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慈姑多糖和慈姑水提部位对异烟肼和利福平合用致肝细胞损伤保护作用的比较研究
目的 比较慈姑多糖和慈姑水提部位在体外对异烟肼(INH)和利福平(RFP)合用致肝细胞损伤的保护作用.方法 采用系统化学溶剂萃取法制备慈姑水提部位,采用水提醇沉法制备慈姑多糖.培养HepG2肝细胞,建立异烟肼和利福平合用(INH/RFP)致体外肝细胞损伤模型,给予慈姑水提部位或慈姑多糖处理后,利用MTT法检测肝细胞的存活率,并检测细胞培养上清液中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)的浓度.结果 与模型组比较,慈姑水提部位组和慈姑多糖组均可增加细胞存活率(P＜0.05),降低INH/RFP损伤肝细胞培养上清液中ALT、AST、LDH、MDA水平(P＜0.05),慈姑多糖组较慈姑水提物部位组细胞存活率更高,细胞培养上清液中ALT、AST、LDH、MDA水平更低.结论 慈姑多糖和慈姑水提部位对体外INH/RFP致肝细胞损伤均有保护作用,慈姑多糖作用更强,其作用可能与抗脂质过氧化有关.
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慈姑多糖对异烟肼和利福平联用致HepG2细胞肝损伤CYP2E1和CYP3A4的影响
目的:研究慈姑多糖(Sagittaria sagittifolin polysaccharide,SSP)对异烟肼(Isoniazid,INH)和利福平(Rifampicin,RFP)联用致HepG2细胞肝损伤中细胞色素P450酶(cytochrome P450,CYp450)亚型CYP2E1和CYP3A4酶含量、基因及蛋白表达影响.方法:采用酶联免疫吸附(ELISA)法测定HepG2细胞中CYP2E1和CYP3A4酶含量,采用RT-PCR技术检测HepG2细胞中CYP2E1和CYP3A4的mRNA的表达,采用Western-blot法检测HepG2细胞中CYP2E1和CYP3A4蛋白的表达.结果:与正常对照组相比,INH和RFP联用诱导的肝损伤模型组CYP2E1和CYP3 A4酶含量、基因及蛋白表达均显著升高(P＜0.05);与模型组相比,SSP保护组的CYP2E1和CYP3A4酶含量、基因及蛋白表达均显著降低(P＜0.05).结论:SSP可能通过抑制肝HepG2细胞中CYP2E1和CYP3 A4酶的含量、基因及蛋白的表达,发挥其对INH和RFP联用致肝损伤的保护作用.
关键词： 慈姑多糖 INH/RFP CYP2E1、CYP3A4 肝损伤 -
苯酚-硫酸法测定慈姑中多糖的含量
目的 建立测定慈姑中多糖含量的方法.方法 采用水提醇沉法提取慈姑多糖,并用苯酚-硫酸法对所提慈姑多糖含量进行测定,测定波长490 nm.结果在范围20~100μg内呈良好线性关系,r2=0.9928,平均回收率为104%,RSD=4.72(n=5),且供试溶液在2 h内显色稳定.结论 苯酚-硫酸法测定慈姑中多糖含量,方法灵敏、重现性好,适用于慈姑多糖含量测定.
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慈姑多糖中蛋白质的含量测定
目的:测定慈姑粗多糖中游离蛋白和结合蛋白的含量.方法:用水提醇沉法提取慈姑中的水溶性多糖,经Sevag法将粗多糖脱去蛋白得精制多糖;用微量凯氏定氮法测定粗多糖和精制多糖中蛋白质含量.结果:经水提醇沉法所得的慈姑粗多糖中蛋白质含量为5.80%,慈姑精制多糖中蛋白质含量为2.67%,是因为Sevag法适用于游离蛋白的去除,但无法除去多糖中的结合蛋白.结论:慈姑多糖中含3.13%游离蛋白和2.67%结合蛋白.
