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2007-2010年湖南省肾综合征出血热监测及病毒种系进化分析
目的 分析2007-2010年湖南省肾综合征出血热(HFRS)的流行特征及病毒基因的分型与种系进化.方法 对2007-2010年湖南省传染病监测信息报告管理系统网络直报的HFRS病例资料及疫情监测资料运用描述性流行病学方法对人间与啮齿类动物间的疫情进行分析和比较,应用免疫荧光试验(IFA)、RT-PCR技术对HFRS病例血清样本及鼠肺组织样本进行病原学检测,对病毒M基因特征进行生物信息学分析.结果 4年间14地市(州)共报告HFRS病例2 115例,病死率为1.28％；疫情主要分布在湘中的娄底和邵阳地区,农民占67.19％；共布鼠夹55 289次,捕鼠2 316只,鼠肺组织总带毒率为2.18％；疫区类型为姬鼠型为主的混合型；2份HFRS患者血清及1份鼠肺组织HTNV特异性引物与分型引物RT-PCR扩增为阳性；病毒在进化上与84Fli株在同一组内,核苷酸序列高度同源；3株病毒均为HTNV型、H5亚型病毒株.结论 近年来湖南省HFRS发病率和死亡率总体呈现下降趋势,受某些因素的影响,局部地区疫情相对较严重；病毒M基因同国内其他毒株比较,未发生较大变异.
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肾综合征出血热汉坦病毒分型及序列特征的研究
目的 分析黑龙江省肾综合征出血热(HFRS)患者携带汉坦病毒的基因型别及序列特征.方法 采集临床诊断为肾综合征出血热病人的全血60例,其中通过金标法检测出血热特异性抗体阳性40例、阴性20例,血凝块提取汉坦病毒RNA,应用RT-Nest-PCR及核苷酸序列测定分型技术对黑龙江地区的汉坦病毒进行分型研究,设计汉坦病毒M片段通用引物(MOF,MOR)及HTNV和SEOV的M片段特异性引物(HTNMF、HTNMR,SEOMF、SEOMR),应用Nest-PCR进行扩增,回收阳性扩增产物进行基因序列测定,将所测基因序列与国内外HV病毒株序列进行核苷酸同源性分析,构建M基因种系进化树.结果 出血热特异性抗体阳性的病例中扩增出HTN型19份,抗体阴性的病例中扩增出HTN型1份、SEO型l份.总体来看黑龙江省流行的汉坦病毒毒株主要为HTN型和SEO型,以HTN型为主.经核苷酸及氨基酸同源性和种系进化分析表明其黑龙江地区的病毒株同源性较高,其中HTN型与76 ～ 118株同源性较高,SEO型与Z37株的同源性较高.结论 黑龙江省的HV感染病例多为HTN型,与其他GenBank中的各地标准株的核苷酸及推导的氨基酸序列均有一定差异,在系统进化树中分析HTN型与76-118株较为接近.SEO型与国内Z37较为接近.结合临床症状发现其临床症状较为相似的在系统进化发生树中较为接近.
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星形胶质细胞的生物学功能及其对脑血流量的调节
星形胶质细胞(As)是中枢神经系统主要的胶质细胞类型,数量上远远超过神经元.然而,随其在脑内的部位及种属不同,As与神经元比例不同,As与神经元比例的高低常作为一个种系进化与否的标准.
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内蒙古自治区呼伦贝尔市鼠类感染肾综合征出血热的病原学研究
目的 查明引起内蒙古自治区呼伦贝尔市鼠类感染肾综合征出血热(HFRS)的病毒基因型及亚型.方法 2014年春季在呼伦贝尔市莫力达瓦旗HFRS疫区捕获啮齿类宿主动物,对捕获的宿主动物进行分类鉴定.取90只鉴定后的鼠进行无菌解剖取肺组织,提取RNA,用实时荧光定量反转录PCR (Real-Time RT-PCR)扩增汉滩型病毒(HTNV)、汉城型病毒(SEOV)及普拉马病毒(PUUV),对扩增结果为阳性标本以反转录PCR(RT-PCR)法扩增部分S基因片段,将目的片段测序且与已知病毒序列进行系统发生分析并分型.结果 呼伦贝尔市HFRS疫区是以姬鼠型为主的混合疫区,捕获鼠类共10种362只,鼠类平均密度为13.92％(362/2600).野外以黑线姬鼠为优势鼠种(占43.21％,70/162),其次为大林姬鼠(占34.57％,56/162);居民区以褐家鼠为优势鼠种(占40.50％,81/200),其次为黑线姬鼠(占31.50％,63/200).在90份鼠肺组织中,23份鼠肺样品检测到汉坦病毒(HV),且均为HTNV.对10株部分S片段核苷酸产物进行序列测定,均为HTNV的H6亚型.结论 引起内蒙古自治区呼伦贝尔市鼠类感染HFRS的病毒基因型为HTNV,其S基因亚型为H6.
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人巨细胞病毒UL144基因多态性与婴儿肝炎
目的 了解人巨细胞病毒(HCMV)UL144基因在婴儿HCMV肝炎中的多态性及序列特点.方法 收集2017年1—6月温州医科大学附属第二医院24例HCMV肝炎患儿的尿液,通过离心获取尿沉渣,提取HCMV DNA;采用PCR扩增DNA提取物UL144基因开放读码框(ORF),并进行荧光电泳检测;扩增阳性样本进行DNA测序及分析.结果 24例HCMV肝炎患儿尿沉渣中,11例扩增阳性(其中样本IH6氨基酸编码提前终止),UL144基因检出率为45.8％.种系进化树分析显示,10例阳性样本(除外IH6)DNA序列分为3个基因型为A型(1例),B型(8例),C型(1例).将所测得的UL144序列及Toledo株进行同源性比较,核苷酸同源性为56.8％～100％,氨基酸同源性为48.2％～100％;与Toledo株比较,A型和C型氨基酸序列变异性小,同源性分别为98.2％和82.9％;而B型变异性大,同源性为48.8％～49.4％.EXPASY数据库分析功能位点显示,除ZF-CTCHY和Prokar_Lipoprotein仅存在于UL144 B型外,其他功能位点均存在于三种基因型中;其中N-glyco-sylation、TNFR_NGFR_1、CRD、TNFR_C6、NCD3G呈高度保守性.结论 婴儿HCMV肝炎UL144基因存在A、B、C 3个基因型,以B型为主;A型和C型较为保守,而B型存在显著变异性.UL144基因所编码蛋白的重要功能位点具有高度保守性.
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汉坦病毒M、S基因分型及种系进化分析
目的 探讨湖南省肾综合征出血热(HFRS)患者及宿主动物黑线姬鼠携带汉坦病毒的基因型别及序列特征.方法 应用免疫荧光试验(IFA)对鼠肺标本进行粗筛,提取IFA阳性鼠肺组织及HFRS患者血清总RNA,设计汉坦病毒M、S基因特异性引物,应用RT-PCR技术进行扩增,回收阳性扩增产物并克隆到pMD-18T载体进行序列测定,将所测序列与国内外HTNV及SEOV病毒株序列进行核苷酸同源性分析,应用MEGA5.0.4软件构建M、S基因种系进化树,结果 IFA阳性鼠肺标本荧光显微镜下可见做在的黄绿色针尖大小样颗粒;RT-PCR法扩增汉坦病毒M、S基因,HTNV通用引物可见490bp与593 bp的阳性条带;阳性产物进一步应用HTNV分型引物进行M、S基因检测,分别扩增出-约242 bp与276 bp大小的条带;SEO型特异性M、S基因片段内侧引物扩增反应均为阴性;编号为Hunan01、Hunan02、Hunan03的M、S基因序列与HTNV型84FLi株、SN7株的同源性高,与SEOV型Gou3株的同源性低;种系进化分析表明,Hunan01、Hunan02、Hu-nan03为汉坦病毒H5亚型.结论湖南省存在HTNV型感染病例与宿主动物,基因分型技术能进一步对病毒亚型进行鉴定.
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湖南省实验动物病毒感染现况分析
目的 对实验动物病毒感染状况进行抽样检测与评估. 方法 对湖南省相关生产及使用实验动物的机构进行大鼠、小鼠随机抽样,应用ELISA法进行大鼠汉坦病毒、大鼠仙台病毒、小鼠仙台病毒、小鼠鼠痘病毒、小鼠肝炎病毒的抗体检测,应用Real-time PCR进行肠道病毒71、柯萨奇病毒A16及轮状病毒的核酸检测,设计特异性汉坦病毒M基因扩增引物,应用聚合酶链式反应(PCR)进行汉坦病毒核酸检测,对阳性产物进行基因序列测定,应用生物信息学方法,通过分子进化分析确定病毒的型别. 结果 56份大鼠血清标本汉坦病毒及仙台病毒抗体检测为阴性;135份小鼠血清标本仙台病毒、鼠痘病毒、肝炎病毒的抗体检测结果均为阴性:189份大鼠小鼠血液标本肠道病毒71、柯萨奇病毒A16及轮状病毒的核酸检测均为阴性,1份SD大鼠血液标本汉坦病毒M基因PCR扩增结果为阳性,产物大小约860 bp,测序产物经BLAST序列比对,初步确定为汉坦病毒,进一步分子进化分析表明为汉坦病毒HTN型,与汉坦病毒疫苗株Z10株比较,核苷酸同源性为86％,氨基酸同源性为89％. 结论 湖南省实验动物存在汉坦病毒HTN型感染,应及时对实验动物进行免疫接种及从业人员健康体检.
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一例麻疹病例的实验室确诊及病毒种系进化分析
目的 对一例疑似麻疹病例进行实验室诊断,同时对病毒种系进化进行分析. 方法 应用Measles IgM试剂盒(μ-capture)对疑似患者血清进行病毒IgM抗体的检测,采集咽拭子标本,提取总RN,合成麻疹病毒核蛋白基因特异性扩增引物,应用RT-PCR及Real-time PCR进行扩增,回收阳性扩增产物,进行序列测定,将所测序列与国内外麻疹病毒株序列进行核苷酸同源性分析,应用MEGA5.0软件构建核蛋白基因种系进化树. 结果 疑似病例血清麻疹病毒IgM抗体为阳性;RT-PCR法扩增病毒核蛋白基因可见一约330bp大小的条带;与Genbank报道的国内Mvi Hunan strain 1、Mvi Hunan strain 2、Mvi Hunan strain 3的同源性高;种系进化分析表明Mvi Hunan Yueyang strain同所有H1型的麻疹病毒聚集在进化树的B组内,为麻疹病毒H型H1亚型. 结论 分离的病毒为麻疹病毒H1型,基因分型技术能进一步对病毒亚型进行鉴定.
