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双顺反子载体pVITRO2文献资料
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HLA-C和HLA-G基因真核细胞双表达载体的克隆及鉴定分析
目的构建人HLA-C和HLA-G基因真核细胞双表达载体.方法用RT-PCR从孕妇蜕膜组织有核细胞总mRNA中逆转录扩增全长HLA-C和HLA-G cDNA,首先将HLA-G经BamHⅠ和Cla Ⅰ双酶切,HLA-C经EcoRⅠ和Xho Ⅰ双酶切后,分别定向插入真核细胞双顺反子载体pVITRO2的多克隆位点1(mcs1)和2(mcs2)中,然后经酶切和测序鉴定,确定已建立pVITRO2的单表达质粒pVITRO2-HLA-G和pVITRO2-HLA-C,再将HLA-C cDNA经EcoRⅠ和Xho Ⅰ双酶切,定向插入单表达质粒pVITRO2-HLA-G的多克隆位点2(mcs2)中,经PCR反应初筛,再经双酶切鉴定.结果限制性内切酶和测序分析表明已成功构建了HLA-Cw*0103和HLA-G*0101的单表达质粒pVITRO2-HLA-C和pVITRO2-HLA-G以及双表达质粒pVITRO2-HLA-CG.结论本研究成功构建了真核细胞双顺反子载体pVITRO2的双表达质粒pVITRO2-HLA-CG,以及单表达质粒pVITRO2-HLA-C和pVITRO2-HLA-G.
关键词： HLA-C HLA-G 双顺反子载体pVITRO2 双表达质粒
