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人细小病毒B19检测方法研究进展
人类微小病毒B19(HPV B19)是细小病毒属中唯一对人类有致病性的病原体.感染后可引起传染性红斑、关节病、再生障碍性贫血危象、胎儿水肿及流产,对某些免疫力低下的病人,B19病毒感染甚至是致命的.B19病毒一般通过呼吸道传播,也可经输血和血液制品传播.建立简单实用的检测方法对B19病毒相关疾病的诊断和治疗非常重要.本文拟对B19病毒检测方法作一综述.
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人微小DNA病毒B19与人类疾病
人微小DNA病毒B19是1974年偶然发现的一种不同于已知的动物微小DNA病毒的病毒.这种平均直径为23nm、单链线状DNA病毒感染人后常呈隐性感染,故在发现后数年内并未引起人们的注意.直至检测该病毒特异性诊断方法的建立和应用才逐渐明确了B19与人类疾病的关系,也才使我们对一些不明原因的疾病有了新的认识.目前已明确B19感染可以造成:一些慢性溶血性贫血尤其是镰形细胞贫血病人发生再障危象;传染性红斑及其并发病--多发性关节炎或关节病;妊娠妇女流产、死胎或胎儿畸形.呼吸道是B19常见的传播途径.此外,经血和胎盘也可造成B19感染.鉴于B19感染范围广泛,且各国报告的流行情况无明显差异,考虑在我国也有可能存在B19感染,故建议在我国开展该项调查.
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人博卡病毒基因克隆及衣壳编码基因序列变异分析
为了解人博卡病毒(Human Bocavirus,HBoV)VP1基因进化关系;阐明HBoV目前具体的变化规律,用PCR的方法扩增了1株HBoV的全基因和9株HBoV的VP1基因,克隆并测序,在此基础上,将HBoV的全基因序列和衣壳序列分别与细小病毒亚科其他14个有代表性的病毒进行遗传分析,构建进化树,对目前所有可得到的HBoV的17个衣壳蛋白进行二级结构分析和抗原性分析.结果显示:HBoV全基因序列与B19关系较远,但衣壳序列遗传关系较近.以有典型性的猫瘟细小病毒(Feline parvovirus,FPV)衣壳蛋白为参照,分析多个HBoV衣壳序列之间的变异情况,显示HBoV衣壳的二级结构基础表现出较高的保守性,序列之间的变化主要发生在高抗原区域和感染活性区域.衣壳病毒变异情况显示HBoV在稳定自身的情况下表现出一定的活跃性以逃避免疫反应,也表现出一定的感染适应力.
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安徽阜阳冬季手足口病患者合并病毒感染的调查研究
目的 研究安徽阜阳2013年冬季手足几病患儿合并其他病毒感染情况.方法 根据手足口病病例诊断标准诊断收集2013年11月-2013年12月安徽阜阳手足口病住院病例及资料,采集患儿血清.使用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测血清标本中的细小病毒B19、I型单纯疱疹病毒、巨细胞病毒、腺病毒、呼吸道合胞病毒和副流感病毒的IgM抗体.整理分析患儿合并病毒感染情况.结果 2013年11月-2013年12月45份手足口病患儿血清腺病毒IgM阳性30例(67.7％),呼吸道合胞病毒IgM阳性8例(17.8％),细小病毒B19 IgM阳性8例(17.8％),巨细胞病毒IgM阳性3例(6.7％),单纯疱疹病毒IgM阳性l例(2.2％),血清中未检测出现副流感病毒IgM抗体.同时发现多例合并两种以上病毒IgM阳性现象.结论 2013年阜阳地区冬季手足口病合并腺病毒、呼吸道合胞病毒和细小病毒B19等为主的感染.
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细小病毒B19感染致新生儿严重贫血
目的报告 1例人细小病毒 B19感染引起新生儿严重贫血并死亡的病例,以提高对细小病毒 B19感染的认识和重视.方法收集患儿病史、症状体征、初步实验室检查,结合尸体解剖病理检查结论,对疾病进行诊断和分析,并复习文献.结果患儿血红蛋白 1.9 g/L,抢救治疗 2 h.死亡后尸体解剖,见所有造血干细胞中幼红细胞核内含有中心透明、匀质苏木精和伊红双染色的包涵体,周围有一边缘稍不规则的环,符合细小病毒 B19感染的特征性表现.结论应提高对新生儿贫血病因的认识,重视妊娠期细小病毒 B19感染对胎儿的影响.
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小儿B19病毒感染相关性重症血液病51例
目的探讨 B19病毒感染相关性小儿重症血液病的临床特征与治疗.方法回顾性总结 51例小儿 B19病毒感染相关性重症血液病的临床资料,分析其治疗与预后.结果检测 B19抗原或抗体阳性加 B19 DNA阳性,确定为 B19病毒感染的重症血液病患儿 51例中,急性血小板减少性紫癜 32例,急性再生障碍性贫血 9例(包括纯红细胞再生障碍性贫血 3例),急性白血病合并重度贫血 6例,溶血性贫血并发急性再障危象 3例,噬血细胞综合征 1例;所有患儿均重度或极重度血细胞减少, 38例合并内脏出血, 12例合并细菌或真菌感染.经应用大剂量丙种球蛋白,同时加强对症治疗与支持疗法、防治严重并发症,结果好转和治愈 48例( 94.12%),死亡 3例( 5.88%).结论 B19病毒感染相关性小儿重症血液病应加强抗病毒及止血的治疗.
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郑州市B19病毒分离株全基因的克隆及序列测定
目的:克隆和测定在郑州市得到的B19病毒分离株全基因序列.方法:采用聚合酶链反应(PCR)技术从1例B19阳性的流产患者血清中分段扩增B19病毒全基因,获得7个互相重叠的片段,分别长814 bp(1～814),849 bp(753～1 601),663 bp(1 523～2 185),738 bp(2 124～2 861),1 011 bp(2 790～3 800),1 014 bp(3 747～4 760),914 bp(4 681～5 594).将其分别克隆入T载体,进行测序分析.结果:郑州市B19病毒分离株全基因长5 594个核苷酸,有3个开放读码框架(ORF).第1个ORF位于615～2 630位核苷酸,编码672个氨基酸,第2个ORF位于2 623～4 968位核苷酸,编码782个氨基酸,第3个ORF位于3 304～4 968位核苷酸,编码555个氨基酸.在该基因中4种碱基在基因组中所占比例为:A,29.58%(1 655/5 594),T,26.52%(1 484/5 594),G,22.88%(1 280/5 594),C,21.02%(1 175/5 594).郑州B19病毒分离株基因序列与GenBank中NC_000883高度同源;存在10个碱基改变,只有1个引起氨基酸改变(3 752位C→G导致Ser→Cys).结论:郑州B19病毒分离株和NC_000883属同一基因型.
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荧光定量PCR检测B19病毒方法的建立
目的:建立采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测人微小病毒B19的方法.方法:根据B19病毒VP2基因序列,设计并合成引物和荧光标记探针.将PCR扩增的B19病毒VP2区基因片段克隆入pGEM-T载体,重组质粒pGEM-T-VP2经筛选、鉴定后,作为阳性模板,用于标准曲线的制定和样品检测;对15例B19病毒感染血标本和几种其他病毒进行PCR测定.结果:应用重组质粒制作的定量曲线循环阈值与模板浓度具有良好的线性关系;与定量对照曲线比较计算,15例B19病毒感染标本中B19拷贝数为4.8×10 5μl-1～8.7×10 8μl-1;对其他几种病毒的扩增均无信号出现.结论:成功建立了检测B19的荧光定量PCR方法,较常规PCR技术更为简便、快速、准确,有很好的应用前景和研究价值.
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细小病毒B19诊断芯片探针的制备
目的制备细小病毒 B19诊断芯片探针.方法利用Primer Premier 5.0软件针对细小病毒B19基因保守区域设计PCR引物,纯化扩增产物,克隆鉴定.结果序列分析表明,扩增片段均为细小病毒B19特异基因.结论利用PCR扩增产物可制备细小病毒B19诊断芯片探针.
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广州地区献血人群人类细小病毒B19感染情况及病毒载量分析
出率为1.8%(1/56),两者有显著差异(P＜0.001).21例HPV B19 DNA阳性样本中,病毒载量≥1×104 Copies/ml占51.9%(13/21).结论 广州地区献血者HPV B19病毒既往感染率较高,但HPV B19病毒急慢性感染率较低.
