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应用基因重组细胞模型研究苯并[a]芘的细胞毒性和遗传损伤效应
目的 利用经基因重组构建的具有细胞色素P450 1A1(CYP1A1)代谢活性的人支气管上皮细胞(16HBE)为体外模型,研究苯并[a]芘[B(a)P]的细胞毒性和遗传效应改变.方法 应用实时定量PCR方法检测细胞的CYP1A1和微粒体环氧化物水解酶(mEH)的mRNA水平.细胞分0、1、5、10、20 μmol/L B(a)P处理组,应用胞质分裂阻滞微核细胞组学技术综合评价B(a)P的有害生物效应,其中核分裂指数、细胞凋亡率和细胞坏死率等指标评价B(a)P的细胞毒性,微核、核质桥和核芽的发生率检测B(a)P的遗传损伤效应.结果 CYP1A1和mEH在16HBE-CYP1A1细胞中有较高表达,mRNA相对含量分别是7.8×10~(-4)和0.030.B(a)P作用后,16HBE-CYP1A1细胞1、5、10、20μmol/L处理组核分裂指数分别为1.92±0.04,1.71±0.01,1.61±0.04,1.41±0.01,低于对照组(2.08±0.03);双核细胞率分别为(76.33±3.51)%、(66.33±0.58)%、(51.67±1.53)%、(39.00±1.00)%,低于对照组的(82.67±6.66)%;细胞坏死率分别为(1.93±0.42)%、(2.20±0.53)%、(8.07±0.90)%、(15.27±2.80)%,高于对照组的(0.47±0.11)%,差异均有统计学意义(F值分别为899.94、303.33、240.87,P值均<0.01).而凋亡细胞随着B(a)P作用剂量的增加出现先增高后降低的趋势,分别为(1.20±0.53)%、(2.00±0.20)%、(1.47±0.12)%、(1.20±0.00)%、(1.20±0.00)%.遗传损伤效应分析中发现,随B(a)P作用浓度的增加,核质桥发生率随之增加,分别为(4.67±2.89)‰、(7.33±1.53)‰、(10.67±2.08)‰、(11.00±1.00)‰;核芽发生率也随之增加,分别为(2.33±0.58)‰、(4.00±1.00)‰、(5.00±1.00)‰、(7.67±1.16)‰,均有剂量-效应关系(F值分别为50.23、121.09,P值均<0.01).在B(a)P低于10 μmol/L组中,微核率也随B(a)P作用浓度的增加而升高,分别为(8.33±3.21)‰、(14.67±1.15)‰,但在20 μmol/L组,微核率为(16.67±2.88)‰,低于10 μmol/L处理组[(17.67±2.08)‰].在空载质粒细胞16HBEV中,细胞毒性出现较晚,在5、10、20 μmol/L组中,微核、核质桥和核芽的发生率[分别为(6.37±2.08)‰、(9.33±1.52)‰、(9.33±3.21)‰;(4.33±1.53)‰、(6.00±2.65)‰、(5.33±1.53)‰;(2.33±0.58)‰、(3.33±1.16)‰、(3.67±1.16)‰]没有明显的组间改变.结论 B(a)P代谢活化后可导致遗传损伤效应增加,这可能与细胞的核分裂指数降低、细胞坏死率增加或细胞凋亡受抑制有关.
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180例男性不育患者Y染色体微缺失的检测分析
目的 探讨深圳地区男性不育患者Y染色体微缺失的特点,为临床进行男性不育的诊断及治疗提供理论依据.方法 选取2015年1月-2016年1月来我院就诊的180例无精或者严重少精的患者,采用两管多重PCR扩增,4个通道(FAM/VIC/ROX/Cy5)荧光定量检测的方法,判断AZFa、AZFb、AZFc 3个区域,6个序列标签位点的微缺失.结果180例无精或者严重少精的患者中,18例为AZFc缺失,检出率为10.0%,2例为AZFb+c缺失,检出率为1.1%,两组检出率差异有统计学意义(P<0.05).结论 在深圳地区AZFc缺失发生率高.
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持续气道正压通气缓解阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征合并慢性阻塞性肺疾病患者的DNA损伤研究
目的：探讨经鼻持续气道正压通气（nCPAP）治疗前后阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征（OSAHS）合并慢性阻塞性肺病（COPD）患者外周血淋巴细胞微核率的变化和意义。方法选择2012年10月至2013年10月在江苏大学附属宜兴医院老年医学科就诊的住院患者，经多导睡眠仪器睡眠监测（PSG）确诊的34例患者（包括OSAHS 12例，COPD 8例，OSAHS合并COPD 14例）和21例对照组（体检的健康志愿者），使用Epworth嗜睡量表（ESS）评估白天嗜睡状况和睡眠呼吸暂停的严重程度，使用肺功能测定结果评估COPD患者的严重程度，用胞质阻滞法（CBMN）检测外周血淋巴细胞DNA损伤情况。结果 CPAP治疗后，OSAHS组（AHI：26.4±16.5 vs.23.2±14.8；ESS：11.6±4.4 vs.8.4±2.5；LSpO2：75.2±10.4 vs.83.2±3.7；MSpO2：87.2±3.5 vs.92.2±1.8）和OSAHS合并COPD组（AHI：67.6±22.0 vs.42.6±14.1；ESS：15.6±3.7 vs.10.8±3.2；LSpO2：57.0±6.3 vs.74.0±6.1；MSpO2：82.7±9.3 vs.89.4±3.8）的睡眠呼吸暂停情况有所好转，OSAHS合并COPD组肺功能有所增强（FEV1/pred：60.5±10.7 vs.72.3±7.3；FEV1/FVC：55.4±6.6 vs.63.9±6.4），而OSAHS组[微核率：37.2（17.1～47.3）vs.17.6（12.1～20.2）；染色体桥率：4.3（1.0～14.2）vs.2.7（0～8.8）；核芽率：4.5（1.2～12.0）vs.3.3（0～6.8）]和OSAHS合并COPD组[微核率：40.0（31.2～71.2）vs.19.3（10.7～30.4）；染色体桥率：9.1（1.8～20.0）vs.4.9（0～9.9）；核芽率：10.0（3.2～21.7）vs.5.9（0～11.0）]微核率、染色体桥率、核芽率都有明显降低（P＜0.05）。结论 CPAP能有效增强OSAHS合并COPD患者的肺功能，并能有效降低患者的DNA损伤。
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口腔黏膜微核细胞数与上皮异常增生病损癌变的关系
目的:探讨微核细胞计数与上皮异常增生病损(oral epithelial dysplasia,OED)癌变的关系.方法:收集30例健康对照者口腔黏膜、46例口腔扁平苔藓(oral lichen planus,OLP)病损、78例口腔黏膜白斑(oral leukoplakia,OLK)伴上皮单纯增生病损、30例OLK伴轻度OED病损、29例OLK伴中度OED病损、15例OLK伴重度OED病损和22例口腔鳞状细胞癌(oralsquamouscellcarcinoma,OSCC)病损的口腔脱落细胞进行Feulgen及fastgreen染色,计数微核细胞数.结果:微核细胞率依OSCC、OLK伴重度OED、OLK伴中度OED、OLK伴轻度OED、OLK上皮单纯增生、OLP、健康对照者口腔黏膜的顺序逐渐降低(P＜0.001).结论:口腔黏膜微核细胞计数可反映口腔上皮癌变的进程,可作为患者定期随访的监测指标.
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哮喘患者外周血淋巴细胞DNA的损伤及意义
目的 探讨哮喘患者外周血淋巴细胞DNA的损伤及意义.方法 选取32例哮喘患者和30例健康时照者,其中哮喘急性发作期15例,缓解期17例,采用胞质分裂阻断微核(CBMN)法观察外周血淋巴细胞的DNA损伤.结果 哮喘患者组的微核率、核芽率、染色体桥率分别为(26.34±6.79)‰、(2.99±1.66)‰、(7.68±5.26)‰;健康对照组的微核率、核芽率、染色体桥率分别为(13.16±3.81)‰、(1.72±0.64)‰,(4.59±2.22)‰;微核率、核芽率、染色体桥率两组比较差异有统计学意义(P<0.01或<0.05).哮喘急性发作期和缓解期患者微核率比较差异无统计学意义(P>0.05).哮喘患者微核率与病程有相关性(rs=0.424,P<0.05).结论 哮喘患者外周血淋巴细胞存在DNA的损伤,可能与哮喘的气道慢性炎症及氧化应激相关.
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阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征患者外周血淋巴细胞的DNA损伤及意义
目的 探讨阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(obstructive sleep apnea hypopnea syndrome,OSAHS)患者外周血淋巴细胞DNA损伤及意义.方法 选择在兰州大学第一附属医院就诊,经睡眠监测(PSG)确诊的30例男性OSAHS患者和22例男性健康志愿者,并用Epworth嗜睡量表(ESS)进行评估.用胞质阻滞法(cytokinesis blocked micronucleus,CBMN)检测外周血淋巴细胞DNA损伤情况.结果 OSAHS组外周血微核发生频率(以下简称微核率)显著高于时照组,(38.60±11.85)‰vs(12.40±5.47)‰(P<0.01),且0SAHS组的微核率在轻、中、重各组间差异有统计学意义,(28.46±8.42)‰vs(38.01±10.46)‰vs(42.43±11.72)‰(P<0.05).OSAHS组的微核率与睡眠呼吸低能气指数、夜间低血氧饱和度、夜间平均血氧饱和度均有相关性(rs=0.517,P<0.01;rs=-0.549,P<0.01;rs=-0.370,P<0.05).而OSAHS组染色体桥的发生频率也高于对照组,(7.65±6.30)‰vs(3.93±2.23)‰(P<0.05).结论 OSAHS患者外周血淋巴细胞存在较高的DNA损伤现象,这种损伤可能与间断性缺氧引起的氧化应激相关,并且可能进一步参与了心脑血管等靶器官损害的发病机制.
