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酸性磷酸酶检测评价人精子获能和顶体反应
目的探讨酸性磷酸酶(ACP)检测评价人精子获能和顶体反应(AR)的可行性.方法32名健康生育男性的精子悬液,于37℃下孵育1h获能,用孕酮在有无苯甲基磺酰氟(PMSF)下诱导AR 15、30、45、60min,分别检测获能前后及AR各时间点的精子悬液上清中ACP活性,同时用CASA分析精子运动参数证实精子发生获能和AR.结果精子获能前后的ACP活性无显著性差异;AR(有PMSF)各时间点的ACP活性显著高于获能前后及不加PMSF时的ACP活性;CASA分析证实,精子运动参数的改变与其发生获能和AR的运动特性一致.结论ACP分析为一种简便易行、耗时少、能反映精子群体AR状态的较为客观的方法,但蛋白酶的潜在影响不容忽视.
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精液液化异常者精浆中酸性磷酸酶和锌的检测及其临床意义
精液液化异常是指射精后1h未液化的现象,它包括精液不液化和液化迟缓.精液不液化或液化迟缓均可导致不育.Nilson报告在精子数大于20×106/ml病人中,以精液不液化为唯一异常指标者占11.8%;国内胡毓安等在对1000例不育男性精液常规的调查中发现14.8%的病人精液液化不良[1].多年来的研究发现,精液中的液化因子主要来源于前列腺,精液液化主要受前列腺分泌功能状态影响.为此,我们测定了273例精浆中锌和酸性磷酸酶含量并作白细胞染色计数,以观察它们对精液液化异常的影响.
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去卵巢大鼠血清酶和骨元素镁的关系
目的研究去卵巢后大鼠血清酶和骨元素的变化.方法 15只60周龄.术前取血,测定血清碱性磷酸酶、酸性磷酸酶和骨特异性碱性磷酸酶的活性作为术前组.手术摘除两侧卵巢,饲养6个月后,取血清测定上述三种酶活性作为术后组.大鼠处死,取髂骨作为实验组.另取15个60周龄大鼠15只,处死,取髂骨作为对照组,用中子活化方法测定,骨钙、镁、钠、锰、锶和钾元素的含量.结果术前血清碱性磷酸酶、酸性磷酸酶和骨特异性碱性磷酸酶的活性分别为(21.23±7.11) U/L、(19.32±4.78) U/L和(15.08±3.54) U/L,术后血清碱性磷酸酶、酸性磷酸酶和骨特异性碱性磷酸酶的活性分别为(15.39±5.80) U/L、(12.92±2.41) U/L和( 5.56±1.08) U/L,摘除卵巢后上述各项生化指标均显著降低(P<0.001).大鼠切除卵巢后实验组髂骨镁元素含量为(4.32±0.20) mg/g,对照组髂骨元素含量为(5.12±0.15) mg/g.实验组髂骨镁元素含量显著低于对照组(P<0.01).钙、钠、锰、锶和钾元素含量两组比较无显著差别.结论大鼠去卵巢6个月后血清碱性磷酸酶、酸性磷酸酶、骨特异性碱性磷酸酶和髂骨的镁元素均显著降低.
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周围神经损伤后银杏叶提取物EGb761对感觉神经元的保护作用
目的研究大鼠坐骨神经损伤后,银杏叶提取物(EGb761)对感觉神经元的保护作用.方法SD大鼠36只,分为EGb761组和生理盐水(SAL)组.制作大鼠坐骨神经部分切除断端结扎模型,术后每天经腹腔分别注射EGb761(100mg.kg-1.d-1)和同体积的生理盐水直到取材.2、4、6周处死大鼠取材L4.5脊神经节,酶组化染色观察乙酰胆碱酯酶(AChE)及酸性磷酸酶(ACP)的活性变化,冰冻切片硫槿染色计数神经节感觉神经元数目,电镜观察神经节感觉神经元超微结构的变化.结果与对照组相比,治疗组乙酰胆碱脂酶、酸性磷酸酶活性、感觉神经元存活率及神经元超微结构有明显改善.结论EGb761对周围神经损伤后的脊神经节感觉神经元损害有保护作用.
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用新底物DCAP-P检测酸性磷酸酶方法的建立
目的合成酸性磷酸酶(ACP)的底物2,6-二氯-4-乙酰基苯基磷酸(DCAP-P),并建立以DCAP-P为底物的一种新的ACP测定方法.方法在BTS-310型半自动分析仪和TBA-40FR型全自动生化分析仪上研究连续监测法,建立试验参数.结果本法测定DCAP吸收峰为326 nm;ACP的Km=0.139 mmol/L;340nm时DCAP的摩尔消光系数为14 440 L·mol-1·cm-1,缓冲液浓度0.1 mol/L,适pH5.4,底物浓度2.0 mmol/L,延滞期60 s,线性反应期15 min;线性范围为0～1 188 U/L;血红蛋白＜115.62 mg/L及胆红素对测定结果无影响;本法总ACP与PAP(前列腺酸性磷酸酶)的参考值范围分别为12.58～19.42U/L和2.52～9.04U/L.结论此方法重复性好,线性反应期长,线性范围广,干扰因素少,适用于自动化分析仪.
关键词： 2 6-二氯-4-乙酰基苯基磷酸 合成 酸性磷酸酶 连续监测法 -
肝基质鼠尾胶对日本血吸虫培养细胞AKP和ACP影响的研究
目的研究肝基质、鼠尾胶对日本血吸虫成虫培养细胞碱性磷酸酶(AKP)和酸性磷酸酶(ACP)活性的影响,筛选适合日本血吸虫细胞培养的基质.方法将虫龄28 d的日本血吸虫成虫细胞,接种于预先铺敷有肝基质和鼠尾胶的小盖玻片上常规培养,未铺敷基质者作对照.运用酶细胞化学方法,分别于培养5、14、21、35 d对日本血吸虫成虫培养细胞进行AKP和ACP染色,显微镜下观察并拍照,图像分析仪测定其含量,并作统计分析.结果铺敷的基质不同,培养细胞的AKP和ACP活性不同.AKP、ACP着色深浅均按对照组、鼠尾胶组、肝基质组依次加深.定量分析显示,培养1 4 d内,肝基质组与鼠尾胶组细胞AKP活性明显高于对照组(肝基质组P＜0.01;鼠尾胶组P＜0.05);两基质组培养细胞之间差异也有显著性(P＜0.05).培养21 d后,肝基质组细胞AKP活性分别高于鼠尾胶组和对照组(P＜0.01);后两者培养细胞之间的AKP活性无明显差异(P＞0.05).培养5 d细胞的ACP活性,肝基质组与鼠尾胶组明显高于对照组(P＜0.05),两基质组相互比较差异无显著性(P＞0.05);培养14 d后,各组之间两两比较均有差异(P＜0.05),肝基质组培养细胞ACP活性强,鼠尾胶组次之,对照组弱.结论肝基质较为适合日本血吸虫培养细胞的存活与生长.
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钉螺感染日本血吸虫后酸性磷酸酶含量变化
目的 观察钉螺感染日本血吸虫后酸性磷酸酶(ACP)含量的变化.方法 以软组织挤压法获取感染性钉螺与阴性钉螺血淋巴细胞涂片,分别对2组钉螺血淋巴细胞进行ACP组织化学染色,用显微镜观察其活性变化.结果 感染性钉螺淋巴细胞中ACP含量增加,明显高于阴性钉螺.结论 ACP可能在钉螺感染日本血吸虫毛蚴的防御中发挥作用.
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精浆中游离L-肉碱水平与附属性腺生化指标的相关性研究
目的:研究精浆中游离L-肉碱水平与α-葡糖苷酶、果糖、酸性磷酸酶3项附属性腺生化指标之间的相关性,探讨L-肉碱作为一项生化指标在男性生殖功能评价中的作用.方法:采集30例正常生育男性和222例不育患者精液样品,分别以计算机辅助精液分析系统进行精液常规分析,同时测定精浆中游离L-肉碱、果糖水平以及α-葡糖苷酶和酸性磷酸酶活性.用SPSS 12.0统计软件包分析两组间各项生化指标之间的差异,以及精浆中游离L-肉碱与果糖水平、α-葡糖苷酶和酸性磷酸酶活性之间的相关性.结果:正常生育组精浆游离L-肉碱水平明显高于不育组(P＜0.01).两组间α-葡糖苷酶活性差异有统计学意义(P＜0.05),而果糖水平和酸性磷酸酶活性差异无统计学意义.相关性分析结果显示,精浆游离L-肉碱水平与精浆中α-葡糖苷酶活性具有较强的正相关关系(r=0.504, P＜0.001);而与精浆中果糖水平以及酸性磷酸酶活性之间无相关关系.结论:精浆中游离L-肉碱水平测定可作为评估附睾功能的一项生化指标,其在正常生育组与不育组间的水平差异较两组精浆中α-葡糖苷酶活性差异更为显著,可为男性不育检查及临床诊治和进行有关男性生殖功能机制研究提供参考.
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早泄患者精浆生化指标测定及其意义
目的:观察早泄患者精浆生化指标的变化,探讨其与早泄的关系.方法:根据WHO对早泄的定义,随机选取56例早泄患者,及无早泄正常生育男性60例作为对照.留取各自精液,分离精浆后,分别测定精浆α-葡萄糖苷酶(α-Glu)、酸性磷酸酶(ACP)和果糖(Fru).结果:早泄组精浆中ACP、α-Glu和Fru的含量分别为:(36.37±31.33)U/ml、(39.97±22.09)U/ml、(3.40±1.92)mg/ml,与对照组(54.27±20.96)U/ml、(55.71±16.19)U/ml及(2.55±1.12)mg/ml相比,精浆中ACP、α-Glu的含量明显降低(P＜0.01和P＜0.05).而精浆中Fru的含量两组相比无显著差异(P＞0.05).ACP合并α-Glu含量异常者,早泄组为31%,对照组为13%,两组相比有显著差异(P＜0.05);ACP、α-Glu和Fru含量均正常者,早泄组为10%,对照组为33%,两组相比也有显著差异(P＜0.05).结论:早泄患者精浆ACP和α-Glu含量明显低于无早泄者,提示临床诊治早泄时,考虑前列腺和附睾功能异常并进行治疗,可能是治疗早泄的一个新途径.
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南京市精液分析质量控制的初步研究
目的:调查并分析南京市各家医院对精液分析项目中的精子浓度、精浆果糖、α葡糖苷酶及酸性磷酸酶(ACP)的检测结果,为进一步开展省内乃至全国范围内的精液分析的外部质量控制打下基础.方法:制备低、高浓度的4种检测项目的质控品8份,分装后检测每份质控品的结果并计算变异系数(CV).质控品分发至南京市11家医院,收集并分析质控品回收结果.以分装后检测结果为参考值,计算不同实验室测得的质控品结果的总相对误差(RE).结果:8份质控品分装后检测的CV为3.83%～11.16%.11家医院回报的精子浓度结果11份,精浆α葡糖苷酶、果糖和ACP结果5份.不同实验室高、低浓度精浆果糖的检测结果差异小(CV分别为8.99%和3.95%),其次为α葡糖苷酶(CV分别为16.66%和18.41%),而精浆ACP的检测结果差异大,CV分别为54.12%和65.58%.RE亦有相同的趋势,不同实验室精浆果糖检测的总RE分别为11.99%和20.31%,α葡糖苷酶为22.92%和27.26%,而ACP为7.34%和318.35%,即高浓度ACP检测结果的RE大.11家医院中,6家用计算机辅助精液分析(CASA)系统检测精子浓度,5家用改良牛鲍血球计数池的方法检测.血球计数池计数的精子浓度结果[分别为(62.74±16.63)×106/ml和(163.32±36.24)×106/ml]和RE值(分别为148.47%和187.59%)显著高于CASA系统检测的结果分别为[(24.88±4.16)×106/ml和(54.24±23.06)×106/ml]和RE值(分别为13.97%和10.48%).结论:目前男科学实验室精浆α葡糖苷酶和果糖的检测方法比较稳定,结果的变异在可接受的范围内,而ACP检测的方法可能不适合于临床常规使用,尚需进一步改进.血球计数池明显高估精子浓度,不适合用作精子浓度分析.
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两种精浆酸性磷酸酶检测方法的比较与评价
目的:对检测精浆酸性磷酸酶(ACP)活性的常规方法(磷酸苯二钠法)和试剂盒方法进行比较,并探讨试剂盒方法取代常规方法用于常规检测的可能性. 方法:79份不育男性的精浆,分别用常规方法和试剂盒方法检测其ACP活性.取1份精浆标本用于两种方法的批内检测,另取2份标本用于两种方法的批间检测.随机留取10份精浆标本,稀释后立即或放置30 min后检测ACP活性.另随机留取10份精浆标本,同时由2位技术人员分别用常规方法检测ACP活性. 结果:试剂盒方法所测ACP活性与常规方法显著相关(r=0.745,P=0.000).试剂盒方法与常规方法相比,两者批内CV(13.72%;10.66%)比较接近,而批间CV(13.8%和15.49%;24.43%和21.04%)明显较低.精浆稀释后放置30 min,无论是常规方法还是试剂盒方法,所测结果都显著降低(P＜0.05).而2位技术人员用常规方法所测精浆ACP活性无显著区别(P=0.165). 结论:试剂盒方法检测精浆ACP活性优于常规方法,可以取代常规方法.
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精浆酸性磷酸酶和γ-L-谷氨酰转肽酶检测的比较及其与精液参数的相关性研究
目的:对精浆酸性磷酸酶(ACP)和y-L-谷氨酰转肽酶(γ-GT)活性检测进行比较,并分析ACP和γ-GT活性与精液参数的相关性.方法:133例精浆标本,分别检测ACP活性和γ-GT活性.随机留取2例精浆标本,1例用于ACP批内检测,另1例用于γ-GT批内检测.随机留取4例标本,2例用于ACP批间检测,另2例用于γ-GT批间检测.用计算机辅助的精液分析(CASA)系统分析精液标本的精液量、pH、精子密度、活动率、a+b级活动精子百分率等参数.同时分析ACP和γ-GT活性与精液参数的相关性.结果:精浆ACP活性和γ-GT活性呈显著性正相关(r=0.570,P=0.000).ACP的批内变异系数(CV)为13.72%,批间CV分别为13.80%和15.49%.γ-GT批内CV为7.68%,批间CV分别为7.76%和9.73%.精浆ACP活性和γ-GT活性均与pH值呈显著负相关(r=-0.330,P=0.000;r=-0.388,P=0.000).γ-GT活性与精子密度呈显著正相关(r=0.165,P=0.045),而ACP活性与精子密度无显著相关(r=0.048,P=0.546).ACP活性和γ-GT活性均与精子活动率、(a+b)级活动精子百分率、精液量、禁欲时间以及年龄无显著相关性.结论:精浆γ-GT活性检测的精确性高于ACP活性检测,两者与精液参数的相关性基本类似.提示精浆γ-GT活性检测比ACP活性检测更适合用来评价前列腺功能.
关键词： 酸性磷酸酶 γ-L-谷氨酰转肽酶 精浆 精液参数 -
不育男性精浆酸性磷酸酶和锌与精液参数分析
目的:探讨不育男性精浆中酸性磷酸酶和锌水平与精子密度及精子活力的关系.方法:对21例正常生育男性、169例不育男性精浆中酸性磷酸酶和锌分别进行检测,并作白细胞染色计数.结果:①不论按精子密度分组或按精子活力分组,不育各组精浆中酸性磷酸酶含量明显低于正常对照组(P<0.01),但不育各组之间的差异无显著性意义(P>0.05);②不论按精子密度分组或按精子活力分组,不育各组精浆锌含量仅死精子症组低于正常对照组(P<0.05);③按精子密度分组,各组标本之间白细胞计数的差异用秩和检验分析,不育各组白细胞计数的平均秩次明显大于正常对照组(P<0.001);按精子活力分组,不育各组精浆白细胞计数均高于正常对照组(P<0.05),死精子症组除外(P>0.05).④精浆中酸性磷酸酶及锌含量均与白细胞计数不相关(r=0.088,P=0.162;r=0.¨9,P=0.057).结论:精浆中酸性磷酸酶水平下降和白细胞增多均可导致精子密度和精子活力降低,可作为男性不育的诊断指标;不育患者精浆中锌离子水平虽然低于正常对照组,但无显著性差异.
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硝普钠对人精子获能及顶体反应的影响
目的:探讨一氧化氮(NO)对人精子获能及顶体反应(AR)的影响.方法:在48例健康生育男性的精子悬液中加入不同浓度的NO供体硝普钠(SNP),于37℃孵育1 h获能,用孕酮诱导AR 15、30、45、60 min,采用磷酸苯二钠法分别检测精子获能前后及AR各时间点的精子悬液上清中酸性磷酸酶(ACP),同时用计算机辅助精液分析系统(CASA)分析精子运动参数,观察NO对精子获能及AR的作用.结果:NO浓度在50、100nmol/L时精子悬液中ACP活性增高,精子运动参数明显增强,150、200nmol/L时ACP活性及精子运动参数变化不大,250、300 nmol/L时精子悬液中ACP活性和精子运动参数明显降低.结论:NO对精子获能和AR具有双重性,在低浓度下有促进精子获能、AR和精子运动参数增强的作用,而在高浓度下对精子获能、AR和精子运动参数有抑制作用.精子ACP检测对精子群体获能和AR状态的评价是种较为客观、可靠的方法.
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人精子顶体反应3种检测方法的比较与评价
目的:寻找简便和准确的精子顶体反应检测方法.方法:正常人精液标本液化后混合,分成6组,分别用金霉素染色法、考马斯亮蓝染色法和酸性磷酸酶检测法对孕酮诱导顶体反应前后的人精子进行形态学观察并且对顶体反应率进行数据统计.结果:经考马斯亮蓝和金霉素染色后,发生顶体反应的精子和没有发生顶体反应的精子均有明显的形态差异;经考马斯亮蓝染色、金霉素荧光染色和酸性磷酸酶测试法检验,孕酮诱导组与阴性对照组的精子顶体反应率均有明显差异(P＜0.05).结论:3种方法均可作为顶体反应的检测手段,但考马斯亮蓝染色更为简便和稳定.
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酸性磷酸酶检测评价人精子顶体反应
生理状态下,获能的精子穿过卵丘细胞外基质时被激活引发顶体反应(acrosome reaction,AR),将顶体内的酶释放出来以溶解放射冠与透明带(ZP),进而穿入卵细胞与其融合,完成受精[1].因此,检测精子是否发生顶体反应,有助于预示精子的受精能力.AR期间释放的顶体酶类之一为酸性磷酸酶(ACP),ACP的分析可能成为评价AR的一个指标.为此,本文用钙离子载体A23187诱导人精子发生AR,并检测了AR前后ACP的变化,现报告如下.
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局灶性脑缺血后失联络区酶组织化学研究
目的探讨局灶性脑缺血失联络区乙酰胆碱酯酶(AChE)、酸性磷酸酶(ACP)、琥珀酸脱氢酶(SDH)酶活性的变化.方法通过脑血流放射自显影和大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型确定失联络区,用酶组织化学染色法研究AChE、ACP、SDH的活性变化.结果局灶性脑缺血后失联络区AChE、ACP活性无明显改变,SDH活性下降.结论局灶性脑缺血失联络区胆碱能神经及溶酶体功能无改变,线粒体代谢活性降低.
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糖尿病酮症酸中毒家兔肺泡超微结构和细胞化学的研究
目的:研究糖尿病酮症酸中毒肺损伤的发病机制.方法: 实验组(DK组,n=6)给予四氧嘧啶(alloxen)150mg·kg-1和链脲佐菌素(STZ)150mg·kg-1,对照组(NS组,n=6)使用生理盐水,72h后行动脉血气分析,处死动物,取肺组织标本,做病理学检查,采用铅离子捕获法做常规超微结构、酸性磷酸酶(ACPase)细胞化学检查.结果:NS组血气分析正常;肺泡上皮细胞组织结构完整;溶酶体内ACPase活性表达,溶酶体结构完整.DK组体质量下降,动脉血气分析显示达到糖尿病酮症酸中毒标准;光镜可见肺泡内出血和肺泡隔的增厚、断裂;超微结构可见有肺泡上皮损伤、血管内有炎症细胞贴壁、肺泡内见炎症细胞等改变;肺泡上皮细胞内溶酶体形态不规则,细胞浆内有散在黑色酶颗粒,溶酶体数量增多.结论:糖尿病酮症酸中毒能引起肺上皮细胞组织结构损坏和细胞内溶酶体的破坏.
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山绿茶总黄酮抑制实验性大鼠良性前列腺增生的作用观察
48只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、前列康组和山绿茶总黄酮高、中、低剂量组(80,40,20 mg/kg)6组,对去势大鼠注射丙酸睾酮造成的良性前列腺增生症( BPH)模型(模型组去势注射丙酸睾酮,对照组去势未注射丙酸睾酮),用前列康和山绿茶总黄酮高、中、低剂量对前列腺增生模型大鼠灌胃；模型组、对照组以生理盐水灌胃,连续5周.测定大鼠前列腺湿重比,大鼠血清总酸性磷酸酶(ACP)、非前列腺特异性酸性磷酸酶(NPAP),计算前列腺特异性酸性磷酸酶(PAP).光学显微镜下观察前列腺组织的形态变化.结果表明,山绿茶总黄酮高、中剂量组(80,40 mg/kg)的前列腺湿重指数、血清PAP活性与模型组比较均明显降低,差异有显著性(P＜0.01),与前列康组相似；显微镜下山绿茶总黄酮高剂量(80mg/kg)对上皮细胞形态与模型组相比有明显改变:腺腔中分泌物积聚,可见前列腺结石,与正常组的前列腺细胞结构基本相接近.说明山绿茶总黄酮具有抑制前列腺增生的作用.
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实验性糖尿病酮症酸中毒家免Ⅰ型肺泡上皮损伤和修复状况研究
目的:研究糖尿病酮症酸中毒家兔Ⅰ型肺泡上皮结构和功能的变化,探讨其损伤及修复机制.方法:新西兰家兔12只,随机分为实验组和对照组各6只,实验组给予链脲佐菌素(STZ)150mg·kg(-1)和四氧嘧啶150mg·kg(-1),对照组给予等剂量生理盐水,72h后检测动脉血气、尿酮体及血电解质,处死动物,取肺标本进行光镜、Ⅰ型肺泡上皮超微结构、Ⅰ型肺泡上皮酸性磷酸酶(ACPase)细胞组织化学等检查以及血小板衍生生长因子(PDGF)组织免疫化学检查.结果:实验组血气72 h后皆达到糖尿病酮症酸中毒标准;对照组正常.实验组光镜下可见肺泡腔内有明显渗出,肺泡腔见炎症细胞,肺泡隔增宽及肺出血;对照组无异常.PDGF免疫组织化学观察可见实验组肺泡壁和微血管内表达明显增高.实验组Ⅰ型肺泡上皮超微结构可见细胞膜结构模糊、基底膜增厚、细胞膜外高电子物质聚集等;对照组无异常.实验组动物细胞内ACPase活性也明显增强,溶酶体数量增多,形态不规则;对照组动物ACPase活性正常,全部存在于结构完整的溶酶体内.结论:糖尿病酮症酸中毒时Ⅰ型肺泡上皮细胞明显受损,细胞内ACPase活性增强,溶酶体数量增多,溶酶体的破坏对促进Ⅰ型肺泡上皮的损伤起了重要的作用;肺部在损伤的同时也启动了修复,PDGF参与了肺部修复的过程.
