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BAG-1、Bcl-2双靶区反义RNA重组载体诱导SGC-7901细胞凋亡
目的 构建BAG-1、Bcl-2双靶区反义RNA重组载体并初步探讨其对SGC-7901细胞增殖活性的影响.方法 从SGC-7901细胞总RNA中逆转录扩增包括全部编码序列的BAG-1和Bcl-2 cDNA,利用生物工程技术,反向插入真核细胞双表达载体pVITR02的多克隆位点中,转染SGC-7901细胞,MTT法检测对细胞增殖的影响,RT-PCR法观察对细胞BAG-1和Bcl-2 mRNA表达水平的变化,流式细胞术检测对细胞周期的影响.结果 限制性内切酶和测序分析表明,双表达质粒pVlTR02-AsBAG-1-Bcl-2构建成功.MTT法检测显示pVITR02-AsBAG-1-Bcl-2载体抑制SGC-7901细胞增殖,并旱时间依赖性,其中以72 h转染组抑制作用显著(P＜0.01);与对照组比较,pVITR02-AsBAG-1-Bcl-2组BAG-1和Bcl-2mRNA表达水平下降(P＜0.05),细胞捌亡比例升高(P＜0.01).结论 成功构建反义双靶区重组载体pVITR02-AsBAG-1-Bcl-2,并发现其能抑制SGC-7901细胞增殖并引起细胞凋亡.
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HLA-C和HLA-G基因真核细胞双表达载体的克隆及鉴定分析
目的构建人HLA-C和HLA-G基因真核细胞双表达载体.方法用RT-PCR从孕妇蜕膜组织有核细胞总mRNA中逆转录扩增全长HLA-C和HLA-G cDNA,首先将HLA-G经BamHⅠ和Cla Ⅰ双酶切,HLA-C经EcoRⅠ和Xho Ⅰ双酶切后,分别定向插入真核细胞双顺反子载体pVITRO2的多克隆位点1(mcs1)和2(mcs2)中,然后经酶切和测序鉴定,确定已建立pVITRO2的单表达质粒pVITRO2-HLA-G和pVITRO2-HLA-C,再将HLA-C cDNA经EcoRⅠ和Xho Ⅰ双酶切,定向插入单表达质粒pVITRO2-HLA-G的多克隆位点2(mcs2)中,经PCR反应初筛,再经双酶切鉴定.结果限制性内切酶和测序分析表明已成功构建了HLA-Cw*0103和HLA-G*0101的单表达质粒pVITRO2-HLA-C和pVITRO2-HLA-G以及双表达质粒pVITRO2-HLA-CG.结论本研究成功构建了真核细胞双顺反子载体pVITRO2的双表达质粒pVITRO2-HLA-CG,以及单表达质粒pVITRO2-HLA-C和pVITRO2-HLA-G.
关键词： HLA-C HLA-G 双顺反子载体pVITRO2 双表达质粒
