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大鼠少突胶质前体细胞在化学条件培养基中定向分化的形态学观察
目的:观察体外无血清化学培养条件下少突胶质前体细胞向成熟少突胶质细胞的定向分化.方法:实验于2000-04/07在复旦大学上海医学院解剖学教研室完成.①取新生SD大鼠获取少突胶质前体细胞;前O2A祖细胞原代混合培养7 d后,以B104神经胶质瘤细胞株条件培养液[每100mL含:牛血清白蛋白20 mg,胰岛素2.5 mg,转铁蛋白20 mg,腐胺1.6 mg,亚硒酸钠0.5 μg,黄体酮0.6μg,生物素0.24 μg,T3 3 μg,T4 0.04 mg,溶于DMEM/F12对半配置的培养液中]增殖并纯化的少突胶质前体细胞,然后将培养基更换为无血清的化学条件培养基.倒置相差显微镜观察记录24,48和72 h细胞的形态变化,分化成熟的少突胶质细胞作扫描电镜观察.结果:少突胶质前体细胞无血清化学条件培养基培养形态学演变:培养24 h,少突胶质前体细胞突起增加为三极或四极,胞体增大稍迟;48 h后突起明显增多,相互之间连接成网;72 h,胞体大且边缘不规则,突起分支更加清晰,分支彼此呈三维立体交错,部分突起之间可见指环状或膜片状结构.结论:化学条件培养基可使在体外培养条件下的少突胶质前体细胞定向分化为成熟的少突胶质细胞,细胞形态呈现渐变的过程.
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新生鼠缺氧缺血性脑损伤后脑组织结构和功能的改变及AMPA受体拮抗剂的干预效应
目的:谷氨酸浓度过度升高和谷氨酸受体过度活化引起的兴奋毒性是缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)发生发展的重要环节,α-氨基-3-羟基-5-甲基异恶唑-4-丙酸(alpha-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazolepropionic acid,AMPA)型谷氨酸受体起重要作用.研究选择性AMPA受体拮抗剂GYKI-52466对新生鼠HIBD的保护作用及机制.方法:实验于2003-04/2004-03在解放军第三军医大学新桥医院中心实验室完成.7日龄Wistar大鼠27只,随机分为4组:正常对照组;假手术组;缺氧缺血组;GYKI-52466干预组.正常对照组用于观察脑组织髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)在正常新生鼠的表达情况;干预组在缺氧缺血后即刻开始予GYKI-52466 10 mg/kg腹腔注射,1次/h,共4次;假手术组予等量生理盐水腹腔注射.缺血缺氧后1周取脑,免疫组化、图像分析法测双侧脑半球横截面积之比,检测脑组织MBP、NF表达及积分吸光度值.结果:缺血缺氧后患侧脑组织横截面积下降.缺血缺氧后1周,缺氧缺血组患侧与对侧脑半球横截面积之比(L:R AREA)为(0.680±0.043),较假手术组(0.985±0.023)明显降低(P＜0.001);GYKI-52466干预组L:R AREA值为(0.804±0.031),明显高于缺氧缺血组(P＜0.001).MBP第8天无显著表达.生后第11天嗅束、纹状体、胼胝体、内囊、外囊染色阳性,可见少许突起延伸至皮层.生后第14天上诉部位表达更加丰富,前联合出现染色阳性.缺血缺氧后1周,缺氧缺血组患侧与对侧脑组织MBP积分光密度之比(左侧:右侧,L:R MBP)为0.328,明显低于假手术组的0.986(P＜0.02),干预组L:R MBP值为0.544,高于缺氧缺血组(P＜0.05).结论:AMPA受体拮抗剂GYKI-52466可以减轻脑萎缩和MBP表达下降程度,对新生鼠缺氧缺血性脑损伤具有保护作用.
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甲状腺激素对少突胶质分化、成熟及功能的影响
甲状腺激素(TH)在少突胶质的形成、分化、成熟及功能表达过程中占重要地位.少突胶质前体细胞的增殖有赖于TH的作用,TH同时作为计时部件及效应部件,通过调节少突胶质前体细胞内的氧化还原状态,调控着少突胶质前体细胞向少突胶质转化.随后,TH直接作用于少突胶质的分化,不仅调控少突胶质的数量,而且调控其形态及功能的成熟,通过影响髓鞘形成蛋白,如髓磷脂碱性蛋白、蛋白脂质蛋白、2',3'-环核苷酸-3'-磷酸二酯酶和髓磷脂相关的糖蛋白的表达,从而影响少突胶质产生髓鞘能力,调节少突胶质的中枢髓鞘形成过程,对中枢神经系统的发育起着重要作用.
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少突胶质前体细胞移植治疗脊髓损伤
脊髓损伤(spinal cord injuries,SCI)是常见的中枢神经系统损伤,可以造成感觉、运动等神经功能严重丧失.迄今为止,临床上尚无有效方法治疗脊髓损伤.
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少突胶质前体细胞体外增殖与分化的实验研究
目的 探讨体外条件下少突胶质前体细胞的增殖与分化特性.方法 新生Sprague-Dawley(SD)大鼠取大脑皮层细胞行原代培养,第9～10天时分离少突胶质前体细胞,继续在化学条件培养基内生长.通过光、电镜及免疫化学技术研究少突胶质前体细胞的生长、分化情况,采用MTT法检测少突胶质前体细胞的增殖能力.结果 原代培养第9～10天时混合胶质细胞出现明显的细胞分层,少突胶质前体细胞散布于星形胶质细胞表面.分离的少突胶质前体细胞呈Oligo2、PDGFR-α阳性,能进一步分化为成熟少突胶质细胞且表达MBP.MTT法检测显示少突胶质前体细胞在体外保持良好的增殖能力.结论 少突胶质前体细胞在体外条件下继续保持定向分化及增殖生长的能力.
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早产儿脑室周围白质损伤的病理及发病机制研究进展
早产儿脑室周围白质损伤(PWMI)是早产儿脑损伤的主要形式之一,病理改变包括脑室周围白质软化和弥散性髓鞘形成障碍.PWMI的发病机制主要与早产儿脑血管发育未成熟、发育阶段特异相关的少突胶质细胞前体对缺氧缺血、自由基攻击、炎性细胞因子及谷氨酸增加等高度敏感有关.本文概述PWMI近年来病理及发病机制研究的一些新进展,为临床预防和治疗PWMI提供参考依据.
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早产儿脑室周围白质软化的发病机制
脑室周围白质软化(PVL)为早产儿所特有的缺氧缺血性脑损伤.PVL发病机制主要与早产儿血管发育缺陷、发育阶段特异相关的少突胶质细胞前体对多种损伤因素高度敏感及早产儿体内缺乏保护机制有关,PVL早期多无明显临床表现,诊断依赖影像学诊断.头颅B超、MRI弥散成像、脑电图、近红外光谱测定有助于诊治.目前尚无有效治疗方法.
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少突胶质细胞对中枢神经系统再生抑制作用的研究进展
胶质细胞在中枢神经损伤与修复中如同一把双刃剑:一方面促进轴突再生,产生一些神经营养因子支持轴突生长;另一方面又抑制轴突生长,局部胶质细胞形成坚硬的胶质瘢痕并分泌一些抑制性因子,阻碍轴突的生长、穿过等;然而少突胶质细胞的细胞膜及成熟中枢神经系统中广泛存在的髓鞘又是影响中枢神经系统再生的重要因素之一.了解少突胶质细胞表达的抑制性蛋白抑制作用的机制对神经再生新途径的开辟具有重要意义.
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慢性缺血性脑白质脱髓鞘比格犬模型中Tau蛋白表达及可能原因
目的 探讨慢性缺血性脑白质脱髓鞘比格犬模型中Tau蛋白表达水平变化及可能原因.方法 将16只成年比格犬按照完全随机数字表法分为A组(假手术组)及B、C、D组(观察组),每组各4只,应用四血管结扎法制作不同程度脑缺血动物模型.选取双侧侧脑室边缘部位脑白质,用神经胶质抗原2(NG2)标记少突胶质前体细胞(OPCs)、2,3-环核苷3-磷酸二酯酶(CNPase)标记成熟少突胶质细胞(OLs),采用免疫组织化学法检测Tau、NG2、CNPase,以平均光密度值量化表达水平.采用Pearson直线相关分析法分析Tau、NG2、CNPase之间的相关性.结果 苏木精-伊红(HE)染色可见慢性脑缺血后脑白质明显脱髓鞘改变,A、B、C、D组LFB染色后评分分别为(0.75±0.71)、(1.38±0.06)、(1.63±0.52)、(1.88士0.64)分,与A组比较,B、C、D组评分更高(P＜0.05).与A组比较,B、C、D组Tau蛋白及NG2表达水平明显增高(P＜0.05);CNPase表达水平明显降低(P＜0.05).Pearson线性相关分析显示Tau与NG2的表达水平呈正相关(r=0.277,P=0.006);Tau、NG2与CNPase的表达水平呈负相关(r=-0.303、-0.402,P=0.003、0.001).结论 Tau蛋白在慢性缺血性脑白质脱髓鞘比格犬模型中的表达增加可能与OPCs分化成熟障碍相关.
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血清髓鞘少突胶质细胞糖蛋白抗体阳性中枢神经系统病变一例
患儿男,10岁.因双眼视力下降29 d于2016年12月30日就诊于解放军总医院眼科.患儿于29 d前晨起后发现双眼视物模糊;无发热、抽搐、昏迷、呕吐、精神障碍等.3d后当地医院检查,双眼视力数指/目艮前;视盘水肿(图1A).追问病史:发病前36d有“流感”疫苗接种史,10 d前有感冒样病史.既往无眼病、全身病及家族疾病史.全身检查:脑膜刺激征、病理征均未见异常.眼部检查:双眼矫正视力,右眼-1.5 DS/-0.5 DC×105=0.15,左眼-1.5DS/-0.5DC×20=0.02.
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脊髓压迫性损伤后脱髓鞘病变及caspase-12表达变化
目的 研究脊髓压迫性损伤(compressed spinal cord injury,CSCI)后脱髓鞘病变与半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-12(caspase-12)表达变化之间的关系,探讨CSCI后脱髓鞘病变机制.方法 成年SD大鼠75只,按随机数字表法分为5组:正常组、对照组、压迫1d组、3d组、7d组,每组15只.采用自行设计制作的脊髓压迫模型,通过电镜和TUNEL染色、免疫荧光双标分别检测各组CSCI后神经纤维脱髓鞘的超微结构以及少突胶质细胞凋亡情况;运用免疫印迹技术检测与细胞凋亡有关的caspase-12表达.结果 CSCI后神经纤维出现脱髓鞘病变,并随着压迫时间延长而逐渐加重;脊髓损伤后出现少突胶质细胞凋亡,压迫7d组与正常组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).caspase-12表达也随压迫时间延长而上调.结论 caspase-12介导了少突胶质细胞凋亡,是CSCI后神经纤维脱髓鞘病变的机制之一.
关键词： 脊髓损伤 脱髓鞘疾病 少突神经胶质 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12 细胞凋亡 -
载脂蛋白E基因多态性在星形胶质细胞缺氧性损伤后早期凋亡中的作用
目的 探讨载脂蛋白E(apolipoprotein E,APOE)基因多态性在星形胶质细胞缺氧性损伤后早期凋亡中的作用.方法 原代培养APOE基因野生鼠、APOE转基因鼠(ε3、ε4)的星形胶质细胞,并纯化鉴定;利用缺氧法构建星形胶质细胞缺氧损伤模型,透射电镜观察细胞及线粒体形态变化,流式细胞仪检测细胞早期凋亡率及线粒体膜电位变化情况.结果 缺氧6h后,通过电镜观察到各组细胞足突肿胀,线粒体形态不规则、空泡化、嵴不规则,各组细胞之间形态变化无明显差异;APOEε4组细胞早期凋亡率、线粒体膜电位下降程度明显高于APOEε3组、APOE野生组(P＜0.05).结论 缺氧损伤后早期,与APOEε3组、APOE野生组比较,APOEε4组星形胶质细胞线粒体膜电位下降程度更大,这可能是导致更多的星形胶质细胞凋亡的原因之一.
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少突胶质前体细胞的培养及细胞缺氧缺糖模型的建立
目的 获取高纯度的大鼠少突胶质前体细胞系并建立细胞缺氧缺糖模型.方法 采用振荡分离纯化法和化学限定无血清培养基在体外获取纯化的大鼠少突胶质前体细胞,免疫荧光法对各分化阶段特异的表面抗原A2B5、O4、O1进行细胞鉴定.利用无糖培养基和连二亚硫酸钠造成O4阳性的少突胶质前体细胞的缺氧缺糖损伤,观察细胞的形态学改变,MTT法测细胞存活率.结果 获得纯度95%以上的大鼠少突胶质前体细胞,O4阳性少突胶质前体细胞出现缺氧缺糖损伤的形态学改变,并随缺氧缺糖时间延长而加剧;细胞存活率随缺氧缺糖时间的延长逐渐下降,30、60 min和90 min细胞存活率均低于正常对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 振荡分离纯化法是体外培养大鼠少突胶质前体细胞的可靠方法,利用无糖培养基和连二亚硫酸钠可以建立细胞缺氧缺糖模型.
