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E血清型沙眼衣原体主要外膜蛋白B细胞表位的预测
基于E血清型沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,CT)主要外膜蛋白(Major outer membrane protein, MOMP)氨基酸序列,采用Hopp-Woods的亲水性方案、Emini表面可及性方案、Jameson-Wolf 抗原指数方案和Janin可及性方案等,辅以对MOMP蛋白的二级结构中的柔性区域及跨膜区域的分析,预测CT MOMP蛋白的B细胞表位.推测有可能的B细胞表位位于MOMP蛋白N端第73～81区段、217～225区段、第377～386区段、第261～270区段和第161～175区段内或它们的附近.用多参数预测CT MOMP蛋白的B细胞表位,为进一步研究蛋白特性及表位疫苗研制奠定了基础.
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基于Omp1基因的泌尿生殖道感染沙眼衣原体多样性及分布特征分析
目的 基于主要外膜蛋白基因(Omp1)研究泌尿生殖道感染患者沙眼衣原体多态性及分布特征,为该疾病的诊治及疫苗研究奠定基础.方法 对泌尿生殖道感染临床标本常规处理后,使用沙眼衣原体核酸检测试剂盒筛选阳性标本,然后以巢式PCR扩增Omp1基因,选择4个限制性内切酶进行RFLP分析确定其基因型,选择代表菌株测定Omp1的DNA序列并与参比菌株比较确定其血清型,后将基因型及血清型与患者的性别、科室及年龄进行对比分析,研究其分布特征.结果 2013-2014年2年间共筛选得到178份阳性标本,61份标本扩增获得Omp1基因,Omp1-PFLP分析将61份标本分为6个基因型,占比分别为24.59％,24.59％,4.92％,9.84％,3.28％和32.79％,血清型分析表明61份标本属于F,H,J,G,Da,D和E7种血清型,E型及F型占比多.结论 本地区引起泌尿生殖道感染的沙眼衣原体主要属于F,H,J,G,Da,D和E7种血清型,E型及F型占比多,基因型及血清型与患者性别具有相关性,与科室、年龄无相关性.
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沙眼衣原体D型MOMP基因的克隆和序列分析
目的从D型沙眼衣原体培养物中克隆主要外膜蛋白(MOMP)基因.方法利用细胞培养法扩增沙眼衣原体后,提取基因组为模板,经聚合酶链反应(PCR)扩增全长MOMP基因,并用酶切、PCR扩增及序列测定等方法对重组质粒进行鉴定.结果成功扩增了MOMP基因,并插入克隆载体pUCmT中.结论 MOMP基因的克隆为进一步开展沙眼衣原体的疫苗研究奠定了基础.
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鹦鹉热衣原体主要外膜蛋白基因序列的扩增、克隆和原核表达
主要外膜蛋白在鹦鹉热衣原体感染过程中起主要作用.扩增了主要外膜蛋白基因,克隆入pGEM-T和pET32a(+),经PCR筛选和酶切鉴定,进行诱导表达和重组蛋白的纯化与复性研究,为进一步进行鹦鹉热衣原体的诊断试剂和疫苗研究创造了条件.
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肺炎嗜衣原体主要外膜蛋白的克隆表达与抗原性研究
肺炎嗜衣原体主要外膜蛋白是其特征抗原之一.实验中通过PCR方法从肺炎嗜衣原体基因组中扩增主要外膜蛋白基因,插入pET32a(+)表达载体,转化BL21(DE3)感受态细胞,得到表达56kD融合蛋白的工程菌株.该菌株的表达量可达53%,提纯后的主要外膜蛋白纯度可达90%以上,在Western Blotting试验和胶体金免疫层析试验中显示了良好的抗原性.
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沙眼衣原体L2型主要外膜蛋白的原核表达及其抗原性分析
克隆表达沙眼衣原体(Ct)L2血清型的主要外膜蛋白(MOMP)基因,并鉴定重组MOMP(rMOMP)的抗原性,为进一步研究Ct感染的诊断和预防技术奠定基础.应用PCR技术对Ct L2型标准株的MOMP基因进行特异性扩增,将扩增产物克隆入表达载体pET-32a(+),成功构建了rMOMP-pET-32a(+)表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)后摇菌进行rMOMP的诱导表达、鉴定和纯化,免疫印迹和ELISA法分析显示rMOMP可与兔源抗Ct L2多克隆抗体发生特异性反应,表明rMOMP具有良好的抗原性.
