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Sox2下调表达对MDA-MB-231乳腺癌细胞β-catenin与转录中介因子γ的影响
目的 下调乳腺癌MDA-MB-231细胞Sox2基因表达,观察对细胞增殖、侵袭和凋亡的影响以及信号因子β-catenin和TIF1γ表达的影响.方法 将MDA-MB-231细胞分为重组质粒转染组(转染Sox2-shRNA干扰载体)、阴性对照组(转染pMafic7.1-shRNA-NC质粒)、空白对照组(未经处理的MDA-MB-231细胞,n=6),并将shRNA-Sox2-1瞬时转入乳腺癌MDA-MB-231细胞,通过Western blot检测乳腺癌MDA-MB-231细胞中Sox2蛋白表达水平,FCM检测细胞凋亡的情况,Transwell检测细胞的侵袭能力,MTS检测细胞活力和增殖能力.另外,采用Westem blot和免疫组化检测靶向抑制Sox2对信号因子β-catenin和TIF1γ蛋白的表达与分布.结果 成功构建重组载体pMafic7.1-shRNA-Sox2.与空白对照组(未转染组)和阴性对照组(转染pMafic7.1-shRNA-NC)相比,pMafic7.1-shRNA-Sox2转染至MDA-MB-231细胞后,Sox2蛋白的表达水平明显下调(P＜0.01),细胞凋亡率明显增加(P＜0.05),细胞的侵袭能力、活力和增殖能力均明显下降(P＜0.05).与空白对照组(0.79 ±0.07)和阴性对照组(0.74±0.10)相比,重组质粒转染组β-catenin(0.15±0.04)蛋白的表达水平明显下调(P＜0.05);同样,与空白对照组(0.74±0.05)和阴性对照组(0.64±0.07)相比,重组质粒转染组TIF1γ蛋白(0.11±0.01)的表达水平明显下调(P＜0.05).结论 靶向沉默Sox2基因能促进细胞凋亡,抑制细胞的增殖和侵袭,其作用可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路与TIF1γ调控有关.
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TIF1γ基因启动子区域突变和甲基化与非小细胞肺癌的关系研究
背景与目的 TIF1γ(transcription intermediary factor 1 gamma)属于转录中介因子1家族的成员,可干扰TGF-β/Smad信号通路,抑制TGF-β介导的信号传导,且TIF1γ在多种肿瘤细胞的表达减弱或缺失表明TIF1γ在癌症的发生发展过程中起到抑癌的作用.本研究旨在探索TIF1γ在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞与组织中的表达差异以确定TIF1γ与肺癌发生关系以及肺癌细胞中TIF1γ表达调控的潜在机制.方法 选取13例NSCLC患者癌组织以及对应的癌旁组织样本,培养正常支气管上皮细胞HBE和NSCLC细胞株:A549和95C.运用Real-time PCR和Western blot检测细胞与组织中TIF1γ基因的表达,并用ImageJ灰度扫描软件计算TIF1γ的相对表达量.通过DNA测序的方法检测TIF1γ基因启动子区域突变情况,并采用Bisulfite-sequencing PCR(BSP)克隆测序方法检测TIF1γ 基因启动子区域甲基化情况.结果 相对于HBE,TIF1γ mRNA和蛋白在A549和95C中明显下调(P＜o.05),13对组织样本中,9个(69.2％)癌旁组织样本里TIF1γ mRNA的表达量高于癌组织样本(P＜0.05).突变检测表明TIF1γ基因启动子区-287-5在细胞株中没有突变发生.经BSP克隆测序方法分析发现在TIF1基因启动子-287-5区域里存在5个可被甲基化的CpG位点(-214、-128、-124、-65和-55).但这些CpG位点的甲基化频率在NSCLC细胞株中相比HBE没有明显差异.结论 TIF1γ在NSCLC的发生中可能起抑癌的作用,TIF1γ基因启动子区域-287-5在正常细胞和NSCLC细胞中都没有发生突变,但在-287-5区域中存在5个可被甲基化的CpG位点.
