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从噬菌体 15肽库中筛选乙脑病毒糖蛋白模拟肽
目的用抗 JEV E蛋白的 mAb 2H4筛选噬菌体 15肽库，以研究 JEV E蛋白模拟肽。方法用生物素标记的 mAb 2H4，对噬菌体随机 15肽库进行 3轮筛选。经 ELISA鉴定后，随机挑取 10个阳性噬菌体克隆测序，并与 JEV E蛋白进行同源性比较。结果筛选到的噬菌体能与 mAb 2H4特异地结合，并且这种结合可被天然 JEV抗原所抑制。 10个阳性噬菌体克隆的氨基酸序列相同，均为 RQDPQWPYANSTIAR。同源分析表明，在 JEV E蛋白不同区域有两个同源性较高的序列： STXAR和 WXXAXST。阳性噬菌体展示肽也能与抗天然 JEV抗原的鼠血清产生特异性反应。结论筛选的该噬菌体克隆展示肽可模拟 JEV E 蛋白的部分抗原性。
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日本脑炎病毒基因疫苗的研究进展
日本脑炎(Japanese encephalitis, JE)是一种由蚊虫传播引起的人类和马中枢神经系统感染性疾病.人类每年的发病总例数约3.5万以上, 其中约有1万例患者死亡.日本脑炎病毒(JEV)为黄病毒科黄病毒属的成员之一.其他重要的人类病原性黄病毒包括: 黄热病、登革热1～4型、蜱传脑炎和圣路易脑炎病毒等.疫苗是预防黄病毒感染的有效手段.
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日本脑炎病毒E蛋白基因酵母双杂交表达载体的构建
日本脑炎病毒(JEV)为黄病毒属成员,基因组为单股正链RNA,长约11kb,编码3个结构蛋白和7个非结构蛋白[1].其中3个结构蛋白分别为衣壳蛋白C、膜蛋白M和囊膜蛋白E.E蛋白为该病毒外部的糖蛋白,由500个氨基酸组成,相对分子质量(Mr)约为53000,具有多种生物学功能,包括受体结合活性和膜融合作用等,与病毒的致病性及组织亲嗜性密切相关[2].
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日本脑炎病毒内影像组抗独特型单克隆抗体的制备及初步鉴定
目的制备具有内影像作用的分泌日本脑炎病毒(JEV)抗独特型单克隆抗体(AId mAb)杂交瘤细胞系。方法以传统免疫法和硝酸纤维素膜(NC膜)皮下包埋免疫法，用具有高中和活性的抗JEV mAb 2H4和2F2分别免疫Balb/c小鼠，按常规方法融合，经多种ELISA、表面等离子共振和动物免疫实验筛选并鉴定具有内影像作用的AId mAb。结果获得了3株可分泌AId mAb的杂交瘤细胞系。结论所获AId mAb均能模拟JEV抗原，为JEV受体的分离、纯化提供了条件。
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日本脑炎病毒血球凝集和凝集抑制试验的条件
1 材料和方法1.1 材料血凝板为20孔U型底塑料硬板. 0.12 mol*L-1 HCl浸泡过夜,自来水,单蒸馏水(DW)冲洗干净,晾干备用. 血凝素制备是用出生3～6 d昆明种乳鼠,脑内接种JEV SA14株0.02 mL,3 d后发病处死,取脑加入少许pH 9.0硼酸盐水(BBS:0.5 mol*L-1硼酸100 mL,1.5 mol*L-1 NaCl 80 mL, 1 mol*L-1 NaOH 24 mL,DW至1000 mL),研磨后配成100 g*L-1脑悬液,5000 r*min-1离心20 min,吸取上清分装小塑料管-20℃保存. 其中少量上清经紫外灯照射2 h灭活后-20℃保存. 抗JEV-mAb mC3株,常规制备腹水,辛酸-硫酸铵法纯化,用pH 9.0 BBS配成0.01 g*L-1,-20℃保存. 普通成年白家鹅(第四军医大学实验动物中心提供),2雄1雌,翅膀下静脉取血加1/4量38 g*L-1 枸橼酸钠液抗凝血,用2～3倍量生理盐水洗涤3次(2000 r*min-1, 离心5 min),临用时用pH 6.4 PBS配成5 mL*L-1血球悬液,另新采集鹅红血球分别用血球保养液(血保液:葡萄糖20.5 g,NaCl 14.2 g,枸橼酸钠8.0 g,DW至1000 mL,高压灭菌20 min,4℃保存)和生理盐水,pH 6.4 PBS置4℃保存24 h～1 wk,作血凝和血凝抑制试验进行血球保存条件比较.
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乙型脑炎疫苗研究进展
日本脑炎(Japanese encephalitis,JE)在我国又称为流行性乙型脑炎(简称乙脑),是由日本脑炎病毒(JEV)引起的急性中枢神经系统传染病,临床以高热、惊厥、意识障碍及脑膜刺激征为主,病死率可达10％,幸存者约15％有后遗症.2010年我国卫生部公布的甲乙类法定报告传染病发病数及死亡数排序中,乙脑分别位于第15位和第7位[1],严重威胁着人民生命健康.近年来日本脑炎的流行地域有不断扩大的趋势,如日本、韩国、印度、东南亚以及澳大利亚等,已成为热带、亚热带地区一个非常严重的公共卫生问题[2].
