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我国首例输入性裂谷热病例病毒全基因组测序分析
目的 对我国首例输入性裂谷热病例病毒进行全基因组测定,分析其进化来源及潜在变异.方法 提取样本核酸,非特异性反转录扩增病毒基因组RNA,使用Ion Torrent二代测序仪进行病毒全基因组测定.对获得的基因组数据进行序列拼接、比对、进化树构建和关键位点分析.结果 通过测定获得了病毒全基因组11 979nt,该测定病毒属E基因分支,序列与先前南非分离株Kakamas相似度高(＞98％).病毒Gn蛋白C端信号肽区存在1个氨基酸突变.结论 本研究分析测定的裂谷热病毒全基因组与目前非洲流行株高度相似,病毒基因特征未出现明显变异.
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基孔肯亚热、克里米亚-刚果出血热、裂谷热病毒核酸液相芯片检测方法的建立
目的 建立基孔肯亚热、克里米亚-刚果出血热、裂谷热病毒核酸液相芯片检测方法.方法 建立探针偶联至荧光微球、多重PCR扩增方法、杂交检测方法,并对所建立的液相芯片检测方法的灵敏度和特异性进行评价.结果 建立的液相芯片检测方法能对基孔肯亚热、克里米亚-刚果出血热、裂谷热病毒中的任意1种、任意2种或者3种同时进行筛查检测,基孔肯亚热病毒检测的灵敏度为1×104 copies/PCR,克里米亚-刚果出血热病毒检测的灵敏度为1×105copies/PCR,裂谷热病毒检测的灵敏度为1×103 copies/PCR.该方法对汉坦病毒、埃博拉病毒、黄热病毒、西尼罗病毒、马尔堡病毒的检测结果均为阴性.结论该方法具有高通量、多重检测、快速、敏感、特异的特点,为基孔肯亚热、克里米亚-刚果出血热、裂谷热病毒的筛查检测提供一种新方法.
关键词： 基孔肯亚热病毒 克里米亚-刚果出血热病毒 裂谷热病毒 液相芯片 检测 -
我国首例输入性裂谷热病毒感染病例的实验室检测
目的 对从安哥拉归国的l例传染病疑似病例开展实验室检测,确定病原体.方法 采集血液、尿液和唾液样本,进行血常规和生化检测:从样本中提取核酸,同时使用实验室建立的荧光RT-PCR方法及两种商品化试剂盒,共检测14种传染病病原体核酸.结果 血液生化检测显示谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、尿素氮(UN)、肌酐(CRE)指标均异常升高;实验室建立的方法和两种商品化试剂盒在血清、尿液、唾液样本中均检测到裂谷热病毒核酸阳性.结论 根据实验室检测结果以及临床特征和流行病学特点,确定该归国疑似病例为我国首例输入性裂谷热病毒感染病例.
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甲型H1N1流行性感冒疫情暴发的思考
近年来,传染病的"新现"(emergency)与"再燃"(re-emergency)已经逐渐凸显为为重要的公共卫生问题之一.在亚洲,H5N1高致病性禽流感病毒间或性地感染人群、造成病例死亡,并出现人间传播病例,不仅重创了当地的禽类养殖业和旅游业,更引发社会普遍的恐慌;在东部非洲,由于雨季时间延长,使得裂谷热病毒疫情再次上升,更重要的是病毒通过当地的伊斯兰教朝觐者逐渐向中东地区传播,沙特阿拉伯和也门相继报告了确诊病例;在南美洲,黄热病病例的分布范围不断扩大,促使整个大洲不得不共同协调进行监测,同时实施大规模的疫苗接种项目以避免疾病的进一步扩散;在欧洲,蓝舌病病毒的新变种BTV-8使得原本仅存在于南欧的蓝舌病逐渐向北欧蔓延,不仅严重危害家畜养殖,同时也引发了这种改变是由于病毒本身的变异抑或是媒介昆虫改变所导致的新讨论.
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裂谷热流行病学研究进展
本文记述了裂谷热的病原体、流行病学、发病机制与病理改变、临床表现与分型、实验室检查、临床诊断和防治,为深入研究与临床诊治提供了参考依据.
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裂谷热病毒Gn蛋白主要抗原区的表达、纯化及抗原性分析
目的 通过原核表达系统制备裂谷热病毒Gn片段主要抗原区蛋白,获取纯化蛋白,并分析抗原性.方法 将合成的裂谷热Gn基因用PCR的方法扩增具有保护性抗原表位的两段Gn1和Gn2,并将其定向插入原核表达质粒pColdⅠ中,构建重组表达质粒pCold Ⅰ-Gn1和pCold Ⅰ-Gn2,并将重组质粒转化到BL21 (DE3)感受态中,以IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析表达蛋白和表达量,并利用His-tag Ni柱进行亲和层析纯化,Western-blot鉴定表达蛋白.结果 所构建的质粒pColdⅠ-Gn1和pCold Ⅰ-Gn2序列正确,SDS-PAGE检测到目的蛋白,Western-blot显示截断的Gn蛋白具有很好反应原性.结论 成功纯化了裂谷热病毒Gn主要抗原区的表达蛋白.
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裂谷热病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立
目的 根据裂谷热病毒(Rift Valley Fever Virus,RVFV)M片段的保守序列设计并合成特异性引物和TaqMan探针,建立鉴定裂谷热病毒的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法.方法 合成裂谷热病毒M片段基因,PCR扩增后将其连入pMD18-T载体,构建重组质粒作为阳性标准品,以10倍系列稀释的标准品进行荧光定量PCR扩增,并绘制标准曲线.结果 所绘制标准曲线的相关系数为0.999,该检测方法的灵敏度达40 copies/μL,特异性好,对除裂谷热病毒外其他病毒(PPRV、HFV、RV、SPPV和GIPV)检测均为阴性.该方法重复性好,批内重复和批间重复的变异系数均小于1%.结论 裂谷热病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立为裂谷热病毒的快速准确诊断及流行病学调查提供了有效的手段.
