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Rabex-5基因RNAi慢病毒表达载体的构建及其在MCF-7中对Rabex-5表达的影响
目的:构建Rabex-5 RNAi慢病毒表达载体,并转染人乳腺癌细胞株MCF-7,观察其对Rabex-5基因的沉默效应.方法:将设计合成的单链引物退火成双链oligo序列,连接入经AgeⅠ和EcoRⅠ双酶切线性化的pMAGic慢病毒质粒载体中,经转化DH5α感受态细胞并筛选出阳性克隆,测序鉴定.用293FT细胞包装产生慢病毒,感染MCF-7细胞,利用Real-time PCR和Western blot鉴定抑制Rabex-5表达的效果.结果:PCR与测序鉴定证实成功构建了Rabex-5 RNAi的慢病毒载体,转染MCF-7细胞后,与未干扰组和阴性对照组相比,Rabex-5的mRNA和蛋白表达下调,以RNAi3的沉默效应佳.结论:成功构建了Rabex-5 RNAi慢病毒表达载体,其可使MCF-7细胞株Rabex-5表达下调,为进一步研究靶向Rabex-5 RNAi对乳腺癌细胞恶性生物学行为变化及基因治疗研究奠定了实验基础.
关键词： Rabex-5 RNA干扰 慢病毒载体 人乳腺癌细胞株MCF-7 -
乳腺癌细胞中下调RABEX-5对其化疗敏感性的影响
目的 探讨RABEX-5下调表达后,乳腺癌细胞对蒽环类药物和紫杉类药物的敏感性变化.方法 构建RABEX-5 RNAi慢病毒表达载体,并感染人乳腺癌细胞株MCF-7,使细胞内RABEX-5基因表达沉默,Realtime PCR、Western blot方法检测沉默效应.应用CCK-8方法检测RABEX-5沉默后(MCF-7/RNAi),与其阴性对照人乳腺癌细胞株(MCF-7/vector)相比对化疗药物敏感性的变化情况.结果 RABEX-5 RNAi慢病毒表达载体感染MCF-7后,与未干扰组(MCF-7)及阴性对照组(MCF-7/vector)相比,RABEX-5的mRNA和蛋白水平表达下调.与阴性对照组相比,RABEX-5下调表达后,对蒽环类药物表柔比星的化疗敏感性降低,半数致死浓度(IC50)分别为(3.590 0±0.228 69) μg/mL、(1.193 3士0.187 71)μg/mL,差异有统计学意义(P＜0.05);而对紫杉类药物多西他赛的敏感性不变,半数致死浓度(IC50)分别为(11.162 7±0.210 26) μg/mL,(10.536 7±0.430 97) μg/mL,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 RABEX-5下调表达使人乳腺癌细胞MCF-7对蒽环类药物表柔比星产生耐药,而对紫杉类药物多西他赛敏感,为进一步研究RABEX-5在乳腺癌个体化治疗中的作用提供理论基础.
关键词： Rabex-5 人乳腺癌细胞MCF-7 表柔比星 多西他赛 化疗敏感性 -
RABEX-5和RAB5在乳腺癌中的表达及意义
目的 初步探讨RABEX-5和RAB5与乳腺癌的关系.方法 采用免疫组织化学法、RT-PCR和Western blot法检测RABEX-5及RAB5 mRNA和蛋白在60例乳腺癌、15例乳腺纤维腺瘤和15例乳腺正常组织中的表达,并检测相关临床病理指标与RABEX-5及RAB5表达的关系.结果 RABEX-5和RAB5 mRNA及蛋白在乳腺癌组织中的表达高于乳腺正常组织及乳腺纤维腺瘤(P＜0.05).在乳腺癌患者中,肿瘤直径(T)＞5 cm组中的表达高于T≤2 cm组和2 cm＜T≤5 cm组(P＜0.05),在腋窝淋巴结转移阳性者中表达高于阴性者(P＜0.05),但与乳腺癌组织学分级、人表皮生长因子受体2(HER-2)、雌激素受体(ER)和孕激素受体(PR)的表达无关(P＞0.05).RABEX-5和RAB5 mRNA及蛋白表达呈正相关(P＜0.05).结论 RABEX-5可能与RAB5共同参与了乳腺癌的发生及发展.
