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SDS-PAGE对不同产地及质量枸杞的鉴别研究
目的 探讨SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳定性鉴别不同产地及不同质量构杞的方法.方法 用不连续系统SDS-PAGE法对不同产地及不同质量的枸杞进行鉴别.结果 不同产地及不同质量的构杞SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱有相似性及区别性.结论 该方法准确,可靠,重复性好,可对不同产地及不同质量的构杞鉴别提供重要参数.
关键词： SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 枸杞鉴定 宁夏构杞 -
用含底物SDS-PAGE检测明胶酶活性
将明胶加入SDS-聚丙烯酰胺凝胶中,电泳后样品中所含明胶酶按分子量大小不同停留于凝胶中的特定位置.用TritonX-100除去SDS使酶复性后,明胶酶便可分解凝胶中的底物.底物被分解处考马斯亮蓝染色时不着色,因此在蓝色背景下可见酶所在位置呈白色条带,根据白色条带的深浅和宽窄可判断酶活性的高低.用此方法检查了大鼠不同组织中的明胶酶活性及传代培养对血管平滑肌细胞分泌明胶酶的影响.结果显示,大鼠不同组织及不同龄大鼠同种组织明胶酶活性存在差异.另外,传代培养的平滑肌细胞与组织间分泌明胶酶的种类亦不同.
关键词： SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 明胶酶 -
高效氯氰菊酯抗性家蝇过氧化物酶性质变化研究
目的 研究家蝇抗药性产生机制,为选择快速准确的监测技术和科学用药提供理论依据.方法 通过对实验室培育的抗高效氯氰菊酯品系、抗性衰减品系及敏感品系家蝇的谷胱甘肽-过氧化物酶(GSH-PX)的活性及SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,观察过氧化物酶对家蝇抗性产生的作用.结果 抗性家蝇GSH-PX的活性明显增高,抗性品系家蝇相对活性达到165.89%,抗性衰减品系活性降低到70.13%.3个家蝇品系的电泳图谱中6组条带有较明显的差别.结论 抗高效氯氰菊酯家蝇的过氧化物酶性质发生改变,对家蝇的抗药性产生可能起比较重要的作用.
关键词： 家蝇 谷胱甘肽-过氧化物酶 酶活性 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 -
用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法提纯蛋白质
对于含有多种成分且各蛋白质成分的分子量相差较小的菌体蛋白质的提纯,用一般的沉淀法、层析法均达不到理想效果.作者选用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法进行提纯,并尝试电泳后不经过染色,直接从凝胶中分离所需要的蛋白质成分.该实验对制胶、电脉、染色、脱色等各个环节进行了适当的改进,取得了较好的提纯效果.
关键词： 菌体蛋白质 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 -
大鼠脑线粒体体外蛋白翻译体系的建立及蛋白产物的鉴定
目的:建立大鼠脑组织线粒体的体外蛋白合成体系并对其合成产物进行电泳分离和分子量鉴定.方法:分离大鼠脑组织线粒体,用3H-亮氨酸掺入法探索线粒体体外翻译的佳条件,35S-蛋氨酸掺入并对翻译后产物经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和放射自显影进行分子量鉴定.结果:分离的线粒体氧化磷酸化偶联程度高,呼吸控制率(RCR)在3.5～5.5之间;体外3H-亮氨酸的掺入活性在60 min内近似线性增长,而后维持在一相对稳定水平;3H-亮氨酸的掺入活性随线粒体蛋白浓度而增加,而单位线粒体蛋白的掺入活性在1 mg/ml时高;35S-蛋氨酸掺入SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳后可观察到清晰的8条自显影带,分子量分别为(单位Kda)86、66、56、43、33、29、25、18.结论:用此方法建立的脑线粒体离体翻译反应体系具有高活性和翻译忠实性等特点,是研究脑mtDNA在翻译水平的表达及调控的有效方法.
关键词： 线粒体翻译 大鼠脑 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 -
电泳技术在鹿茸和鹿角鉴别中的应用
目的 建立鹿茸和鹿角与其混淆品狍子角、坡鹿角、驯鹿角和驼鹿角的水溶性蛋白的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-polyacrylamide gel electrophoresis,Native-PAGE)和十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)鉴别方法,并对2种电泳方法进行比较.方法 采用Native-PAGE和SDS-PAGE两种电泳系统分别对不同产地鹿茸和鹿角与其混淆品水溶性蛋白的组成及其分子量分布范围进行比较研究.结果 在N-ative-PAGE图谱中,花鹿茸、马鹿茸、梅花鹿角和马鹿角均具有4条特征谱带,而混淆品狍子角、坡鹿角、驯鹿角和驼鹿角均具有1条特征谱带.正品组与混淆品组间特征谱带大小和位置有明显差异,但鹿茸和鹿角的电泳行为相似.在SDS-PAGE图谱中,花鹿茸、马鹿茸、梅花鹿角和马鹿角的特征谱带数目分别为4条、7条、3条和4条,而混淆品狍子角、坡鹿角、驯鹿角和驼鹿角均具有1条特征谱带,4种鹿茸和鹿角药材及其混淆品的特征谱带的大小和位置存在明显不同.结论 Native-PAGE法不能区别鹿茸与鹿角,但可区分它们与其混淆品药材.而SDS-PAGE法的图谱具有更多鉴别谱带,可明确区分鹿茸与鹿角及其混淆品药材,本研究为鹿茸和鹿角质量综合评价和控制方法提供了科学依据.
关键词： 鹿茸 鹿角 鉴别 Native-聚丙烯酰胺凝胶电泳 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 -
牛凝血酶等电点的初步测定
作为一种新型的速效局部止血药和工具酶,凝血酶在临床和生物学研究中的应用十分广泛,牛血浆是其重要的来源之一.等电点沉淀是提取牛凝血酶首要和关键的步骤,测定其等电点后,再用此法时将得到更纯的凝血酶粗制品.本实验的目的是采用载体两性电解质pH梯度等电聚焦电泳的方法,结合SDS-PAGE测定牛凝血酶的等电点.经双向电泳后,SDS聚丙烯酰胺凝胶中出现了4个清晰的斑点,分别测定它们的分子量和等电点,其中一个斑点与牛凝血酶B链的分子量一致为32kDa,其等电点为5.19.
关键词： 牛凝血酶 等电点 等电聚焦 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 -
两种方法测定猪血小板衍生生长因子相对分子质量的对比分析
血小板衍生生长因子(PDGF)是对机体组织器官具有广泛调节作用的多肽[1],对提取、纯化的PDGF的相对分子质量和纯度进行分析,是了解其理化性质和生物学特性的基础.在生物化学领域中,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和高效液相色谱(HPLC)技术已广泛用于氨基酸、蛋白质、多肽、酶、核酸等产物的分离和鉴定.本实验在已提取和纯化猪PDGF(pPDGF)[2]的基础上,应用SDS-PAGE和HPLC法[3]对其进行相对分子质量(Mr)和纯度的测定,并将两种方法的结果进行比较.
关键词： 血小板衍生生长因子 猪 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 高效液相色谱 相对分子质量 -
制癌链霉菌ATCC15944发酵液中抗肿瘤组分的制备和初步鉴定
新制癌菌素是1965年发现的烯二炔类抗肿瘤抗生素,聚(苯乙烯-马来酸)-NCS偶联物在日本主要用于临床的肝癌介入治疗,目前该药物在国内还没有生产.为了制备新制癌菌素.新制癌菌素产生菌Streptomyces carcino-staticus ATCC15944被在28℃、250 r/min条件下液体发酵,振荡培养72 h.发酵液经预处理后,离心后取上清液经硫酸铵分级沉淀、纯水膜透析分离纯化得到组分SIPI-ZX-1.HPLC分析表明产物纯度大于90％.SDS-PAGE和质谱数据显示,该蛋白质相对分子质量约为11 ku.该产物的抗人肝癌细胞的体外活性被测定.该结果与新制癌菌素的分子质量和抗肿瘤活性数值基本一致.本制备方法简捷,成本较低,本工作为进一步研究新制癌菌素的制备工艺奠定了基础.
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重组人胸腺素α1融合蛋白在大肠杆菌中表达条件的优化
为提高人胸腺素α1(Tα1)融合蛋白在大肠杆菌中的表达量,研究了本实验室构建的pET39-Tα1重组质粒在E. coli BL21(DE3)宿主菌中的表达条件.经SDD-PAGE和凝胶成像系统GDS-8000分析结果表明,重组菌以LB为培养基,卡那霉素浓度为50 mg/L,开始诱导时的菌体密度为OD600=0.5,所加IPTG的浓度为0.5 mmo1/L,27.5℃摇床200r/min振荡诱导培养10 h时,可在周至空间中获得高效表达的可溶的Tα1融合蛋白,占周质蛋白总量的64.7%,为下一步纯化工作提供了方便.
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纳豆激酶分离纯化与鉴定
为了提高纳豆激酶的溶栓活性,从纳豆粗提物中分离纯化了纳豆激酶.采用Butyl-Toyopearl柱层析对纳豆粗提物进行了分离纯化,以试管法确定和收集了活性部位,用纤维蛋白平板法测定了活力,并用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)对分离纯化的效果进行了检验.考察了纳豆激酶粗提物在不同温度和湿度条件下的稳定性.结果表明在SDS-PAGE中观察到三条明显的蛋白谱带,其中相对分子质量为19 275和27 101的区带具有与文献报道类似的纳豆激酶的相对分子质量和纤溶活性,而相对分子质量为14 400的蛋白区带与文献报道的纳豆激酶的相对分子质量大有差异.纯化倍数为50倍,活性回收率为75.57%.初步稳定性实验结果表明:其外观在40°C和60°C保存条件下发生变化,纤溶活力在60°C保存条件下发生显著变化.而4℃条件下活力和外观却很少有变化;纳豆粗提物在不同湿度条件下均具有较强吸湿性.纳豆粗提物对高温和高湿稳定性较差.
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大苞栝楼的药用价值分析
比较了常用的三种提取天花粉蛋白(Trichosanthin,TCS)方法的提取效果,通过SDS-PAGE分析了大苞栝楼籽的蛋白组成和分子质量分布,以及大苞栝楼的根、叶、茎和愈伤组织中蛋白组成的异同,同时分析了各个器官中26ku蛋白的氨基酸组成.结果表明,Wong的方法较好;栝楼和大苞栝楼的图谱符合程度为56.3%,图谱特征系数为43.7%;大苞栝楼的各个器官的蛋白组成差异较大,其中多数为低分子质量蛋白,具有很多共同的谱带,而且,根、叶、茎和种子中都具有与TCS和核糖体失活蛋白TCK电泳行为相似的蛋白,氨基酸分析也证明了它们组成上的一致性.从而证明大苞栝楼具有潜在的药用价值.
关键词： 栝楼 大苞栝楼 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 天花粉蛋白 氨基酸组成 -
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛇毒抗瘤蛋白的相对分子质量
目的建立改进的低分子SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛇毒抗瘤蛋白的相对分子质量(Mr).方法考察不同因素对电泳结果的影响,对Mr标准进行直线回归分析,确定蛇毒抗瘤蛋白中组分的Mr.结果测得各条带的Mr分别为:23 500、15400、13400、11 300、9 300、8 000.结论此法供试品处理方便,用量少,在含6 mol/L尿素的分离胶(交联度为16.5%,丙烯酰胺总浓度为6%)中能同时显示中、低Mr的条带,是一种测定中、低Mr的较好方法.
关键词： 蛇毒抗瘤蛋白 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 相对分子质量 -
妇血宁与氨肽素不连续体系SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳特征研究
目的研究妇血宁与氨肽素及其片剂不连续体系SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)特征差别.方法用妇血宁与氨肽素及其片剂进行不连续体系SDS-PAGE,并对其结果进行对比.结果妇血宁及其片剂在整个泳道均有分布,在分子量大于90 000和小于20 000的区域染色较深,在泳道的前端有至少1条明显的条带;氨肽素及其片剂成分主要分布在分子量小于20 000的区域,在整个泳道无明显的条带;妇血宁和氨肽素与其相应的片剂电泳图谱没有明显的不同.结论在此SDS-PAGE条件下,妇血宁与氨肽素各有不同的电泳特征,可用于妇血宁和氨肽素及其片剂的鉴别.
关键词： 妇血宁 氨肽素 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 -
水溶性及水不溶性晶状体蛋白质的研究
目的用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)的方法对水溶性及水不溶性晶状体蛋白质进行分离分析,以完善晶状体蛋白质组的研究.方法用12%分离胶对晶状体水溶性蛋白(WSF)及脲溶性蛋白(USF),碱溶性蛋白(ASF)及超声溶性蛋白(SF)进行SDS-PAGE.用8%及3%～8%的梯度分离胶对WSF及USF进行SDS-PAGE.结果USF,ASF,SF和WSF相比有明显差异.WSF及USF在相对分子质量＞100000处可显示出数条清晰的蛋白谱带.结论水溶性高相对分子质量晶状体蛋白及水不溶性晶状体蛋白在双向凝胶电泳中不能很好地分离,而在单向电泳中可分离出特异性蛋白谱带,此结果是对晶状体蛋白质组研究的一种有效补充.
关键词： 晶状体 蛋白质 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 -
大鼠各组织器官蛋白质图谱分析
目的研究大鼠各组织器官的蛋白质图谱.方法用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)技术分析大鼠17种组织器官的蛋白质表达.结果获得大鼠不同组织器官蛋白质图谱,其中肝脏中蛋白质种类多.结论各组织器官蛋白质含量与种类存在差异,但与相应的组织器官具有和执行的功能呈一定的相关性.
关键词： 大鼠 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 蛋白质图谱 -
山东产不同农家品种瓜蒌的种子蛋白电泳分析
目的:鉴定山东产瓜蒌的不同农家品种,并探讨它们的亲缘关系.方法:利用垂直平板聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,对山东产瓜蒌的不同农家品种、野生种及湖北栝楼进行种子蛋白电泳分析,并绘制指纹图谱.结果:山东产瓜蒌不同农家品种和野生种种子的蛋白电泳图谱具有多条共有带,而与湖北栝楼图谱差异显著.结论:种子蛋白电泳分析可用于瓜蒌不同农家栽培品种的辅助鉴别,仁瓜蒌与牛心瓜蒌、小光蛋与野瓜蒌彼此间亲缘关系较近.
关键词： 瓜蒌 农家栽培品种 种子蛋白 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 -
日本血吸虫在小鼠体内不同发育时点的生长速度与蛋白组分差异
目的 比较观察日本血吸虫发育中虫体在不同时点的生长速度和蛋白组分差异.方法 选择昆明鼠人工感染日本血吸虫尾蚴,分别收集感染前和感染后第8、12、16、20、24和28 d虫体;用Motic BA400病理图像处理系统及3.2分析软件采集虫体图象作形态观察和大小测量(包括水平面积、周长、长与宽);用SDS-PAGE平行分离各时点虫体蛋白,用图像分析软件Quantity One 4.4比较分析其区带差异.结果 日本血吸虫感染昆明鼠后,发育中虫体在不同时点的生长速度不均衡,第8～12天的生长速度为快,其他依次为12～16d、16～20 d、20～24d、0～8 d和24～28d的虫体;同一时点虫体间发育的个体差异也大,以12d后虫体较为明显.电泳分析7个不同时点的虫体蛋白区带显示:区带数在0、8、12、16、20、24和28 d虫体中分别为27、30、33、32、31、36和29条,其中多数为相同分子量蛋白区带,但有些在蛋白表达量上有明显差异;各时点虫体特异性区带在0、8、12～24 d和28d虫体中分别为7、4、8、3条,虫体特异性区带多为低表达量的条带.结论 日本血吸虫童虫在小鼠体内的不同发育时点间存在着生长速度和蛋白组分的差异,其中以8～12 d时段的虫体发育快,两者间蛋白组分差异也较明显.
关键词： 日本血吸虫 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 生长速度 蛋白组分 -
紫外线照射日本血吸虫尾蚴疫苗保护性抗原的筛选
目的分析经紫外线照射处理后日本血吸虫尾蚴蛋白的差异性表达,并从中筛选出有效的保护性抗原组分.方法收集尾蚴,制备抗原,进行SDS-PAGE电泳后,转印至硝酸纤维素膜上,与照射尾蚴免疫血清和正常感染血清分别进行免疫印渍(Western blot)试验,比较两者反应条带的差异性,筛选出惟有免疫血清所能识别的特有的抗原组分,并测定其分子量.结果在童虫抗原中发现一条能被免疫血清所识别的特异性抗原条带,并测得其分子量为75kDa.结论紫外线照射致弱尾蚴可诱导宿主产生特异性抗体,被该抗体所识别的抗原分子量为75kDa.
关键词： 日本血吸虫 紫外线 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 免疫印渍 -
左旋门冬酰胺酶鉴别方法的研究
目的比较左旋门冬酰胺酶的两种鉴别方法.方法分别利用薄层色谱法和电泳法进行实验.结果两者都能很好地鉴别出左旋门冬酰胺酶.结论在一般鉴别实验中,薄层色谱法较电泳法更简便,快速.
关键词： 左旋门冬酰胺酶 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 薄层色谱法
