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乙基亚硝基脲对人白血病细胞HPRT基因的影响
目的探讨乙基亚硝基脲(ENU)诱导人次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶(HPRT)基因突变的分子图谱和发生机制.方法采用单细胞克隆培养、双向筛选计数、多重聚合酶链反应扩增和电泳分析等方法.结果随着ENU剂量的增加,细胞接种存活率非常显著下降(100～200 μg/ml剂量组)、突变频率显著升高(12.5～200.0 μg/ml剂量组).自发突变没有全部基因外显子缺失型,只有7.7%检测出单个外显子缺失;而ENU诱发突变中却有79.7%显示缺失改变,其中缺失突变可以发生于HPRT基因的每个外显子,且诱发突变中大多数是多个外显子连锁缺失(88.1%).结论 ENU诱发HPRT基因突变图谱与自发突变完全不同,易诱发较大遗传结构改变,提示其具有较强的致突变作用.
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乙基亚硝基脲致大鼠脑星形胶质细胞DNA损伤及对P53和P21蛋白表达的影响
目的研究乙基亚硝基脲(N-ethyl-N-nitrosourea,ENU)诱发原代大鼠脑星形神经胶质细胞DNA损伤及对P53、P21蛋白表达的影响.方法采用机械分离技术,在体外培养大鼠脑神经胶质细胞,通过传代培养的方法纯化大鼠脑星形胶质细胞.给予不同浓度ENU(1.7、3.4、6.8、13.6、27.2 mmol/L)染毒,采用单细胞凝胶电泳(single-cell gel electrophoresis,SCGE)和免疫组织化学的方法观察ENU对星形胶质细胞DNA的损伤作用和抑癌基因p53、p21的产物P53、P21蛋白在细胞中表达.结果不同染毒浓度下,各染毒组对星形胶质细胞均有不同程度DNA损伤作用,各染毒组拖尾细胞百分率与阴性对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.01),且随受试物浓度增加而增加,表现出明显的剂量-效应关系(r=0.916).各染毒组细胞DNA的迁移距离(尾长)与阴性对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).在13.6、27.2 mmol/L ENU染毒组,P53有阳性表达,与阴性对照组比较,有统计学意义(P＜0.01),而P21在各实验组均未见阳性表达.结论ENU对大鼠脑星型胶质细胞的毒性主要表现在诱导细胞遗传物质DNA损伤以及抑癌基因p53的表达水平升高.
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乙基亚硝基脲诱导小鼠淋巴瘤细胞tk基因杂合性缺失
目的 探讨tk基因分子突变的类型,对不同剂量乙基亚硝基脲(ENU)诱导小鼠淋巴瘤L5178Y3.2.7c-tk+/-细胞tk基因突变的杂合性缺失(LOH)进行分析,为环境致突变荆检测和突变机制研究提供依据.方法 使用乙基亚硝基脲10μg/mL和100μg/mL剂量对L5178Y细胞进行梯度染毒,分别测定细胞毒性、细胞接种效率、相对存活率、相对悬浮生长率和突变频率等.挑选经ENU诱导的tk基因突变子(tk-/-)和自发突变体,提取基因组DNA,应用等位基因特异性PCR扩增、杂合性缺失分析等技术,分析其杂合性缺失的发生.结果 低剂量和高剂量诱导突变体的tk基因LOH发生率分别为73.5%和69.1%.LOH分析结果 显示,诱导突变体的LOH在大集落与小集落之间差异具有显著性(P＜0.05).结论 功能性等位基因缺失是ENU诱导tk基因分子突变的重要形式之一,不同剂量可能具有不同的突变机制.
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乙基亚硝基脲诱导转基因小鼠基因突变的研究
[目的]用乙基亚硝基脲(ENU)进一步验证携带xylE基因的转基因小鼠在体内基因突变研究中的应用价值。[方法]用ENU对转基因小鼠进行诱变处理(i.p.50 mg/(kg*d)，连续5d)后，从脾脏组织DNA中回收带有靶基因xylE的pESnx质粒，通过电穿孔法转化大肠杆菌，筛选突变体，检测突变率，并对突变靶基因进行测序分析以确定突变类型。[结果] (1)ENU诱发转基因小鼠脾脏组织xylE基因的突变率为1.248×10-4，显著高于自发突变率；(2)ENU诱发基因突变的类型包括碱基的颠换、转换以及由于碱基的缺失或插入所引起的移码突变。[结论]该转基因小鼠是检测体内基因突变的一种有效的动物模型。
