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复方仙草颗粒对人肾足细胞保护作用的研究
目的 研究复方仙草颗粒对人肾足细胞的保护作用.方法 在体外培养人肾足细胞,实验分为4组:阿霉素组、雷公藤甲素组、地塞米松组、复方仙草颗粒组.采用MTT法检测细胞增殖,荧光技术观察细胞骨架的形态变化,Real-time PCR法检测细胞内nephrin、CD2AP mRNA的表达,蛋白质印迹技术观察细胞内nephrin、CD2AP的蛋白表达水平,流式细胞仪观察细胞内ROS水平.结果 与阿霉素组相比,复方仙草颗粒组人肾足细胞增殖速度明显增加,且具有一定的量效性和时效性;细胞骨架F-actin排列有序,荧光增强;细胞内ROS水平明显降低,足细胞相关蛋白nephrin和CD2AP表达明显提高.结论 复方仙草颗粒通过抑制ROS水平,上调足细胞相关蛋白nephrin和CD2AP的表达,维护细胞骨架,从而对人肾足细胞起到保护作用.
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复方仙草颗粒通过线粒体途径抑制肾足细胞凋亡的研究
目的:研究复方仙草颗粒对人肾足细胞凋亡的抑制作用及其作用机制.方法:采用阿霉素诱导肾足细胞凋亡,实验细胞分为5组:PBS组,阿霉素组,复方仙草颗粒低、中、高剂量组.采用MTT法检测复方仙草颗粒对肾足细胞增殖影响的量效性和时效性.实验细胞分为3组:PBS组、阿霉素组、复方仙草颗粒(高剂量)组(20％).采用倒置相差显微镜观察细胞结构、形态变化,FACS检测细胞凋亡率,Caspase-3活性分光光度法检测细胞内Caspase-3活性,Western blot法检测凋亡相关蛋白的表达情况.结果:经阿霉素处理的人肾足细胞,凋亡明显增多,而复方仙草颗粒干预后,细胞凋亡率显著下降,其抑制作用具有一定的时效性和量效性.细胞形态学观察到复方仙草颗粒组的人肾足细胞形态相对完整;与阿霉素组比较,复方仙草颗粒组的Caspase剪切小体(cleaved Caspase-3,cleaved Caspase-9)、cleaved PARP、Bax、Bid的表达受到抑制;而Caspase前体蛋白(Pro-Caspase-3,Pro-Caspase-9)、Bcl-2,Bcl-XL的表达明显增强.与此同时,细胞色素C向细胞浆的外漏现象明显受到抑制.结论:复方仙草颗粒有效抑制人肾足细胞凋亡,其机制可能与线粒体凋亡有关.
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低表达 C3aR 人肾足细胞的构建及鉴定
目的：前期的研究中发现过敏性毒素C3a受体（ C3aR）在糖尿病肾病病中表达增加，但在糖尿病肾中的病理意义及其在肾组织足细胞中的生理作用尚不清楚，文中通过建立C3aR低表达的肾足细胞系（HPC-C3aRsiRNA），为研究C3aR在肾足细胞中的生理功能提供细胞模型。方法设计合成人C3aR小干扰RNA（ C3aRsiRNA），将其克隆到慢病毒表达载体中，通过与包装质粒共转染293T 细胞，包装成 C3aRsiRNA 慢病毒，利用 C3aRsiRNA 慢病毒感染人肾足细胞 HPC，根据C3aRsiRNA慢病毒具有嘌呤霉素抗性基因的特点筛选稳定转染的人肾足细胞。通过荧光定量PCR分析稳定转染的足细胞C3aR的mRNA表达水平，Western blot和免疫组化染色分析稳定转染的肾足细胞C3aR蛋白水平，鉴定稳定转染C3aR低表达的肾足细胞系。结果荧光定量PCR结果显示，与HPC-C3aRsiRNA细胞C3aR的mRNA水平（0．26±0．04）比较，非转染HPC细胞（1．00±0．13）和阴性对照（1．07±0．16）显著升高（P＜0．05）。免疫组化染色显示HPC-C3aRsiRNA细胞的C3aR蛋白水平显著降低。 Western blot结果显示，与HPC-C3aRsiRNA C3aR蛋白表达（0．62±0．09）比较，正常HPC、阴性转染的HPC表达（1．00±0．08、1．00±0．22）显著升高（P＜0．05）。结论成功构建了C3aR低表达的肾足细胞系，可为进一步了解C3aR在肾中的生理作用提供细胞模型。
