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结直肠癌患者化疗前后外周血T/B/NK淋巴细胞亚群水平研究
目的 探讨术前结直肠癌患者与健康对照组外周血T/B/NK淋巴细胞亚群绝对数的差别,及术后奥沙利铂、卡培他滨化疗对结直肠癌患者外周血T/B/NK淋巴细胞亚群的影响.方法 应用流式细胞仪体积法,对2017年5月至2018年1月就诊于唐山市人民医院的86例结直肠癌住院患者,在其化疗前后分别进行外周血T/B/NK淋巴细胞亚群检测,同期对健康对照组外周血T/B/NK淋巴细胞亚群进行检测,应用SPSS 24.0统计学软件对所收集数据进行统计学分析.结果(1)术前结直肠癌患者与健康对照组外周血CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3-CD19+、CD16+CD56+细胞绝对数比较,差异具有统计学意义(P<0.001);结直肠癌患者CD3+CD4+/CD3+CD8+、CD3-CD19+和CD16+CD56+水平与患病年龄、性别、肿瘤定位无关;与TNM分期相关.(2)经奥沙利铂、卡培他滨治疗后结直肠癌患者外周血CD3+、CD3+CD4+、CD3-CD19+、CD16+CD56+细胞绝对数较化疗前明显降低,差异具有统计学意义(P<0.001);而CD3+CD8+细胞绝对数较化疗前明显升高,差异具有统计学意义(t=4.167,P<0.001).结论 外周血T/B/NK淋巴细胞亚群水平与结直肠癌密切相关;结直肠癌患者经奥沙利铂、卡培他滨治疗后外周血T/B/NK淋巴细胞亚群的绝对数明显下降,其细胞免疫、体液免疫和自然杀伤细胞的功能显著降低.
关键词： 结直肠癌 流式细胞术 T淋巴细胞亚群 B淋巴细胞亚群 自然杀伤细胞(NK细胞) -
联合检测外周血T淋巴细胞及DNT细胞在恶性肿瘤早期诊断中的应用
目的 探讨良、恶性肿瘤鉴别和恶性肿瘤早期诊断的新方法.方法 采用流式细胞仪测定五组良、恶性肿瘤患者(肺肿瘤组、乳腺肿瘤组、胃肿瘤组、肝肿瘤组、肠道肿瘤组)外周血T淋巴细胞和DNT细胞的表达水平,分析五组良、恶性肿瘤患者外周血T淋巴细胞及DNT细胞的差异.结果 五组恶性肿瘤组外周血CD4+/CD8+比值均明显低于同种良性肿瘤组,DNT细胞比例均明显高于同种良性肿瘤组.联合外周血T淋巴细胞亚群及DNT细胞检测恶性肿瘤的灵敏度、特异度分别为89.2％、92.7％.结论 利用外周血T淋巴细胞亚群与DNT细胞联合检测,将明显提高恶性肿瘤诊断的灵敏度和特异度,有较大的临床应用价值.
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食管癌患者淋巴结转移灶DNA含量测定在预后判断中的意义
为了探讨食管癌患者癌周淋巴结转移(LNM)灶细胞DNA含量及其相关指标测定的预后意义,本文采用流式细胞术对64例食管癌癌周LNM灶细胞DNA含量进行检测,并对癌周LNM灶细胞的细胞生物学特性和患者预后的关系进行分析.食管癌癌周LNM灶细胞的DI值、H-检出率、SPF和PI均显著高于相应的对照组淋巴结,Apo却显著低于对照组;癌周LNM灶DNA二倍体者、倍体同质体者、SPF降低者、PI降低者、Apo升高者的术后生存期和5年生存率均显著高于DNA异倍体者、倍体异质体者、SPF升高者、PI升高者和Apo降低者.随癌周淋巴结转移阳性率的升高,患者生存期和5年生存率均逐渐降低,部分呈显著负相关关系. 结论:食管癌癌周LNM灶细胞DNA倍体变化是恶性肿瘤的重要生物学特性之一,其生物学特性和患者预后关系十分密切.因此,癌周LNM灶细胞的生物学参数可作为判断食管癌患者预后的重要参考及量化指标.
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TRAIL及NF-kB在骨肉瘤中的表达及其意义
本文探讨TRAIL及NF-kB在骨肉瘤中的表达及其与细胞增殖调控的关系.对16例非化疗骨肉瘤,5例骨巨细胞瘤和6例软骨肉瘤石蜡切片,应用流式细胞术(FCM)定量检测TRAIL及NF-kB的表达.结果表明TRAIL和NF-kB在骨肉瘤各期间的表达显著高于骨巨细胞瘤和软骨肉瘤(P<0.01);TRAIL和NF-kB在骨肉瘤不同分化组间表达无明显差异(P>0.05);TRAIL和NF-kB在骨巨细胞瘤和软骨肉瘤间表达无明显差异(P>0.05).结论是TRAIL在骨肉瘤中高表达,但可能受NF-kB高表达的调控,不能诱导细胞凋亡;在骨肉瘤的细胞增殖调控中,NF-kB可能通过调控TRAIL诱导的凋亡途径进而抑制细胞凋亡的发生.
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联合检测血清CA15-3及外周血DNT细胞在乳腺良、恶性肿瘤鉴别及乳腺恶性肿瘤早期诊断中的应用
目的 探讨乳腺良、恶性肿瘤鉴别和乳腺恶性肿瘤早期诊断的新方法.方法 采用流式细胞仪测定乳腺肿瘤患者外周血DNT细胞及血清CA15-3的表达水平.结果 血清CA15-3及外周血DNT细胞检测乳腺恶性肿瘤的灵敏度、特异度分别为60.0％、96.3％;55.8％、71.3％.联合血清CA15-3及外周血DNT细胞检测,并联实验将乳腺恶性肿瘤的灵敏度提高至82.3％,串联实验将特异度提高到98.9％.结论 利用血清CA15-3与DNT细胞联合检测,将明显提高乳腺恶性肿瘤诊断的灵敏度和特异度,有较大的临床应用价值.
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联合检测血清CEA及外周血T淋巴细胞、DNT细胞在肺癌诊断中的应用
目的 探讨肺部良、恶性病变鉴别的新方法.方法 采用流式细胞仪测定肺癌患者、肺良性病变患者及健康体检者三组血清CEA及外周血T淋巴细胞亚群与DNT细胞的表达水平.结果 联合检测血清CEA及外周血T淋巴细胞亚群与DNT细胞可将肺癌检出的灵敏度、特异度提高至90.8％、98.9％.结论 利用血清CEA及外周血T淋巴细胞亚群与DNT细胞联合检测,将明显提高肺癌诊断的灵敏度和特异度,有较大的临床应用价值.
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流式细胞术CD34+细胞计数在骨髓增生异常综合征分型诊断中的作用
为探讨流式细胞术(FCM)CD34+细胞计数在骨髓增生异常综合征(MDS)分型诊断中的应用价值.采用多参数FCM设门技术检测MDS患者骨髓CD34+细胞计数,与形态学分型诊断比较.结果显示:对照组和MDS组形态学原始细胞计数分别为0.43±0.64%和2.50±3.68%,FCM CD34+细胞计数分别为0.45±0.24%和1.85±2.60%,MDS组原始细胞计数和CD34+细胞计数均显著高于对照组(P<0.01).对照组原始细胞计数和CD34+细胞计数无明显差异(P>0.05),MDS组的形态学原始细胞计数明显高于FCM CD34+细胞计数(P<0.05).88例MDS患者中,71例FCM分型诊断结果与形态学分型诊断结果一致,符合率为80.7%.除13例有粒细胞分化异常或骨髓明显稀释标本外,其细胞形态学和FCM分型的符合率达94.7%o FCM CD34+细胞计数可用于无明显粒系分化异常的MDS分型诊断.
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乙型肝炎病毒感染者外周血T淋巴细胞亚群表达与其血清HBV-DNA水平的相关性分析
观察乙型肝炎病毒(HBV)感染者外周血T细胞亚群功能变化与其血清HBV-DNA水平,探讨病毒复制程度与细胞免疫功能的关系.应用流式细胞术直接荧光法检测142例HBV感染者和35名健康对照者外周血中T淋巴细胞亚群百分率,用荧光定量PCR法检测HBV感染者血清HBV-DNA.结果显示:与健康对照组比较,慢性乙型肝炎组CD4+细胞数量降低,CD8+细胞数量明显升高(P均<0.01),肝硬化组CD4+/CD8+细胞比值与健康对照组比较明显降低,CD4+ CD25+调节性T细胞数量明显增加(P<0.05).结论:慢性乙型肝炎患者可导致体内细胞免疫功能紊乱,HBV-DNA高复制状态可进一步促进细胞免疫功能紊乱,CD4+/CD8比值的动态检测可为指导临床免疫治疗提供依据.
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剖宫产与阴道分娩产新生儿脐血胰岛功能检测结果分析
目的 探讨剖宫产与阴道分娩产新生儿胰岛功能的差异.方法 随机选取剖宫产50例,阴道分娩产50例.孕期39～41周,新生儿体重、APgar评分无明显差别.检测两组胎儿脐血胰岛素(INS)、C肽(C-P)和胰岛素抗体(ANS),用流式细胞仪酶标法测定T淋巴细胞抗原(CD4、CD8).结果 剖宫产组女性婴儿脐血淋巴细胞CD4抗原、CD4与CD8混合抗原显著高于阴道分娩组(P＜0.01),而CD8抗原却显著低于阴道分娩组(P＜0.01)；剖宫产女性婴儿脐血淋巴细胞CD4/CD8比值显著高于阴道分娩组(P＜0.01)；剖宫产组男性婴儿脐血淋巴细胞只有CD4与CD8混合抗原显著高于阴道分娩组(P＜0.01)；剖宫产组新生儿脐血胰岛素(INS)、C肽(C-P)明显低于阴道分娩产组(P＜0.05),胰岛素抗体(ANS)两组均为阴性.结论 剖宫产可能影响新生儿的胰岛功能,增加糖尿病的发生风险,而剖宫产导致的免疫功能异常可能在其中起主要作用.
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流式细胞术在我院急性白血病免疫分型中的应用
目的 探讨本实验室所用13种单抗对白血病免疫分型的应用价值.方法 应用流式细胞术(FCM)使用13种单抗对99例急性白血病进行免疫分型,与形态学分型相比较.结果 使用13种单抗从99例急性白血病中分出髓系白血病(AML) 59例、淋系白血病(ALL) 27例、混合型(MAL)5例、未分化型(AUL)2例,诊断率达93.9％ (93/99).AML中各抗原表达情况:CD13＞CD33＞CD14、CD7＞CD2、CD19＞CD10＞CD5＞CD20,其中多表达CD13、CD33;ALL中各抗原表达情况:CD19＞CD13＞CD10＞CD20＞CD33＞CD5＞CD7＞ CD2、CD14,其中CD1o、CD13、CD19、CD20表达率较高.免疫分型与形态学分型结果相比较,AML二者的吻合率为90.5％ (57/63)、ALL二者的吻合率为76.5％(26/34);其中1例M0免疫分型为B/M混合、1例M1免疫分型为T/M混合、1例M2a免疫分型为T/M混合、1例L1免疫分型为B/M混合、1例L2免疫分型为T/B混合、1例L2免疫分型为Ly+-AML、2例L2免疫分型为AUL;1例形态学为浆细胞白血病的免疫分型为AML、1例淋单混合型白血病CD7、CD13、CD14阳性.结论 白血病细胞、免疫分型各具特征,形态学相同的白血病免疫分型未必相同,形态学不同的白血病免疫分型未必不同;本实验室所选单抗组合基本能满足白血病的免疫分型,对于一些混合型和未分化型白血病的诊断亦能明确.
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急性髓系白血病中CD64表达的敏感性及特异性研究
研究急性髓系白血病(AML)免疫分型中CD64的敏感性和特异性.用系列抗原对132例AML患者的骨髓细胞进行直接标记,并用流式细胞术进行分析.结果表明:在AML中,CD64对急性粒-单细胞白血病(M4)和急性单核细胞白血病(M5)中敏感性高(分别为96.4%和100%),在其他AML(M0、M1、M2、M3,M6、M7)中表达均较低.CD64对M4和M5中的特异性为56.5%.因此,CD64有助于AML中M4、M5的鉴别诊断.
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结直肠癌患者与健康受试者外周血CD45RA+/CD45RO+淋巴细胞表型分析
目的 分析结直肠癌患者与健康受试者外周血CD45RA+/CD45RO+系列T淋巴细胞表达的差异.方法 运用流式细胞术(FCM)检测2010年1月至2013年12月解放军总医院收治的109例结直肠癌患者(试验组)与64例健康受试者(对照组)外周血CD45RA+、CD45RO+、CD4+ CD45RA+、CD4+ CD45RO+T淋巴细胞亚群表达情况,统计分析试验组和对照组性别和年龄的分布是否存在差异,然后进一步分析CD45 RA等T淋巴细胞亚群与结直肠癌临床分期的关系.结果Ⅰ+Ⅱ期、Ⅲ期和Ⅳ期结直肠癌患者外周血CD45 RA+细胞百分率[三者分别为(56.23±7.75)％、(58.86±7.66)％和(59.02±9.71)％]明显高于对照组[(48.94±12.66)％],差异具有统计学意义(F=11.128,P＜0.001);Ⅲ期和Ⅳ期患者的CD45RO+细胞百分率[分别为(47.19±8.30)％和(45.41±10.45)％]则明显低于对照组[(53.43±11.75)％],差异具有统计学意义(F=5.817,P=0.00083);Ⅲ期和Ⅳ期患者CD45RA+/CD45RO+的比值(分别为1.32 ±0.46和1.43±0.63)明显高于对照组(1.00±0.47),差异具有统计学意义(F=6.986,P=0.000185);Ⅰ+Ⅱ期患者CD4+ CD45 RO+细胞百分率[(31.37±6.39)％]明显高于对照组[(27.49±7.19)％],差异具有统计学意义(F=2.368,P=0.009);Ⅳ期患者CD4+ CD45RA+/CD4+ CD45RO+的比值(0.66±0.39)明显高于Ⅰ+Ⅱ期的患者(0.49±0.23),差异具有统计学意义(F=1.812,P=0.029);各组之间CD4+ CD45RA+细胞百分率无明显统计学差异(F=0.637,P=0.592).结论 随着临床分期的增加,结直肠癌患者外周血CD45RA+细胞逐渐增加而CD45RO+细胞逐渐减少,反映出结直肠癌患者随着肿瘤的进展其免疫功能逐渐抑制、逐渐降低的动态过程;CD4+ CD45RA+细胞和CD4+ CD45RO+细胞在反映结直肠癌患者机体免疫功能方面不如CD45RA+细胞和CD45RO+细胞敏感.
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多色流式细胞术对骨髓增生异常综合征患者外周血免疫表型的分析
目的 了解骨髓增生异常综合征(MDS)患者外周血细胞免疫表型特征.方法 采用多色流式细胞术CD45/SSC双参数散点图设门方法,对38例MDS组患者及24例Non-MDS组患者外周血原始细胞群、粒细胞群及单核细胞群免疫表型进行分析.结果 MDS组患者外周血原始细胞群、粒细胞群及单核细胞群均存在异常免疫表型.MDS组和Non-MDS组外周血原始细胞群中CD34+细胞聚集的患者为16例和3例,比例分别占42.1％和12.5％,差异有统计学意义(P＜0.05).两组中,外周血原始细胞群表达CD11b+细胞的患者为10例(26.3％)和1例(2.6％).MDS组高于Non-MDS组,差异有统计学意义(P＜0.05).MDS组粒细胞群中侧向散射光(SSC)的平均荧光强度和CD10的几何平均荧光强度(G-MFI)分别为7.4±2.8,4.0 ±3.4; Non-MDS组分别为9.5±2.7,8.2±6.6,MDS组均明显低于Non-MDS组,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 MDS患者外周血细胞上存在异常的免疫表型,其特点有助于MDS与Non-MDS疾病的鉴别.
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溃疡性结肠炎患者外周血CD4+CD25+Treg细胞的表达及其意义
探讨CD4+CD25+Treg细胞在溃疡性结肠炎(UC)发病中的作用及其与疾病活动性的关系.采用三色流式细胞术检测52例UC患者,30例其它肠病患者和30名对照者.UC患者中活动期的30例,稳定期的22例,使用和未使用激素和/或免疫抑制剂活动期UC患者分别为18例和12例.对以上各组外周血中CD4+CD25+Treg细胞亚群的百分率进行测定.结果显示,活动期UC患者外周血CD4+CD25+Treg细胞比例明显低于其他肠病和对照组(P＜0.001);疾病活动期UC患者外周血CD4+CD25+Treg细胞比例明显低于疾病稳定期患者(P＜0.001);活动期UC患者中使用激素和/或免疫抑制剂与未使用激素和/或免疫抑制剂结果差异有统计学意义;UC患者外周血CD4+CD25+Treg细胞表达率与疾病活动指数评分呈负相关性,提示UC患者外周血CD4+CD25+Treg细胞异常表达,可能参与疾病的发生发展,与疾病的活动性密切相关.
关键词： 溃疡性结肠炎 CD4+CD25+Treg细胞 外周血 流式细胞术 -
特应性皮炎患者外周血细胞亚群DC1/DC2、Th1/Th2检测的临床意义
为探讨特应性皮炎(AD)患者外周血细胞亚群DC(DC1/DC2)与细胞亚群Th(Th1/Th2)分化状态及其临床意义,采用免疫荧光三标记流式细胞术检测35例特应性皮炎患者外周血DC1/DC2亚群(DC1/CD11c+和DC2/CD123+)、Th1/Th2亚群(CD3+CD4+CD30-/CD3+CD4+CD30+),并以35名正常人作为对照组.结果表明,特应性皮炎患者DC CD123+百分率比对照组明显增高(P<0.05),而CD11c+DC百分率与对照组相比,无统计学意义(P>0.05);Th2(CD3+CD4+CD30+)显著增高(P<0.05),Th1亚型(CD3+CD4+CD30-)与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05).特应性皮炎患者外周血细胞亚群DC2呈优势,导致向细胞亚群Th2的免疫反应偏移,这可能与特应性皮炎的发病有关.
关键词： 特应性皮炎 细胞亚群(DC1/DC2 Th1/Th2) 外周血 流式细胞术 -
腹膜透析对终末期肾病患者NK细胞和T细胞亚群的影响
目的 了解腹膜透析能否改变终末期肾病患者细胞免疫功能.方法 采用流式细胞仪检测CD3+、CD4+、CI4 +/CD8+比值和NK细胞.结果 与腹膜透析前相比,腹膜透析后6个月、12个月,CD3+、CD4+、CD4+/CD8+比值均升高,CD3+透析后12个月与6个月相比继续升高.CD8+腹膜透析后无变化.NK细胞腹膜透析后6个月、12个月分别与透析前相比,均有明显下降.结论 腹膜透析可以改善终末期肾病患者的细胞免疫功能.
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ITP及风湿免疫性疾病血小板及粒细胞相关抗体临床意义探讨
目的 对免疫性血小板减少性紫癜(ITP)患者、健康人群以及伴有血小板减少的风湿免疫性疾病患者(系统性红斑狼疮,类风湿关节炎,干燥综合征)体内血小板相关免疫球蛋白(PAIg)及粒细胞相关免疫球蛋白(Ig)水平的阳性率进行比较,探讨其在免疫性血小板减少性疾病发病中的作用和意义.方法 用Beckman Coulter公司XL流式细胞仪对205例ITP患者、133例健康人及64例伴有血小板减少的风湿免疫性疾病患者的血小板及粒细胞表面相关免疫球蛋白水平检测并进行比较.结果 PAIgG在ITP患者及伴有血小板减少的风湿免疫性疾病患者中均升高,与健康人对照组存在差异;PAIgA的增高仅出现在ITP患者中,与健康人对照组存在差异;而伴有血小板减少的风湿免疫性疾病患者中不增高,与健康人对照组无显著差异.PAIgM的增高仅出现在伴有血小板减少的风湿免疫性疾病患者中,与健康人对照组存在差异,而ITP患者与健康人群对照组无显著差异.三种粒细胞相关抗体则均出现于ITP患者及伴有血小板减少的风湿免疫性疾病患者,与健康人群对照组存在差异.结论 ITP虽然定义为器官特异性免疫性疾病,但受累靶细胞决不仅限于血小板,至少还包括白细胞.免疫性血小板减少疾病发病中普遍存在粒细胞相关抗体的出现.PAIgG并非仅出现在ITP患者,结合PAIgA的增高在临床上可能更支持ITP的诊断;而伴有血小板减少的风湿免疫性疾病患者出现的血小板下降可能主要由PAIgM所介导.
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桥本甲状腺炎患者外周血滤泡辅助T细胞水平及临床意义
目的 检测桥本甲状腺炎(HT)患者外周血滤泡辅助性T细胞(follicular helper T cells,Tfh)水平,探讨Tfh与HT发病的关系.方法 采用电化学发光法检测HT患者及对照组外周血FT3、FT4、TSH、甲状腺自身抗体水平,采用流式细胞术分析各组试验对象的外周血Tfh的水平,同时进行相关性分析.结果 与对照组相比,桥本甲状腺炎患者外周血Tfh比例显著升高(P＜0.05);桥本甲状腺炎患者外周血Tfh与甲状腺自身抗体TPO-Ab呈正相关(P＜0.05),但与Tg-Ab无相关性(P＞0.05).结果 HT患者外周血中Tfh可能参与桥本甲状腺炎的发生和发展.
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多参数流式细胞术分析急性白血病免疫表型
为了探讨急性白血病免疫表型特征,利用流式细胞术三色荧光直接标记技术CD45/SSC多参数散点图设门方法,对162例急性白血病患者幼稚细胞表面及胞浆内分化抗原进行分析.结果提示:急性非淋巴细胞白血病(ANLL)患者主要表达CD117(94.9%)、CD13(88.5%)和CD33(70.5%);急性淋巴细胞白血病(ALL)患者中B-ALL主要表达cCD79a(100%)、CD19(92.1%),T-ALL表达cCD3(100%)、CD2(83.3%);ANLL伴淋系抗原表达(Ly+ANLL),以CD7(56.2%)、CD19(31.2%)多见;ALL伴髓系抗原表达(My+ALL),以CD13(88.9%)、CD33(27.8%)多见.为此用多参数流式细胞术三色荧光直接标记法进行免疫分型,对急性白血病的确诊、治疗和预后有重要的临床意义.
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直标法流式细胞术测定人红细胞表面CD35水平的方法学研究
为研究直标法流式细胞术测定红细胞表面CD35免疫分子水平的方法,抽取健康献血员静脉血,采用直标法流式细胞术测定红细胞CD35水平,研究测试后数据分析方法的可靠性和测试前抗凝剂、标本放置时间和抗体用量等因素对测定结果的影响.结果显示:M1界值选择对CD35阳性红细胞(CD35+-E)百分率计算结果有很大影响,CD35几何平均荧光强度(CD35-GMFI)随FL2通道电压升高而增加,而CD35相对几何平均荧光强度(CD35-rGMFI)不受电压影响;EDTA-2K、肝素锂、枸橼酸钠三种抗凝剂以及标本放置72h内CD35+-E百分率和CD35-rGMFI结果均无明显差异(P＞0.05);取5×105个人红细胞反应时,适合的鼠抗人CD35单克隆抗体量为7μL.可见,CD35-rGMFI是描述红细胞表面CD35水平的理想指标,抗凝剂、标本放置时间对测定结果无明显影响,当红细胞数量为5×105时,佳抗体用量为7μL.
