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MRE11基因在食管鳞癌中的表达
目的 探讨MRE11mRNA在食管癌组织中表达,并探讨其与肿瘤病理参数的相关性.方法 收集22例明确诊断的食管癌中心组织及其相应癌旁组织,提取总RNA并逆转录成cDNA,采用SBYR Green适时荧光定量方法检测MRE11基因在22例食管鳞癌中心组织及其边缘组织mRNA水平的表达,并分析其与性别、年龄、临床分期、淋巴结转移与否以及肿瘤大小等的相关性.结果 MRE11 mRNA在食管鳞癌组织中的表达显著低于癌旁组织(P=0.006).虽然其表达与年龄、分化程度.有无淋巴结转移以及有无吸烟、饮酒史均无关,但与临床分期和肿瘤生长速度有关,T1和T2期患者的MRE11 mRNA的表达显著低于T3和T4期患者(P=0.000),肿瘤生长较慢的患者MRE11 mRNA的表达也低于生长较快的患者(P=0.012).结论 MRE11的表达在食管鳞癌组织中的表达受到抑制可能为食管鳞癌发生的分子机制;且MRE11在较低的临床分期和生长速度较慢的食管鳞癌中表达低于较高的临床分期和生长速度较快的食管鳞癌中表达,MRE11可能在食管鳞癌的发生发展过程具有重要意义.
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端粒长度、MRE11和Ku80在再生障碍性贫血中的表达及其与发病相关性研究
目的:检测再生障碍性贫血(aplastic anemia,AA)患者骨髓单个核细胞的端粒长度、端粒相关蛋白MRE11和Ku80基因表达水平,探讨它们与AA发病的关系.方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测40例AA患者和20例正常对照者骨髓单个核细胞中端粒长度、MRE11和Ku80 mRNA表达情况,并进行相关性比较.结果:AA患者端粒长度、MRE11 mRNA和Ku80 mRNA表达水平均较正常对照组明显降低(P＜0.05);年龄≥45岁的AA患者及正常对照组分别较年龄＜45岁的端粒长度明显缩短(P＜0.05);年龄＜45岁及年龄≥45岁的AA患者分别与同年龄段的对照组相比,端粒长度均明显缩短(P＜0.05);端粒长度与MRE11 mRNA表达水平(r=0.054,P＞0.05)和Ku80 mRNA表达水平之间无相关性(r=0.235,P＞0.05).MRE11 mRNA表达水平与Ku80mRNA表达水平之间呈正相关(r =0.863,P＜0.05).结论:端粒长度的改变在AA的发病及疾病进展中可能发挥着重要作用,MRE11和Ku80表达的降低可能参与了AA的发病过程.
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MRE11参与炎症小体信号通路激活的初步研究
目的：探究减数分裂重组蛋白11同系物A（MRE11）在不同刺激物诱导下炎症小体激活中的作用和地位。方法利用不同刺激物，如Poly（I∶C）、Poly（dA∶dT）、E．coli gDNA、293T gDNA和CPPD以及生殖疱疹病毒（HSV）等处理单核巨噬细胞THP-1，通过IL-1β酶联免疫吸附试剂盒（ ELISA）筛选出诱导激活炎症小体的有效刺激物；合成siMRE11干扰小RNA，转染THP-1细胞，免疫印迹检测MRE11干扰下调效率；利用筛选到的阳性刺激物处理MRE11干扰下调的细胞，采用ELISA和免疫印迹方法检测MRE11对细胞分泌炎性因子IL-1β水平和前胱天蛋白酶（pro-caspase）-1切割的影响。结果在MRE11干扰下调的THP-1细胞中，Poly（I∶C）、Poly（dA∶dT）、E．coli gD-NA和293 T gDNA 刺激激活细胞分泌的IL-1β水平以及前胱天蛋白酶-1切割的水平均有不同程度降低。结论MRE11参与由DNA以及RNA刺激激活的炎症小体信号通路。
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MRN复合物(MRE11/RAD50/NBS1)生物学作用的研究进展
双链DNA损伤(double strand breaks,DSBs)是导致基因组不稳定和细胞死亡的主要原因.MRE 11/RAD50/NBS1是检测和修复DSBs的重要复合物[1].细胞代谢过程中的复制、有丝分裂及遗传毒性化学物质和放射治疗均能引起DSBs[2-3].MRN复合物在DSBs修复过程中发挥重要作用,参与起始修复、引发信号转导和协助修复等DNA损伤修复应答的每个环节[4].近些年,在放射治疗敏感性的探索中发现,抑制MRN复合物活性,阻碍肿瘤细胞的DNA损伤修复,可达到放疗增敏的目的[5].
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原发性胃癌中MRE11基因的突变筛查
目的:研究染色体不稳定性相关基因MRE11(meiotic recombination 11 homolog A)突变与原发性胃癌的相关性.方法:收集27例原发性胃癌病人的胃癌组织和对应的正常胃黏膜组织,并通过显微切割方法从胃癌组织中获取较纯胃癌细胞.设计扩增MRE11基因外显子的引物共20对,采用PCR产物直接测序方法在胃癌细胞和对应正常胃黏膜组织中对MRE11基因编码区进行突变检测,并运用CGH方法对存在突变的胃癌细胞进行染色体分析.结果:在27例原发性胃癌中,4例存在MRE11基因共4个体细胞水平的错义突变,其中3例为肠型胃癌.CGH显示该4例胃癌均存在5个以上基因组片断的获得或丢失事件.结论:MRE11基因突变可能在某些原发性胃癌的发生发展中起着重要作用,尤其是显示染色体不稳定性的肠型胃癌.
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Mre11多克隆抗体的制备及初步鉴定
目的 原核表达人Mre11蛋白,并制备出Mre11蛋白的多克隆抗体,为研究Mre11蛋白功能奠定基础.方法 以人cDNA文库为模板,构建出原核表达质粒PET41a-Mre11,然后转化受体菌E.coli BL21,再经IPTG诱导表达,通过采用GST亲和纯化获得GST-融合蛋白,将该融合蛋白免疫兔以制备出Mre11多抗血清,后采用western-blot 及免疫荧光等方法检测其在细胞中的特异性.结果 在受体菌E.coli BL21中成功诱导表达出了GST-Mre11融合蛋白,免疫新西兰大白兔后获得了高效价的Mre11蛋白抗血清,IP、western-blot及免疫荧光等多种方法检测证实该抗血清能够特异性识别293T和U2OS细胞株中Mre11蛋白,并能够正确清楚检测293T和U2OS细胞株中的Mre11表达情况,具有良好的特异性和高效性.结论 成功制备出了兔抗人Mre11蛋白的多克隆抗体,为深入研究Mre11蛋白在DNA损伤中的功能奠定了基础.
