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丹酚酸B人工抗原的合成与免疫原性研究
目的 制备丹酚酸B(SAB)的人工抗原(SAB-BSA)和包被原(SAB-PLL)并进行鉴定.方法 采用碳二亚胺(EDC)法将SAB分别与牛血清白蛋白(BSA)和多聚赖氨酸(PLL)载体偶联合成SAB-BSA和SAB-PLL;采用紫外分光光度(UV)法和薄层色谱(TLC)法对偶联效果进行鉴定,并通过SAB与BSA的吸光值计算出二者的偶联比;利用获得的SAB-BSA免疫小鼠,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测小鼠抗血清内多克隆抗体效价并以间接竞争酶联免疫吸附法(ic-ELISA)检测小鼠抗血清内多克隆抗体的灵敏度.结果 所合成的SAB-BSA为BSA和SAB的结合物,且SAB-BSA中无游离SAB,SAB与BSA偶联成功,SAB-BSA偶联结合比为18∶1;SAB-BSA刺激小鼠产生的针对SAB的多克隆抗体,效价为1∶2×103,该多克隆抗体IC50为17.7 μg/mL.结论 SAB-BSA和SAB-PLL合成成功,可用于SAB单克隆抗体的制备以及SAB快速检测试剂盒的研制.
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大黄酸兔源多克隆抗血清的制备与鉴定
目的 合成大黄酸人工抗原,制备敏感性高、特异性强的大黄酸兔源多克隆抗血清.方法 采用碳二亚胺法制备大黄酸人工抗原,将大黄酸分别与牛血清白蛋白和卵清蛋白相偶联.用紫外扫描法鉴定大黄酸人工抗原是否偶联成功,免疫新西兰兔,制备多抗血清,通过间接竞争ELISA测定抗血清效价,通过间接竞争ELISA鉴定抗血清的敏感性和特异性,并分别用间接竞争ELISA和HPLC检测大黄中大黄酸的含量.结果 2只新西兰兔产生的多抗血清效价在1∶64 000以上,其中,2号兔多抗血清敏感性好,半数抑制浓度为0.09 ng/mL,且具有良好的特异性.兔抗血清测得大黄中大黄酸含量为(0.026±0.001)％,HPLC测得大黄中大黄酸含量为(0.027±0.000)％.结论 本研究制备了敏感性高、特异性强的大黄酸兔源多克隆抗体血清,为建立大黄酸免疫亲和色谱分析技术和快速检测方法奠定了基础.
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绿原酸人工抗原的合成及多克隆抗体的制备
目的 合成绿原酸(chlorogenic acid,CHA)人工抗原,制备CHA多克隆抗体,为制备过敏成分分析的免疫芯片奠定基础.方法 采用碳二亚胺法分别合成CHA免疫抗原(CHA-牛血清白蛋白)和包被抗原(CHA-卵清蛋白);UV法和TLC法鉴定人工抗原偶联是否成功;间接ELISA方法检测免疫小鼠血清中抗体效价;间接竞争ELISA方法检测抗体特异性.结果 经UV法和TLC法检测,CHA与BSA偶联成功.血清抗体效价为1:128 000,CHA-PAbs的质量浓度与抑制率的线性方程为Y=-0.10 lnX+ 1.158,线性检测范围为15.6～250 ng/mL,R2=0.995,并且和甘草酸、黄芩苷等与其常配伍应用的中药化合物均无交叉反应.结论 成功制备了灵敏度高、特应性好的CHA多克隆抗体,为CHA的微量检测和过敏性研究提供了实验依据.
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苦参碱纳米粒及其麦胚凝集素修饰产物的制备
目的 制备苦参碱纳米粒及其麦胚凝集素修饰产物.方法 复乳化-溶剂挥发法制备苦参碱纳米粒,以聚乳酸-羟基乙酸共聚物与苦参碱比例、转速和聚乙烯醇浓度为影响因素,粒径、电位、包封率和载药量为评价指标,通过星点设计优化工艺.碳二亚胺法制备麦胚凝集素修饰苦参碱纳米粒,以碳二亚胺与N-羟基琥珀酰亚胺比例、麦胚凝集素加入量和孵化时间为影响因素,粒径、电位和修饰率为评价指标,通过均匀设计优化工艺.结果 苦参碱纳米粒的佳条件为聚乳酸-羟基乙酸共聚物与苦参碱比例0.594∶1,转速815 r/min,聚乙烯醇浓度为0.46％,平均粒径、电位、包封率和载药量分别为112.04 nm、-15.38 mV、90.05％和27.14％.其麦胚凝集素修饰产物的佳条件为碳二亚胺与N-羟基琥珀酰亚胺比例2.8∶0.12,麦胚凝集素加入量3 mg,孵化时间14 h,平均粒径、电位和修饰率分别为474.7 nm、-5.2 mV和69.51％.结论 该制备工艺可靠,所得苦参碱纳米粒及其麦胚凝集素修饰产物性质稳定.
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氧氟沙星人工抗原的合成与鉴定
目的:合成氧氟沙星人工抗原.方法:采用碳二亚胺法将氧氟沙星与牛血清白蛋白偶联合成完全抗原,采用混合酸酐法将氧氟沙星与卵清蛋白偶联合成应用于ELISA检测的包被抗原.结果与结论:经紫外光谱分析和动物免疫试验证明抗原合成成功.该人工抗原可用于氧氟沙星单克隆抗体的制备及其ELISA检测试剂盒的研制.
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阿莫西林完全抗原的合成与鉴定
目的:制备阿莫西林完全抗原并鉴定.方法:采用碳二亚胺两步法将半抗原阿莫西林与牛血清白蛋白偶联制备免疫原,采用混合酸酐法将阿莫西林与卵清蛋白偶联制备ELISA包被原.采用紫外光谱分析和动物免疫试验鉴定偶联产物.结果与结论:紫外光谱分析和动物免疫试验证实阿莫西林抗原合成成功,该抗原可用于阿莫西林ELISA检测试剂盒的研制.
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脂质体与蛋白质共价偶联的碳二亚胺法
报道脂质体与蛋白类物质胰岛素共价偶联的碳二亚胺(EDCI)法,取一定量脂质体、EDCI及胰岛素液,pH7.4、24°C条件下充分反应2h,用低温高速离心使脂质体-胰岛素复合物与游离胰岛素分开,并将本法与戊二醛法作了比较.结果:碳二亚胺首先与胰岛素上的羧基反应生成一加成中间产物,然后再与脂质体上的氨基反应生成酰胺键,实现两者的交联.EDCI法高效、方便,是一种较好的将蛋白类物质偶联于脂质体上的化学方法.
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去氢甲睾酮单克隆抗体的制备与鉴定
目的:制备去氢甲睾酮(DMT)的单克隆抗体(mAb),为采用免疫法分析食品中该激素的残留提供基础.方法:通过采用碳二亚胺法合成的完全抗原DMT-KLH免疫BALB/c小鼠,经过效价测定,ELISA方法建立,细胞融合、筛选和亚克隆,建立了去氢甲睾酮mAb杂交瘤细胞株,并采用ELISA方法测定mAb纯化后的效价、IC50、交叉反应率和抗体亲和力等参数,以及对猪肉样品中的DMT加标含量进行测定.结果:经过3次亚克隆成功建立1株分泌去氢甲睾酮mAb的杂交瘤细胞株,纯化后抗体的蛋白浓度为0.87 mg/mL,效价为1∶32 000,IC50值为7.57 μg/L,亲和常数为3.09×109L/mol与丙酸睾酮酯、群勃龙的交叉反应率均小于1％,猪肉样品中平均加标回收率为97.73％.结论:成功筛选到分泌DMT mAb的杂交瘤细胞株,并对其产生的mAb的效价、IC50值、特异性、稳定性、IgG亚类和亲和力等特性进行了鉴定,为下一步开展DMT免疫学检测方法研究奠定了基础.
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己烯雌酚免疫原的合成及其抗血清制备
目的: 制备人工合成的己烯雌酚(DES)的多克隆抗体.方法: 采用碳二亚胺法将DES与牛血清白蛋白(BSA)交联, 经紫外扫描估算其交联比为22, SDS-PAGE实验初步表明DES与BSA发生交联.用双向免疫琼脂扩散实验检测经DES-HS-BSA 多次免疫新西兰白兔的抗血清.结果: 合成的DES-HS-BSA复合物, 具有免疫原性, 并产生了针对小分子DES的抗体.结论: DES免疫原的合成是成功的, 为其试剂盒的研制提供了条件.
