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抗乙型肝炎病毒HDV核酶的研究新进展
乙型肝炎病毒(HBV)是严重威胁人类健康的一种病毒,特别是在我国约有1.2亿人为HBV携事业者,占世界的1/3.对已感染HBV者,常用的化学及免疫疗法通常无效.今年来,研究者试图利用反义技术,通过在基轩表达水平上抑制HBV的复制,来达到治疗HBV感染的目的.核酶是具有RNA裂解活性的RNA分子,能特异地结合并切割靶RNA分子.HDV核酶唯一在人体细胞天然具有裂解活性的核酶类型,研究将HDV核酶作为HBV的反义抑制剂可能有着其独特的优势.本文就HDV核酶靶位点的筛选、病毒载体导入系统、靶向性分子的构建等热点问题的研究新进展予以综述.
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针对端粒酶的HDV核酶的设计及其对端粒酶活性抑制研究
设计针对端粒酶的HDV核酶,观察其对端粒酶活性抑制.设计和合成了针对端粒酶组分的HDV核酶的序列,构建了该核酶的体外转录和真核表达质粒,检测了HDV核酶对端粒酶组分的体外切割效力和对端粒酶活性的抑制作用.核酶对底物的大剪切效率为70.4%.导入细胞后,使端粒酶活性下降90%.HDV核酶(g.RZ57)对端粒酶活性有抑制作用,可望成为有效的肿瘤治疗抑制剂.
关键词： HDV核酶 端粒酶 人端粒酶RNA(hTR) -
逆转录病毒靶向介导HDV核酶体外抑制HBV表达
目的 包装携带HDV核酶的肝细胞靶向性逆转录病毒载体,并检测体外HDV核酶对乙型肝炎病毒表达的影响.方法 采用脂质体法,分别包装出携带针对HBV不同基因组区域的HDV核酶的肝细胞靶向性重组逆转录病毒,感染HepG2215细胞,ELISA及荧光定量PCR检测HDV核酶对乙型肝炎病毒表达的抑制作用.结果 pMSCV-U6-PreS2-Rz和pM-SCV-U6-C-Rz对乙型肝炎病毒表面抗原抑制率明显高于其他HDV核酶和对照组,分别达80%和85%,且高于脂质体转染介导的同种核酶对乙型肝炎病毒表面抗原表达的抑制率.结论 靶向性重组逆转录病毒能够携带HDV核酶进入HepG2215细胞,并且对乙型肝炎病毒的表达有较高的抑制作用,为抗病毒治疗的研究奠定了基础.
关键词： 靶向性逆转录病毒载体 HDV核酶 乙型肝炎病毒 -
rAAV载体介导的HDV核酶对HBV基因表达的抑制作用
目的 探讨重组腺相关病毒介导的HDV核酶在细胞内抑制乙型肝炎病毒基因表达的作用.方法 将针对HBV基因序列C区的反式HDVRz与U6启动子和绿色荧光蛋白基因EGFP及其启动子CMV共同插入腺相关病毒载体pSNAV中并取代其原有CMV启动子区域,构建为pSNAV-CRz重组载体.并将pSNAV-CRz、pSNAV及pLEGFP质粒转染HepG2.2.15培养细胞,荧光显微镜下观察绿色荧光,对转染后培养细胞内蛋白进行HBeAg和HBsAg的ELISA分析.结果 所构建的重组载体经双酶切及PCR验证与实验设计一致.重组载体转染培养细胞后,荧光显微计数表明,pSNAV-CRz的转染效率为30%.HBeAg和HBsAg的ELISA检测显示,pSNAV-CRz重组载体对HepG2.2.15细胞中HBV病毒的HBeAg和HBsAg表达抑制率分别为63.5%和50.07%.结论 细胞水平试验证明,重组腺相天病毒载体介导的反式HDVRz在体外培养细胞水平对HBV的复制起到一定的抑制作用.
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HepG2.9706细胞内HDV核酶对HCV RNA抑制活性的初步研究
目的探讨HDV核酶在细胞内抑制HCV RNA的可能性.方法将重组载体转染至转基因细胞HepG2.9706中,通过荧光定量PCR检测细胞和培养上清中的HCV RNA,初步探讨HDV核酶对HCV RNA的抑制活性.结果①RzCl,RzC2,RzC3 3组HDV核酶定向插入到真核表达载体.②在转基因细胞HepG2.9706中,pCl-RzCl、pC1-RzC2、pCl-RzC3对HCV-5′NCR-C RNA抑制活性分别为69.2%,38.7%、4.2%.结论①成功构建了3个HDV核酶重组表达载体.②pC1-RzC1、RC1-RzC2在转基因细胞HepG2.9706具有抑制HCV-5′NCR-C RNA的活性.
