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混合酸酐法合成雌二醇酶标抗原偶联工艺影响因素探讨
目的 研究混合酸酐法合成雌二醇酶标抗原偶联工艺影响因素.方法 主要研究有机溶剂种类(二甲基亚砜、N-N二甲基甲酰胺、二氧六环)及有机溶剂添加量、雌二醇衍生物成酐温度及时间、反应摩尔比等偶联效果影响因素.结果 有机溶剂选择N-N二甲基甲酰胺,添加量为50％,雌二醇衍生物成酐温度为冰盐浴,成酐时间为30 min,反应摩尔比为10∶1,偶联反应结束后G52层析纯化,冻干浓缩用PBS复溶后加入等体积甘油,得到的酶结合物效价高于1 ×104.结论 通过偶联工艺优化获得高效价雌二醇酶标物.
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混合酸酐法合成内吗啡肽-1
目的:采用液相方法合成内吗啡肽-1.方法:以混合酸酐法先分别合成Ⅳ端二肽片段和C端二肽片段,再缩合得到四肽,以50%TFA/DCM(三氟乙酸/二氯甲烷)脱除Ⅳ端Boc(叔丁氧羰基)保护基.结果:合成的内吗啡肽-1(EM-1),收率较文献高,结构经质谱和1H NMR确证.结论:混合酸酐法操作简便,反应时间缩短,副产物少,易分离纯化,适用于大量制备.
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4-去乙酰化长春碱氨基酸衍生物的合成
目的:合成4-去乙酰化长春碱氨基酸衍生物,为长春碱靶向前药的合成奠定基础.方法:氨基酸N端采用苄氧羰基(Z)保护,利用混合酸酐法合成(4-去乙酰化长春碱).氨基酸-Z,然后催化氢化得到(4-去乙酰化长春碱)-氨基酸衍生物.结果:采用新方法合成4-去乙酰化长春碱氨基酸衍生物,结构经质谱和~1H-NMR确证.结论:本实验所采用的方法通用性强,优化了反应条件,反应步骤缩短,产率高,产物后处理简便,降低了实验成本.
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猪去氧胆酸人工抗原的合成及鉴定
目的 合成并鉴定猪去氧胆酸(hyodeoxycholic acid,HDCA)人工抗原,为进一步制备其特异性抗体,建立相应的免疫分析方法,并为其应用到药理药效的研究中奠定基础.方法 采用混合酸酐法合成HDCA人工抗原(HDCA-牛血清白蛋白),包被原(HDCA-鸡卵清白蛋白);应用硅胶薄层色谱法鉴定人工抗原、包被原合成是否成功;应用人工抗原与弗氏佐剂的乳化液背部皮下多点注射免疫BALB/c小鼠4次后,尾尖取血,通过酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)方法测定免疫小鼠抗血清的效价和特异性.结果 薄层色谱法检测结果表明,HDCA与牛血清白蛋白(BSA)偶联成功;小鼠抗血清效价大于1∶8 000,竞争抑制曲线表明,血清中的抗体可与HDCA产生特异性结合.抗血清和甘草酸、黄芩苷、栀子苷等与其常配伍应用的中药化合物均无交叉反应,但与胆酸交叉反应率为90％.结论 成功合成了HDCA-BSA,并可诱发小鼠产生相应特异性抗体.为进一步制备抗HDCA单克隆抗体及HDCA药理作用靶点的研究奠定了基础.
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人血凝结因子Xa发色底物的合成研究
利用混合酸酐法和活泼酯法及廉价的试剂较方便地合成了人血凝结因子Xa的一种发色底物.
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氧氟沙星人工抗原的合成与鉴定
目的:合成氧氟沙星人工抗原.方法:采用碳二亚胺法将氧氟沙星与牛血清白蛋白偶联合成完全抗原,采用混合酸酐法将氧氟沙星与卵清蛋白偶联合成应用于ELISA检测的包被抗原.结果与结论:经紫外光谱分析和动物免疫试验证明抗原合成成功.该人工抗原可用于氧氟沙星单克隆抗体的制备及其ELISA检测试剂盒的研制.
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伏立诺他衍生物N2E的合成、鉴定及体外抗肿瘤活性研究
目的 合成伏立诺他衍生物N2E并评价其体外抗肿瘤活性. 方法 以辛二酸为原料,先在乙酸酐中回流,使分子内脱水生成辛二酸酐,然后与2-乙氧基苯胺在二氯甲烷中于0 ℃开环胺化得2-乙氧基辛二酸单酰苯胺,再经甲醇酯化和盐酸羟胺胺解得到伏立诺他衍生物N2E;采用质谱、1H NMR、13C NMR等对合成的目标物N2E进行结构鉴定.以人肺癌细胞NCI-H1299、NCI-H460、A549和胶质瘤细胞U251、MGR2为研究对象,采用MTT法考察N2E对这些肿瘤细胞株的抑制效果,同时观察N2E对人正常肝细胞LO-2的细胞毒作用. 结果 目标物经确证为伏立诺他衍生物N2E[N-(2-乙氧基苯)-N′-羟基辛二酰胺],经归一化法测得纯度约为99.1%;N2E对人肺癌细胞NCI-H1299、A549和胶质瘤细胞U251、MGR2的抑制效果强于伏立诺他(P<0.001),而对人正常肝细胞LO-2的细胞毒作用较伏立诺他弱(P<0.001). 结论 通过混合酸酐法成功合成了N2E,N2E体外对多种肿瘤细胞株呈现出显著抗增殖作用.
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N-叔丁氧羰基-O-苄基-L-苏氨醇的制备及其在合成奥曲肽中的应用研究
目的:合成N-叔丁氧羰基-O-苄基-L-苏氨醇(化合物1),并将其作为原料合成多肽药物奥曲肽.方法:以侧链羟基和氨基均被保护的苏氨酸为原料,分别采用混合酸酐法、四氢锂铝(LiAlH4)法以及卡特缩合剂(BOP)法进行还原反应,柱层析分离纯化,合成目标化合物,经红外光谱(IR)、核磁共振氢谱(1H-NMR)及质谱(MS)进行表征.合成的目标化合物经脱除氨基保护,用于奥曲肽合成.结果:混合酸酐法、LiAlH4法、BOP法合成目标化合物1的收率分别为83.2％、73.4％、69.5％,纯度分别为99.0％、98.8％ 、98.5％,并经过结构表征确证；奥曲肽合成收率为6％,纯度＞98％.结论:混合酸酐法合成化合物1的操作简便、收率高、纯度高,并成功应用于奥曲肽的合成.
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头孢拉定合成工艺的优化
7-ADCA与四甲基胍反应形成胍盐,再与苯酐氨酸邓钠盐的混合酸酐缩合,经水解得到头孢拉定,收率＞94％.此工艺优化了反应条件,找到了可行的检测方法来监控反应终点,省去了炭脱色步骤,采用抽除二氯甲烷的方法稳定晶型,还可以从母液中回收复盐并套用,易于工业化生产.
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混合酸酐法合成CCK-4
目的液相合成Trp-Met-Asp-PheNH2四肽(CCK-4).方法以N-保护的色氨酸、甲硫氨酸、天门冬氨酸和C-保护的苯丙氨酸为原料,采用混合酸酐法合成了CCK四肽,总收率38.5%.结果其结构经IR、1HNMR、MS确证,熔点与文献报道的一致.结论采用重复过量混合酸酐法合成了目标化合物(6),所用方法经济、有效、可靠.
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抗醋酸甲羟孕酮抗体的制备及初步鉴定
目前, 我国使用的检测醋酸甲羟孕酮(Medroxyprogesterone acetate, MPA)的ELISA试剂盒主要依靠国外进口, 因其价格非常昂贵, 不可能在国内推广使用.本研究旨在提供原料研究了相关抗原的合成以及研制合格的抗MPA的抗体, 组装检测MPA的ELISA试剂盒.
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氯霉素-BSA和氯霉素-OVA偶联物的制备与鉴定
目的: 制备氯霉素(CAP)-牛血清白蛋白(BSA)及氯霉素(CAP)-卵清白蛋白(OVA)的偶联物并进行鉴定.方法: 分别采用混合酸酐法和重氮化法制备CAP-BSA及CAP-OVA的偶联物, 前者是将CAP先与琥珀酸酐反应生成CAP-半琥珀酸酯(CAP-HS), 再进行混合酸酐反应.将反应产物CAP-HS与BSA结合, 合成CAP-HS-BSA偶联物; 后者是将CAP分子中的苯环上的硝基还原为氨基后,进行重氮化处理, 然后分别与BSA和OVA连接, 合成CAP-BSA和CAP-OVA复合物.结果: 紫外图谱分析表明, CAP-BSA、CAP-OVA和CAP-HS-BSA的紫外大吸收峰分别是262 nm、213 nm 和275 nm; 计算得CAP与载体蛋白BSA、OVA及HS的偶联比分别为5∶1、12∶1和22∶1.结论: 成功的制备CAP-BSA及CAP-OVA的偶联物,为免疫动物制备抗CAP的抗体奠定了基础.
