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法医物证DNA自动化检验技术体系的研究
目的 建立自动化工作站同步提取不同种类涉案法医生物检材DNA的新方法.方法 选用TECANFreedom EVO 100-4、75-2型自动化提取、加样工作站,采用磁珠法及Chelex-100法对各类涉案生物检材进行DNA提取、PCR扩增、毛细管电泳检测其STR分型,进行比较测试.在"全国公安机关DNA数据库应用系统"中建立并应用实验室信息管理系统(LIMS)模拟实施规范化DNA检案.结果 1552份各类检材,采用工作站-磁珠法提取DNA效果佳,STR检测成功率为95%,工作站-Chelex法为88%;二者分别与其手工提取法比较,成功率无明显差异.92个样本同期检测,自动化工作站较手工操作DNA检案时间可缩减1.25倍.结论 工作站-磁珠法提取涉案检材DNA,可获得满意的STR分型结果.应用LIMS管控,可有效防控污染,明显提高检案效率及鉴定质量.
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应用自动化工作站提取常见生物样本DNA
目的 建立使用自动化工作站提取法医案件生物样本DNA的方法.方法 选用Biomek(R)3000自动化工作站,采用DNA IQTM系统及Chelex法对法医案件中常见生物样本进行DNA提取,荧光定量技术进行定量,PGR扩增16个STR基因座并与手工提取方法比较.结果 与手工提取方法进行比较,选用自动化工作站结合使用DNAIQTM系统及Chelex法提取DNA可获得满意的STR检验结果.结论 自动化工作站可用于法医案件中常见生物样本的DNA提取.
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DNA提取自动化工作站在法医学领域的应用
自动化工作站是指运用生化技术对生物性检材进行批量处理分析的全自动化工作平台,它可在短时间内批量进行移液,加样,混合等操作,特别适合用于大量牛物性检材的PCR模板的制备.本文仅对DNA提取自动化工作站的基本模式、基本方法、法医学应用等进行综述,以期使该技术在法医DNA分析中得到更广泛的应用.
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自动化工作站与Chelex-100法对血样本检验效果比较
目的 比较自动化工作站与Chelex-100法对不同浓度血液样本的检验效果.方法 取新鲜血液,按倍量稀释法制成2～1 024倍10种不同浓度的血样本,分别采用自动化工作站和Chelex-100法提取模板DNA,应用IdentifilerPlus试剂盒进行扩增及毛细管电泳检测,并对电泳结果进行比较.结果 稀释2～32倍的血样本,采用两种方法的检验成功率均可达到100％;稀释64倍的样本,Chelex-100法成功率为41.3％、完整分型数为78.3％,自动化工作站成功率为13.0％、完整分型数为43.5％,两者比较,差异均有统计学意义(P＜0.01);稀释128倍的样本,成功率在Chelex-100法(8.7％)和自动化工作站(2.4％)之间比较,其差异无统计学意义(P＞0.05);稀释256倍以上,两种方法均无法获得分型结果.结论 自动化工作站适用于一定浓度血样的检验,而对于微量血样,Chelex-100法的效果可能更优.
关键词： 法医物证学 血样 倍比稀释 自动化工作站 Chelex-100 -
批量陈旧血样DNA的自动化检验
目的 建立批量陈旧血样DNA自动化提取检验的方法.方法 采用普通磁珠法和本文建立的磁珠法经TECAN Freedom EVO 150-8型自动化工作站分别提取540份陈旧血样模板DNA,采用Sinofiler(TM)试剂盒进行荧光标记复合扩增.结果 采用普通磁珠法和本文所建DNA提取方法,在540份样本中获得全部基因座STR分型的样本分别为217份和488份,检验成功率分别为40.2%和90.3%.结论 本文所建方法可显著提高大批量陈旧血样自动化检验成功率.
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国产磁珠结合自动化工作站批量提取生物检材DNA的应用
目的 建立国产磁珠结合自动化工作站批量提取案件中牛物检材DNA的方法.方法 采用国产磁珠结合Bio-Robert Universal System自动化工作站对案件中常见的生物样本进行DNA提取,检测Identifiler系统16个STR基因座,在ABI3130XL遗传分析仪上进行STR分型.其中210份样品同时在ABI7500型荧光定量PCR仪上进行定量.结果 9 100份10类生物检材应用国产磁珠结合自动化工作站,大部分可提取到足够的DNA进行STR检验.STR检验成功率高的为口腔拭子、肌肉,达100%,接触细胞检材的成功率较低,为50.0%.结论 国产磁珠结合自动化工作站可用于案件中常见的大部分生物样本的DNA提取.
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血液中乙醇检验全自动体系的建立
目的 建立血液中乙醇含量检验的自动化体系.方法 采用自动化工作站提取-顶空气相色谱检验.在自动化工作站提取中,对负压采血、顶空瓶密封时间、取样针进行考察优化,并对自动取样和手工取样进行比较.结果 乙醇的自动化工作站提取-顶空气相色谱检验的定量分析数据稳定,两份平行样品相对相差小于5%,优于手工提取.乙醇含量在0.1~3.0 mg/mL范围内线性关系良好(r≥0.999),重现性好.结论 该方法具有操作简单快捷、实验流程更加规范、实验数据更加准确、消除人工操作误差、重现性好等特点,可广泛应用于血液中乙醇定性定量的检验鉴定.
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5种磁珠检验滤纸血痕自动化工作站检验结果比较
近年来,采用自动化工作站结合磁珠法提取滤纸血痕的DNA,在法庭科学DNA数据库建设中得到广泛应用[1-2].但由于生产工艺等因素的差异,不同厂家磁珠的DNA提取效率不尽相同.本研究选择常见的5种商品化磁珠,在自动化工作站上对滤纸血痕进行检验,以验证其DNA提取的效率.
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应用自动化工作站批量提取生物检材DNA
在刑事侦查的法医学实践中,生物检材种类繁多,并以较快的速度增长,以往手工操作分别提取各种检材DNA的方法已不能适应当前工作的需要.建立自动化工作站高通量提取各种生物检材DNA是可能的解决途径之一[1-2].本实验采用Agowa公司法医提取试剂盒在Hamilton STAR型自动化工作站建立生物检材DNA自动化检验体系.使检材提取自动化和规范化.提高了检案的效率和质量.
