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抗幽门螺杆菌HP1188蛋黄抗体的研究
目的 制备抗幽门螺杆菌(H.pylori) HP1188 蛋黄抗体(immunoglobulin yolk,IgY),即 HP1188-IgY,了解其理化特性和生物学活性,为研制H.pylori HP1188-IgY型抗体口服制剂提供实验依据.方法 用纯化的重组HP1188蛋白免疫产蛋鸡,以水稀释法结合氯仿有机沉淀法提取蛋黄抗体(HP1188-IgY),采用SDS-PAGE电泳检测其纯度,Bradford法测定蛋白含量,Western blot分析抗原特异性.间接ELISA评价 HP1188-IgY 对热、酸及胃蛋白酶消化作用的耐受情况.分别检测不同浓度 HP1188-IgY及不同 pH 相同浓度HP1188-IgY对H.pylori的生长抑制试验.用MTT法检测不同浓度HP1188-IgY对H.pylori细胞毒活性的中和作用.结果 HP1188-IgY 纯度约为68%,蛋白浓度为7.79 mg/mL,Western blot结果 显示在相对分子质量30 000附近出现反应条带.HP1188-IgY具有一定的耐热性、耐酸性和耐胃蛋白酶消化的能力.HP1188-IgY在体外可抑制H.pylori生长,并具有浓度依赖性和pH依赖性.HP1188-IgY 能阻断H.pylori菌体蛋白对Hela细胞的毒性作用,且该作用具有浓度依赖性.结论 成功制备了HP1188-IgY,其具有良好的理化性质和生物学特性,为进一步制备预防幽门螺杆菌感染的口服制剂奠定了基础.
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HP1188-IgY体内抗幽门螺杆菌感染的实验研究
目的 研究抗幽门螺杆菌(H.pylori)HP1188 蛋黄抗体(HP1188-IgY)在小鼠体内抗感染作用.方法 用Western blot法分析HP1188-IgY抗原特异性.建立H.pylori感染Balb/c小鼠的动物模型,预防组在小鼠灌喂H.pylori菌液前灌喂不同剂量(1、3、5 mg/mL)的HP1188-IgY,同时设PBS对照组、阴性对照组、阳性对照组.通过小鼠胃组织H.pylori培养、快速尿素酶实验和组织学检查观察H.pylori定植情况.结果 Western blot结果显示在相对分子质量30 000附近出现反应条带.阳性对照组8周后H.pylori的感染率为100%.HP1188-IgY剂量为3 mg/mL和5 mg/mL时,小鼠胃黏膜的H.pylori定植量减少,炎性反应减轻(P<0.05).随HP1188-IgY剂量的增加,感染率降低.结论 该实验成功制备了HP1188-IgY,在小鼠体内能阻止H.pylori的定植,为进一步制备预防H.pylori感染的口服制剂奠定了基础.
