γ为408.69±93.58ng/L,IL-4 为33.35±11.99ng/L,IgE为137.28±89.09U/L,与对照组比较差异有非常显著性意义(P均<0.01);IL-4与IgE呈正相关关系(r＝0.561,P＜0.05);哮喘患儿PBMC CD30表达增强.提示哮喘患儿存在T细胞亚群功能紊乱,Th1/Th2的失衡在哮喘发病机制中起着很重要的作用.
