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产妇血清、脐动、静脉及羊水中瘦素水平与胎儿生长发育关系
目的:探讨瘦素水平与胎儿宫内生长发育的关系.方法:采用放射免疫测定法,分别检测65例孕37～42周分娩产妇血清及脐动、静脉、羊水中的瘦素水平,同时测定产妇血脂水平.根据不同出生体重分为小于胎龄儿(SGA)组(n＝10)、适于胎龄儿(AGA)组(n＝45)及超于胎龄儿(LGA)组(n＝10),对结果进行相关性分析.结果:(1)产妇血清瘦素水平与胎儿出生体重、胎盘重量、脐动、静脉及羊水中的瘦素水平均无明显相关性(P均>0.05);产妇的体重指数与胎儿出生体重、身长、脐动、静脉瘦素水平均呈显著正相关(P均<0.01);脐动静脉瘦素水平与胎盘重量、胎儿出生体重、身长均呈正相关(P均<0.01),与高密度脂蛋白呈负相关(P<0.01);羊水瘦素水平与胎儿出生体重、胎盘重量、母体重及血脂水平均无相关性;产妇血清及脐动、静脉、羊水瘦素水平均与胎儿性别无相关性.(2)三组的脐动、静脉瘦素水平及胎盘重量LGA组,高于AGA及SAG组(P均<0.05);AGA组又比SAG组高(P<0.05);三组的产妇血清及羊水瘦素水平无显著差异(P>0.05);三组脐动、静脉瘦素水平均低于产妇血清瘦素水平(P<0.05).男、女婴的脐动、静脉、羊水及产妇血清瘦素水平无显著性差异.结论:(1)胎儿的瘦素是在宫内合成及分泌,源于自身及胎盘,脐动、静脉瘦素水平与胎儿宫内生长发育密切相关,与胎儿体重呈正向调节.(2)母、儿瘦素水平均与胎儿的性别无相关,男女婴瘦素水平无差异.
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孕妇尿样中邻苯二甲酸酯代谢产物和脐带血中睾丸甾体激素水平的关联性研究
目的 研究孕妇尿样中邻苯二甲酸酯(PAEs)代谢产物与脐带血中抑制素B(INHB)、胰岛素样因子3(INSL3)水平的关联性.方法 将2011年6月至2012年9月在天津某三级甲等妇产科医院进行产前检查的孕妇作为研究对象,采集孕期晨尿中段尿,随访其妊娠过程直至分娩,抽取脐带血10 ml,追踪到符合条件的孕妇-新生儿共69对.应用固相萃取-三重四极杆高效液相色谱串联质谱技术检测孕期尿样中PAEs的4种代谢产物[邻苯二甲酸单甲酯(MMP)、邻苯二甲酸单乙基己基酯(MEHP)、邻苯二甲酸单乙酯(MEP)、邻苯二甲酸单丁酯(MBP)]水平.应用ELISA测定脐血样品中INHB、INSL3水平,应用多元线性回归模型进行关联性分析.结果 孕妇尿中MMP、MEHP、MEP和MBP中位数分别为49.74、24.96、19.52和17.73 μg/L；脐带血中INHB和INSL3中位数分别为89.09和106.21 ng/L.MMP(β '=-0.252)、MEP(β'=-0.363)和∑PAEs(β'=-0.346)的改变对INHB水平的影响具有统计学意义,且呈负相关；∑PAEs(β'=-0.313)的改变对INSL3水平的影响具有统计学意义,且呈负相关.结论 孕期暴露PAEs代谢产物水平与脐血中INHB和INSL3水平具有关联性.
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儿童血铅与胎儿期铅污染的关系
目的了解儿童血铅水平与胎儿期铅污染的关系。方法采集1～5岁儿童手指血和新生儿出生时的脐带血，用原子吸收石墨炉法测定血铅浓度。结果 1 122例儿童血铅平均为（0.42±0.15）μmol/L，血铅值≥0.483 μmol/L的儿童占27.54％；127例新生儿脐带血铅平均为（0.16±0.12）μmol/L，血铅值≥0.483 μmol/L的新生儿占0.79％。结论儿童血铅水平高主要是环境污染和生活行为引起，儿童在胎儿期血铅的本底水平已较高，所以预防儿童铅中毒应从孕妇做起。
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上海市某医院新生儿脐带血中多溴联苯醚水平及其对出生结局的影响
目的 调查上海市某医院新生儿脐带血中多溴联苯醚(polybrominated diphenyl ethers,PBDEs)浓度水平,并分析胎儿期PBDEs暴露对新生儿出生结局的影响.方法 于2006年9月至2007年4月,对上海市某医院50名入院分娩的孕妇进行问卷调查,孕妇均为单胎妊娠,排除高血压、糖尿病、HIV感染和不良药物史.收集新生儿脐带血样本,使用气相色谱-负化学电离源-质谱法检测脐带血中7种PBDEs[溴代联苯醚(BDE)-28、BDE-47、BDE-99、BDE-100、BDE-153、BDE-154、BDE-183]浓度,计算PBDEs总浓度(∑,PBDEs),并进一步分析脐带血中PBDEs浓度水平对新生儿出生结局的影响.结果 上海市某医院新生儿身长为(50.15±0.75)cm,体重为(3.49±0.42)kg,胸围为(34.76±1.51)cm,头围为(35.03±1.40)cm,体质指数为(13.76±1.36)kg/m2.新生儿脐带血中∑,PBDEs中位数浓度(范围)为14.06(1.03～379.73)ng/g脂重(lipid weight,1w).BDE-28、BDE-47、BDE-99、BDE-100、BDE-153、BDE-154、BDE-183检出率分别为22%(11/50)、22%(11/50)、98%(49/50)、72%(36/50)、76%(38/50)、90%(45/50)、14%(7/50).各同族体中位数浓度(范围)分别为:BDE-28为<检测限(LOD)(＜LOD～137.20 ng/g 1w),BDE-47为＜LOD(＜LOD-33.17 ng/g 1w),BDE-99为7.54(＜LOD-94.01)ng/g 1w,BDE-100为1.57(＜LOD-46.95)ng/g 1w,BDE-153为0.63(＜LOD-79.08)ng/g 1w,BDE-154为0.63(＜LOD-22.30)ng/g 1w,BDE-183为＜LOD(＜LOD-21.63 ng/g 1w).新生儿体质指数与BDE-99(r=-0.347,P＜0.05)和BDE-154(r=-0.292,P＜0.05)浓度呈负相关.将出生结局按照累计频率25%分为低(≤25%)、高(＞25%)两组,BDE-99在低身长组(≤50 cm)和高身长组(＜50 cm)的几何均数分别为10.59 ng/g 1w和3.60 ng/g 1w,二者差异有统计学意义(t=2.32,P=0.03).结论 上海市某医院新生儿脐带血中普遍存在PBDEs,胎儿期PBDEs暴露可影响新生儿出生结局.
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脐血对骨折愈合影响的实验研究
目的探讨同种及异种脐血是否有促进骨折愈合的作用.方法72只新西兰大耳兔在实验性胫骨横断骨折固定后,随机被分为兔脐血组、人脐血组、无脐血组及血肿组,每组18只.前三组均于骨折部位置引流管,密闭切口,术后行闭式引流大约24小时,再经皮于骨折处分别注入兔脐血、人脐血及生理盐水3ml,血肿组不引流也不注入任何试剂.分期抽血做免疫学检查,包括IgG和SIL-2R,取实验胫骨摄X线片及做光镜、电镜检查.结果血肿组较无脐血及血肿组骨折愈合时间短1周,两脐血组间无明显差异,骨愈合时间比上述二组短1～2周左右.免疫学检查术后各组间未见显著性差异.结论同种及异种脐血有促进骨折愈合作用.局部注射脐血无异常免疫反应.
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产妇与新生儿瘦素水平和新生儿体重的观察及其临床意义
探讨胎盘、羊水、新生儿脐血和产妇血清中的瘦素水平与胎儿体重和妊高征的关系.采用放射免疫分析法,分别检测59名产妇胎盘、羊水、新生儿脐血和产妇血清中的瘦素水平,并对其结果进行t检验.结果是:(1)正常产妇胎盘、羊水、新生儿脐血和产妇血清中的瘦素水平分别为27.4±9.2μg/g、9.2±4.8μg/L、13.6±9.8μg/L、19.5±8.9μg/L;(2)妊高征产妇胎盘、羊水、新生儿脐血和产妇血清中的瘦素水平分别为36.5±8.5μg/g、15.3±3.9μg/L、19.8±5.6μg/L、29.3±11.7μg/L.妊高征组与正常产妇组的胎盘、羊水、新生儿脐血和产妇血清中的瘦素水平有显著性差异(P＜0.01),检测孕妇血清和羊水中的瘦素水平,对于评估胎儿的发育和体重、妊高征的治疗和预后具有重要意义.
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脐血CIK细胞诱导K562细胞的凋亡作用
探讨脐血CIK细胞对K562细胞的杀伤活性及诱导凋亡作用.通过第1天在脐血淋巴细胞中加入IFN-r,第2天再加入IL-2和CD3单抗进行细胞培养获得多种细胞因子诱导的杀伤细胞(Cytokinesinduced killer cells)即脐血CIK细胞.用MTT法测定其抗肿瘤活性,原位末端标记法进行凋亡分析,台盼蓝拒染法计数细胞.脐血CIK细胞及培养上清抗K562活性明显优于CD3AK细胞,短期培养后其增殖活性低于CD3AK细胞;但是加入G-CSF可以提高CIK细胞的增殖活性,且CIK细胞的抗K562活性仍高于CD3AK细胞.CIK细胞诱导K562细胞凋亡率大于CD3AK细胞,G-CSF能部分抑制CIK细胞诱导的K562细胞的凋亡.脐血CIK细胞是一种有效的杀伤活化细胞,脐血在多种细胞因子适当组合的诱导下可提高杀瘤活性.
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MHC不相合的双份鼠胎血移植后受体鼠混合嵌合体形成
本室已经建立了MHC不相合单份鼠胎血同种移植的小鼠模型.基于脐血造血干细胞的免疫学特性及临床实践,我们认为脐血移植成功的关键除了选择尽可能相合的供者外,保证移植细胞的数量更为重要.因此,为了提高移植干细胞的数量,本研究在前期工作的基础上,探讨MHC不相合的双份鼠胎血混合移植的可能性.研究结果表明,混合移植组40只受鼠中有26只在60天的观察期内存活下来;应用PCR及流式细胞术均检测到受鼠体内有混合嵌合体的形成;此外,皮肤移植试验也发现受鼠已被诱导形成对供鼠的特异性免疫耐受;小肠组织的病理切片显示受鼠仅表现出轻度GVHD.结论:MHC不相合的双份鼠胎血能够同时植入,重建受鼠的免疫与造血系统,这为拓宽脐血的临床应用,使更多患者能够有机会接受脐血移植做了有益的尝试.
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大鼠胎血与骨髓非造血成体干细胞体外分化能力的比较
为了比较大鼠胎血和骨髓中非造血成体干细胞(non-hematopoietic adult stem cells, NASC)体外培养过程中的生长特性及体外诱导两者向神经元样细胞分化的异同, 在无菌条件下采集孕大鼠的胎血和成年大鼠的骨髓,用Ficoll-hypague分离液分离出单个核细胞(MNC)后,种植于含10%胎牛血清的DMEM/LG培养液内.收获的NASC传代培养,用流式细胞仪检测细胞的免疫表型.β-巯基乙醇(β-ME)、二甲亚砜(DMSO)和叔丁基对羟基茴香醚(BHA)诱导NASC向神经元分化,用免疫细胞化学染色检测其特异性标志巢蛋白(nestin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶原纤维酸性蛋白(GFAP)的表达.结果发现: 传代培养后的两种NASC的形态相似,皆呈均一的梭形;流式细胞仪检测结果示两种NASC的免疫表型无明显差异,表达CD44、 CD54,不表达CD11b、CD45;定向诱导的两种NASC具典型神经元形态,免疫细胞化学染色显示nestin和NSE为阳性,但GFAP为阴性.结论:大鼠胎血和骨髓非造血成体干细胞的细胞形态、生物学特性无明显差别;两者都可被诱导分化为神经元样细胞;胎血应是NASC的又一来源.
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SCID-Hu IC小鼠模型的建立及在rAd5HPV16L1-E7疫苗中的应用
目的研究脐血移植建立SCID-Hu IC小鼠嵌合动物模型以及在HPV16L1-E7重组腺病毒中的应用.方法 (1)采用尾静脉注射法给实验组注射脐血单个核细胞悬液,对照组注射RPMI 1640培养液;8周末检测血中人IgG抗体水平及人CD45、CD3、CD19;(2)将SCID-Hu IC小鼠和SCID小鼠,分别经腹腔注射和滴鼻途径给予rAd5HPV16L1-E7 重组病毒,于第4周末取血检测rAd5HPV16L1-E7重组病毒特异性IgG抗体、脾细胞培养液中IFN-γ的含量及T-淋巴细胞增殖.结果 (1)实验组中人IgG抗体阳性数为10/15,含量为(0.167±0.089);人CD45为(9.39±4.21),CD3为(3.25±3.99);CD19为(1.69±0.75),对照组未测出人IgG抗体以及CD45、CD3、CD19;(2)腹腔注射组和滴鼻组病毒特异性IgG抗体均为100%阳性;实验组培养液中IFN-γ的含量和T-淋巴细胞增殖实验病毒特异性蛋白刺激组均高于非刺激组(P<0.05);对照组SCID小鼠rAd5HPV16L1-E7 重组病毒特异性IgG抗体、T-淋巴细胞增殖和培养液中人IFN-γ均为阴性.结论 (1)采用人脐血移植SCID小鼠建立SCID-Hu IC小鼠嵌合动物模型是可行的;(2)人新鲜脐血移植重建的SCID-Hu IC小鼠具有对rAd5HPV16L1-E7 重组病毒的免疫应答能力,而未移植者(对照组)则对rAd5HPV16L1-E7重组病毒无免疫应答能力.
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新生儿静脉血与脐带血及孕妇静脉血HBV病原学标记物相关性研究
目的 探讨慢性HBV感染孕妇所生新生儿脐带血与静脉血HBV标志物状况的一致性和相关性,以及与孕妇HBV感染标志物的相关性.方法 以HBsAg、HBeAg双阳性且HBV DNA＞1 ×105拷贝/ml孕妇及新生儿为研究对象,孕妇分娩前采集静脉血,新生儿于注射乙肝免疫球蛋白、乙肝疫苗前采集静脉血.在清洁和去除脐带表面污染血液,并用酒精消毒后,用注射器采集脐带血.HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe采用雅培微粒子化学发光法(美国雅培公司试剂,Abbott Architac i2000)检测,HBV DNA含量经COBAS TagMan HBV DNA定量检测仪检测.结果 共入组孕妇383例及所生新生儿,静脉血和脐带血HBsAg的阳性检出率分别为61.2％和63.9％,HBeAg阳性检出率分别为83.2％和83.5％,HBV DNA阳性检出率分别为56.0％和59.4％,静脉血和脐带血之间均有一致性.静脉血和脐带血间HBsAg、HBeAg和HBV DNA含量的相关性具有统计学意义(r=0.766、0.857、0.692,P＜0.000).新生儿静脉血和脐带血的HBeAg含量与孕妇的HBeAg含量具有相关性(r=0.362,P=0.000；r=0.352,P=0.000),而静脉血和脐带血的HBsAg含量与孕妇血清的HBsAg含量无相关性(r=0.023,P=0.785；r=0.04,P=0.604).结论 慢性HBV感染孕妇所生新生儿脐带血和静脉血HBV标志物状态有良好的一致性,可以以脐带血的HBV标志物反映新生儿静脉血HBV标志物.
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静脉注射免疫球蛋白对新生儿脐血单个核细胞活化增殖的影响
目的 探讨静脉注射免疫球蛋白(IVIG)对新生儿单个核细胞活化增殖的影响.方法 运用光学显微镜及3H-TdR掺入法观察IVIG对脐血单个核细胞(CBMC)形态学的影响及对CBMC增殖的调节.结果 IVIG使CBMC的母细胞化减少, 细胞代谢的速度减慢.IVIG使CBMC的3H-TdR掺入率下降更加明显地反映了IVIG对CBMC增殖的抑制.IL-2或IL-2联合IL-4可以拮抗IVIG对CBMC增殖的抑制.结论 IVIG并非直接抑制CBMC的活化或干预由IL-2与IL-2R相互作用所介导的增殖反应.IVIG可能通过抑制细胞因子的产生而阻碍CBMC的增殖反应.
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脐血输注治疗白血病化疗致白细胞和血小板减少研究
白血病往往因化疗引起的白细胞减少而停止化疗或导致严重的感染和出血引起死亡,严重制约了治疗效果.我们从1994-05～1995-10采用脐血输注治疗白血病化疗后引起的白细胞和血小板减少,收到较好效果,现报告如下.
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新生儿脐血脂联素水平与胎儿宫内发育的相关性研究
目的:探讨新生儿脐静脉血中脂联素水平与新生儿体重、胎龄和母亲脂联素水平等之间的关系.方法:采用放射免疫法测定33例正常足月孕妇及其新生儿脐静脉血的血清胰岛素及脂联素水平,并对其进行统计学分析.结果:脐血脂联素水平(31.42±15.97)μg/ml显著高于孕妇血脂联素水平(10.28±5.62)μg/ml;脐血脂联素水平与胎龄及新生儿出生体重呈正相关(r=0.411、0.408,P<0.05);脐血脂联素水平及新生儿出生体重与孕妇血清脂联素水平无相关性.结论:脐血脂联素水平与新生儿胎龄及其出生体重呈正相关,表明新生儿脂联素水平可能与胎儿宫内发育有关.
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脐血培养上清中白细胞介素-15含量的动态检测
目的:研究脐血单个核细胞(CB MNC)经脂多糖(LPS)刺激后生成IL-15 的动态变化.方法:采用ELISA法对14例CB和20例成人外周血(APB)MNC经LPS刺激后培养6、12、24和48h的上清进行测定.结果:CB和APB MNC经LPS刺激后,培养6h的上清液中即可检测到IL-15蛋白,动态检测至培养的48h,发现随培养时间的延长,其IL-15的含量也不断增加,但脐血MNC培养上清液中IL-15的含量明显低于成人外周血(P值分别＜0.05,0.01,0.01,0.01).结论:CBMNC生成IL-15能力低下,在一定程度上反映了CB的免疫特性,同APB相比,CB免疫功能发育不成熟.
关键词： 胎血 白细胞介素15/分析 脂多糖类 白细胞 单核 -
脐带血造血干细胞移植的现状与进展
脐带血造血干细胞代替骨髓移植已成为当今国内外血液学研究的热点.20世纪70年代初人们就发现脐带血含有大量的造血干细胞,脐带血同骨髓一样;20世纪80年代末用脐带血代替骨髓移植取得了成功;20世纪90年代我国无血缘关系用多个脐带血混合移植治疗小儿晚期恶性肿瘤取得了临床应用[1].由于细胞刺激因子和各种克隆刺激因子的联合应用,对脐带血组细胞进行培养,提示脐血中的造血干细胞与骨髓者可相,证明带血比成人骨髓细胞有更大的分化能力和更长的生存能力[2].因此,脐带血造血干细胞移植在临床上越来越广泛应用,并且也取得了可喜的成果.
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脐血的采集及体会
人类脐血含有丰富的造血细胞,具有不同骨髓及外周血的许多特征,能提供相当数量的造血细胞,用于造血细胞移植[1].同时,还可提供免疫球蛋白,提高机体免疫力[2],因而脐血移植已成为当今国际医学生物治疗应用研究的新手段、新热点,并显示了广泛的临床应用前景.我院自2003年始采集脐血,现将脐血采集方法与体会介绍如下.
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比较不同浓度CFSE荧光标记脐血细胞后存活率的实验研究
目的 比较使用CFSE作为荧光标记物标记脐血细胞后各组细胞存活率的实验研究.方法 使用5 μmol/L、10 μmol/L、15 μmol/L、20 μmol/L、25 μmol/L、30 μmol/L浓度的CFSE工作液对脐血细胞进行标记并计算每组细胞的细胞存活率,进行统计分析.结果 6组不同CFSE终浓度之问的细胞存活率存在显著性差异(P＜0.05),且随着CFSE终浓度的增加,细胞存活率有一定程度的下降.不同时间之间的细胞存活率存在显著差异(P＜0.01),随着时问的推移,细胞存活率不断下降,且时间差异要比浓度之间的差异显著.结论 CFSE标记的脐血细胞随培养时间延长存活率下降,而浓度对细胞存活率影响较时间小.
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胆红素对新生儿脐血单核细胞NF-κB表达的影响
目的 探讨胆红素对新生儿脐血单核细胞(CBMC)核转录因子-κB(NF-κB)表达的影响.方法 选择10例健康足月新生儿作为研究对象,收集脐血,采用明胶/自体血浆贴壁法(gelatin/plasma coatedflasks)分离CBMC.经含有不同浓度胆红素的牛血清白蛋白溶液孵育1 h,再给予脂多糖(LPS)刺激培养细胞,收集单核细胞.采用间接免疫荧光法,观察CBMC NF-κB的活化水平.结果 LPS可促进CBMC NF-κB的活化,而胆红素对其有抑制作用,6 mg/dl浓度的胆红素单独即可抑制CBMC NF-κB的活化.先经不同浓度(2.5 mg/dl、6 ms/dl、9 mg/dl、12.9 mg/dl、18mg/dl)胆红素孵育,CBMC NF-κB的活化受到不同程度的抑制;再接受LPS刺激,低浓度(2.5 mg/d和6 mg/dl)胆红素孵育后的CBMC NF-κB的活化可以恢复,高浓度(12.9 mg/dl和18 mg/dl)胆红素孵育后的CBMC NF-kB的活化仍然受抑制,当胆红素浓度由12.9 mg/dl上升至18 mg/dl时,CBMC NF-κB的活化受抑制程度的差异,没有统计学意义.随着胆红素浓度的升高,这种抑制作用越明显.结论 胆红素可以通过抑制CBMC NF-κB的活性影响单核细胞的免疫功能.
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血管内皮细胞钙黏蛋白在妊娠期高血压疾病患者血清及胎儿脐血中的表达
目的 研究妊娠期高血压疾病患者静脉血清及胎儿脐血中血管内皮细胞钙黏蛋白(VE-cadherin)的变化及意义.方法 采用酶联免疫吸附法(ELISA)进行VE-cadherin含量测定,采用免疫比浊法检测高敏-C反应蛋白(hs-CRP)的含量,分别测定90例妊娠期高血压疾病患者(其中妊娠期高血压、轻度子痫前期、重度子痫前期各30例)及30例正常对照组产妇静脉血清及胎儿脐血中VE-cadherin的含量.结果 VE-cadherin和hs-CRP在妊娠期高血压疾病组及对照组血清及胎儿脐血中均有表达.VE-cadherin在妊娠期高血压疾病各组血清中含量与对照组血清中的比较,差异有统计学意义(t=7.31、9.82、10.04,均P<0.05),且重度子痫前期组明显高于轻度子痫前期和妊娠期高血压组(t=7.23、8.95,均P<0.05);轻度子痫前期组明显高于妊娠期高血压组(t=7.68,P<0.05).hs-CRP在妊娠期高血压疾病各组血清中含量与对照组血清中的比较,差异有统计学意义(t=8.64、11.53、15.26,均P<0.05),且重度子痫前期组明显高于轻度子痫前期和妊娠期高血压组(t=6.53、8.21,均P<0.05);轻度子痫前期组明显高于妊娠期高血压组(t=8.02,P<0.05).妊娠期高血压疾病患者VE-cadherin和hs-CRP含量呈正相关(r=0.60,P<0.01).VE-cadherin和hs-CRP在妊娠期高血压疾病各组胎儿脐血中的含量,差异无统计学意义(P>0.05).结论 VE-cadherin和hs-CRP的高表达说明妊娠期高血压疾病患者内皮细胞损伤,且VE-cadherin和hs-CRP在损伤过程中起作用.
