首页 > 文献资料
-
登革病毒悬液芯片分型检测方法的建立
目的 建立一种基于悬液芯片的登革病毒(dengue virus,DV)检测方法,可对四种血清型登革病毒进行快速检测和鉴定.方法 依据GenBank上4种病毒的基因序列信息,设计并合成相关引物及探针序列.抽提病毒RNA,经反转录后对目的基因进行PCR扩增,产物与核酸探针微球组杂交后于Bio-PlexTM 200系统检测荧光信号值.结果 DV1的悬液芯片检测敏感性约9 DNA拷贝,DV2、DV3、DV4的悬液芯片检测敏感性约90 DNA拷贝.进而将本方法用于检测15份临床标本,其检测结果与分型荧光RT-PCR一致.结论 建立了可同时检测四种血清型登革病毒的悬液芯片检测方法,为快速筛查和鉴定登革病毒提供了新的手段.
-
分型悬液芯片检测疟原虫的方法建立及应用
目的 建立一种基于悬液芯片技术的疟原虫检测和分型方法,对4种疟原虫进行快速检测和鉴定.方法 依据国家生物技术信息中心(NCBI)公开数据库上4种疟原虫的特异管家基因序列信息,设计并合成相关引物探针序列.抽提核酸DNA,经PCR扩增,产物与核酸探针微球组杂交后于BioPlex200检测荧光信号值. 结果 优化了PCR方法,间日疟原虫(Pv)、三日疟原虫(Pm)的悬液芯片检测敏感性约9DNA拷贝,恶性疟原虫(Pf)、卵形疟原虫(Po)的悬液芯片检测敏感性约90DNA拷贝.进而将本方法用于检测30份临床样本,其检测结果与分型特异荧光PCR方法完全一致,而且在混合感染样本的快速检测中具有显著的优势.结论 建立的可同时检测4种疟原虫的悬液芯片方法特异性高,省时,无交叉反应.为快速筛查和鉴定疟原虫提供了新的手段.
-
乙肝病毒基因分型悬液芯片检测方法建立及初步应用
目的 建立基于悬液芯片的乙肝病毒(HBV)基因型检测方法.方法 根据现有HBV 8个基因型的DNA序列信息,设计并合成相关引物及探针,首先进行PCR扩增,产物与核酸探针微球组杂交后检测荧光信号值.结果 建立的悬浮芯片方法检测HBV-A、HBV-E、HBV-G的敏感性为9DNA拷贝,HBV-B、HBV-C、HBV-D、HBV-F、HBV-H的敏感性为90DNA拷贝.检测结果与荧光PCR方法相比,差异无统计学意义.结论 建立了可同时检测8个HBV基因型的悬液芯片检测方法,为快速筛查和鉴定HBV提供了新的手段.
-
4种呼吸道病毒悬液芯片检测方法的建立
目的 建立一种基于悬液芯片的呼吸道病毒多重检测方法,对4种呼吸道病毒或亚型进行快速检测和鉴定,包括人类偏肺病毒,呼吸道合胞病毒,流感病毒A和流感病毒B. 方法 依据NCBI公开数据库上各病毒的基因序列信息,设计并合成相关引物探针序列.抽提病毒RNA,经反转录后对目的序列进行PCR扩增,产物与核酸探针微球组杂交后于BioPlex 200检测荧光信号值. 结果 优化了多重PCR方法,hMPV、RSV与IfB的悬液芯片检测灵敏度约3DNA拷贝,IfA的悬液芯片检测灵敏度约30 DNA拷贝.4种病毒或亚型同时检测的特异性高,省时,无交叉反应.17个经传统方法鉴定为呼吸道病毒的临床标本用悬液芯片检测16个阳性,检出率94.1％.标本经测序分析验证,结果与悬液芯片法一致. 结论 建立的同时检测4种呼吸道病毒或亚型的悬液芯片方法特异性高,为快速筛查和鉴定呼吸道病毒提供了新的手段.
-
高通量流式荧光微球悬液芯片检测乙肝病毒基因分型
目的:建立HBV基因分型高通量液相芯片检测技术,并探讨其应用价值.方法:对GenBank中收录的明确分型的HBV基因序列进行分析,选择preS2-S区设计引物和A、B、C和D型特异性探针.与荧光编码微球偶联的特异型探针与一条引物生物素标记的PCR产物直接杂交反应,然后结合亲和素标记的藻红蛋白,用流式检测仪(Bio-Plex 200)检测荧光信号.检测182份阳性乙肝患者血清DNA,其中35份样品检测结果与测序法比较.用B、C型质粒DNA倍比稀释及混合样品检测灵敏度来评估该方法.结果:建立了HBV基因分型的快速高通量液相芯片检测方法.182份患者血清检测结果为:B型占24.2％ (44/182),C型占71.4％(130/182),D型为6.6 ％(12/182),BC混合型4.4％(8/182).其中35份样本与测序法比较,除3份混合型测序法未检出外,其它32例结果均相同本方法的灵敏度检测下线为1×103 copies/mL.结论:应用悬液芯片技术进行乙肝病毒的基因分型分析,具有较好的特异性和较高的灵敏度,并有简便、灵活和高通量等优势.该检测系统不仅在科研中有广泛的前景,也有望成为临床推广的多重分子诊断和基因分型的新方法.
-
绝经后女性血浆骨代谢相关差异蛋白表达的研究
目的:观察绝经后骨质疏松症患者相关骨代谢差异蛋白表达情况,筛选出评价绝经后骨质疏松症严重程度的骨代谢指标.方法:采用悬液芯片技术分析不同骨量绝经后妇女促肾上腺皮质激素(ACTH)、糖蛋白Dickkop(DKK-1)、成纤维细胞生长因子23(FGF-23)、白介素1β(IL-1ββ)、IL-6、胰岛素(Insulin)、瘦素(Leptin)、骨保护素(OPG)、骨钙素(BGP)、骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)、甲状旁腺激素(PTH)、硬骨素(SOST)、肿瘤坏死因子a(TNF-a)蛋白的差别.结果:PMOP患者骨代谢标志物DKK-1、IL-6、BGP水平与骨密度呈负相关,OPG、Leptin、FGF-23、Insulin水平与骨密度呈正相关,且相关性有统计学意义(P＜0.05).结论:人血中BGP、DKK-1、OPG、OPN、IL-6、Leptin、FGF-23、Insulin可作为评价绝经后女性骨质疏松严重程度的检测指标.
-
生物芯片技术在中枢神经系统感染性疾病应用方面的研究进展
中枢神经系统感染在诊断和治疗上存在很多难点，而生物芯片技术可将大量的探针同时固定于支持物上，满足大量的生物分子进行检测分析的需要，现已广泛应用于医学、生命科学等领域。本文主要就生物芯片技术在中枢神经系统感染性疾病病原的检测和诊断、耐药性的分析和致病机制的研究进行综述。
