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骨灵膏及其拆方制剂对 OA 模型大鼠 NO、IL-10及 CoL-Ⅱ的作用
目的：通过骨灵膏及其拆方制剂对骨关节炎模型大鼠血清NO、IL-10的含量及软骨Ⅱ型胶原的阳性表达的作用，探讨骨灵膏及其拆方制剂对骨关节炎的作用机制。方法选用60只雌性SD大鼠随机分为骨灵膏、骨膏、灵膏、塞来昔布、模型及正常组6组，每组10只，采用冷固法建立骨关节炎模型，造模成功后，骨灵膏、骨膏、灵膏均按10.41ml· kg-1· d-1（相当于生药量33.31g· kg-1）灌胃，塞来昔布20.83mg· kg-1· d-1灌胃，正常、模型组给予等量生理盐水灌胃，给药10周后，取大鼠血清及膝关节软骨组织，分别以免疫荧光和ELISA法检测软骨Ⅱ型胶原的阳性表达和血清NO、IL-10的含量。结果 M组与NG组比较能显著降低血清IL-10的含量和软骨Ⅱ型胶原的阳性率（P＜0.01）；GLG与M、GUG，LG及CLXB组比较能明显增加血清IL-10的含量和软骨Ⅱ型胶原的阳性率（P＜0.01）；M组与NG组比较能显著增加血清NO的含量（P＜0.01）；GLG与M、GUg，LG及CLXB组比较能明显降低血清NO的含量（P＜0.01）。结论 GLG可能通过降低模型大鼠血清NO的氧化损伤和增强IL-10的抗炎作用，通过抗炎、抗氧化途径抑制OA受损软骨细胞外基质Ⅱ胶原的降解，阻止软骨退行性变，保护了关节软骨，其作用明显优于其拆方制剂GUG， LG及CLXB。
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骨灵膏及其拆方制剂对骨关节炎大鼠模型 IL -17、IL -18作用的实验研究
目的：通过骨灵膏及其拆方制剂对骨关节炎模型大鼠 IL -17、IL -18作用的研究，探讨骨灵膏及其拆方制剂对骨关节炎的作用机制。方法60只雌性 SD 大鼠随机分为骨灵膏组（GLG）、骨膏组（GUG）、灵膏组（LG）、塞来昔布组（CLXB）、模型组（M）及正常组（NG）共6组，冷固法建立模型，造模成功后，骨灵膏、骨膏、灵膏均按10.41 ml/（Kg·d）灌胃，塞来昔布以20.83 mg/（Kg· d）灌胃，其余组给予生理盐水灌胃。给药10周后，取大鼠血清及关节软骨，分别以免疫荧光和 ELISA法检测软骨 IL -17、IL -18阳性表达和血清 IL -17、IL -18的含量。结果 M 组与 NG 组比较能显著增加软骨细胞 IL -17、IL -18阳性表达及血清 IL -17、IL -18的含量（P ﹤0.01），GLG 与 M、GUG、LG 及 CLXB 组比较，能明显降低软骨细胞及血清 IL -17、IL -18阳性表达及含量（P ﹤0.01）。结论GLG 可能通过降低 OA 模型大鼠血清 IL -17、IL -18的含量及软骨细胞 IL -17、IL -18阳性表达，对抗 OA 的炎症损伤，保护了关节软骨，其作用明显优于其拆方制剂 GUG、LG 及西药 CLXB。
关键词： 骨灵膏 骨关节炎 白细胞介素 - 17 白细胞介素 - 18 -
骨灵膏及其拆方制剂对骨关节炎软骨细胞凋亡及胞外基质降解的影响
目的:通过骨灵膏及其拆方制剂对骨关节炎(0A)软骨细胞凋亡及胞外基质降解作用的研究,探讨骨灵膏及其拆方制剂对骨关节炎的作用机制.方法:选用60只雌性SD大鼠随机分为骨灵膏、骨膏、灵膏、塞来昔布、模型及正常组6组,每组10只,采用冷固法建立骨关节炎模型,造模成功后,骨灵膏、骨膏、灵膏均按10.41 mL·kg-1 ·d-1(相当于生药量33.31 g·kg-1)灌胃,塞来昔布20.83 mg·kg-1 ·d-1灌胃,正常、模型组给予等量生理盐水灌胃,给药10周后,取大鼠膝关节软骨组织,分别以苏木精-伊红(HE)、番红-固绿(SA/FG)、番红-阿尔辛蓝(SA/AB)进行组织病理观察,根据改良的Mankin关节软骨病理评分标准进行分级评分,采用Western blot法检测基因153(CHOP/GADD153)蛋白的表达,通过荧光定量PCR检测软骨细胞B细胞淋巴瘤/白血病2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),基质金属蛋白酶-3(MMP-3),基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)mRNA表达.结果:与正常组比较模型组能显著减低Bcl-2,TIMP-1 mRNA表达(P＜0.01)及增加Bax,MMP-3 mRNA表达(P＜0.01).与模型组相比骨灵膏能明显下调ERS相关CHOP/GADD153蛋白的生成(P＜0.01)、促进抑凋亡基因Bcl-2mRNA表达及降低促凋亡基因BaxmRNA表达(P＜0.01),进而上调Bcl-2/bax,抑制软骨细胞的异常凋亡;同时,骨灵膏较模型组能显著降低MMP-3 mRNA的表达(P＜0.01)、升高TIMP-1 mRNA的表达(P＜0.01),降低MMP-3 mRNA/TIMP-1 mRNA.结论:骨灵膏可能通过降低ERS途径相关蛋白GADD153的异常生成,进一步调控相关凋亡靶基因的表达而抑制软骨细胞的异常凋亡和阻止细胞外基质异常降解而阻止OA关节软骨退行性变,保护了关节软骨,其作用明显优于其拆方制剂骨膏、灵膏.
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骨灵膏及其拆方制剂对骨关节炎动物模型体外培养软骨细胞的作用
目的:通过骨灵膏及其拆方制剂对骨关节病(OA)体外培养软骨细胞的作用,探讨其对OA的作用机制.方法:SD大鼠随机分为骨灵膏、骨膏、灵膏、塞来昔布、模型及正常组6组,冷固法建立OA模型,造模成功后,各治疗组给予相应药物灌胃,其余组给予0.9％氯化钠溶液灌胃,给药10周后,用大鼠含药血清对体外传代培养的OA大鼠软骨细胞进行处理;镜下方格法计数细胞密度,免疫荧光检测Ⅱ型胶原的表达,CCK8检测软骨细胞光吸收值,收集各组大鼠脾脏和胸腺计算其指数.结果:4用药组含药血清处理的软骨细胞密度明显高于模型组(P＜0.01);骨灵膏与模型组、骨膏组、灵膏组及塞来昔布组比较,软骨细胞的OD显著增加(P＜0.01);与正常组比较,模型组大鼠脾脏指数(SI)及胸脾指数(TI)显著降低(P＜0.01);骨灵膏组与模型组、骨膏组、灵膏组及塞来昔布组比较大鼠的SI、TI显著增加(P＜0.01).结论:骨灵膏可提升局部软骨细胞增殖活力,阻止OA关节软骨退行性变,其作用明显优于其拆方制剂及塞来昔布.
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骨灵膏及其拆方对骨关节炎模型大鼠炎性细胞因子与聚蛋白多糖酶的影响
目的 探讨骨灵膏及其拆方制剂抗骨关节炎软骨损伤的可能作用机制.方法 60只SD大鼠随机分为骨灵膏组、骨膏组、灵膏组、塞来昔布组、模型组及正常组,每组10只.除正常组外其余各组采用寒冷刺激结合石膏固定的方法建立骨关节炎模型,造模成功后骨灵膏组、骨膏组及灵膏组分别给予骨灵膏、骨膏及灵膏生药量33.31g/ (kg·d)灌胃给药,塞来昔布组给予塞来昔布20.83 mg/ (kg· d)灌胃,模型组和正常组给予等量生理盐水灌胃,8周后检测膝关节软骨组织聚蛋白多糖酶4 (ADAMTs-4)、聚蛋白多糖酶5 (ADAMTs-5)蛋白表达,检测膝关节滑膜和血清白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、前列腺素E2(PGE2)、环氧合酶2(COX-2)、γ干扰素(IFN-γ)的含量.结果 与正常组比较,模型组大鼠血清与滑膜IL-1β、TNF-α、PGE2、COX-2、IFN-γ的含量均显著增加(P＜0.01).与模型组比较,骨灵膏组血清与滑膜IL-1β、TNF-α、PGE2、COX-2、IFN-γ含量明显降低(P＜0.01).与骨灵膏组比较,骨膏组血清IL-1β、TNF-α、COX-2、IFN-γ含量和滑膜IL-1β、COX-2、PGE2、TNF-α、IFN-γ含量升高(P＜0.05或P＜0.01),灵膏组血清和滑膜IL-1 β、TNF-α、COX-2、PGE2、IFN-γ含量升高(P＜0.05或P＜0.01),塞来昔布组血清IL-1β、TNF-α、PGE2、IFN-γ含量和滑膜IL-1β、PGE2含量亦升高(P＜0.01).各组大鼠膝关节软骨组织ADAMTs-4、ADAMTs-5均有表达,其中模型组表达显著,骨灵膏组ADAMTs-4、ADAMTs-5蛋白表达低.结论 骨灵膏可能通过降低血清及滑膜中炎性细胞因子,进而阻止局部关节软骨聚蛋白多糖酶合成,从而减轻了骨关节炎软骨损伤,并且作用明显优于其拆方制剂及塞来昔布.
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冷-固联合诱导法制作骨关节炎大鼠模型及骨灵膏和其拆方制剂对模型的作用
目的 探讨骨灵膏及其拆方制剂对通过冷-固联合诱导法制作的骨关节炎(OA)大鼠模型作用的机制研究.方法 60只雌性SD大鼠随机分为骨灵膏组、骨膏组、灵膏组、塞来昔布组、模型组及正常组六组,每组10只,除正常组外,其余各组采用冷固法6周建立骨关节炎模型.造模成功后,除正常组和模型组分别给予生理盐水灌胃外,其余组分别给予骨灵膏、骨膏、灵膏及塞来昔布灌胃,给药10周后,取大鼠血清、膝关节软骨组织及滑膜.镜下观察关节软骨病理变化;X片检测关节影像学改变;ELISA检测血清TNF-a、IL-1β、透明质酸(HA)、IgM含量;TUNEL法检测关节软骨及滑膜细胞凋亡情况.结果 冷固法制作OA模型X影像学、关节肿胀情况、软骨组织病理损伤及细胞凋亡和生化代谢改变均符合OA的特征,表明造模成功;骨灵膏可以减轻OA软骨组织浅表至钙化层各层的病理损伤和下调软骨及滑膜细胞凋亡,其中骨灵膏与骨膏、灵膏比较,软骨及滑膜细胞凋亡明显下降(P＜0.01),骨灵膏及其拆方制剂骨膏组、灵膏组TNF-a、IL-1β的含量较模型组显著降低(P＜0.01);骨灵膏组HA的含量较骨膏、灵膏及塞来昔布组明显增加(P＜0.01);各组IgM的含量无明显差异.结论 冷-固联合诱导法能制作理想的OA大鼠模型,骨灵膏可能通过减轻机体炎症损伤、降低关节软骨HA的耗损、抑制关节滑膜及软骨细胞凋亡等多个途径阻止了OA关节软骨退行性变导致的关节损伤,骨灵膏的上述作用优于其拆方制剂骨膏、灵膏及塞来昔布.
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骨灵膏及其拆方制剂对OA模型大鼠适应性免疫功能的影响
目的 探讨骨灵膏及其拆方制剂对OA大鼠T淋巴细胞CD3+、CD4+、CD8+及CD80、CD86、COL-Ⅱ与OA的作用机制.方法 60只雌性SD大鼠随机分为GLG、GUG、LG、CLXB、M及NG等6组,每组10只,采用冷固法建立0A模型并给予GLG等灌胃10周,取大鼠血浆、膝关节滑膜及软骨组织；采用免疫荧光检测血浆及滑膜CD3+、CD4+、CD8+的阳性细胞率,流式细胞术检测软骨CD3+、CD4+、CD8+及CD80、CD86、Col-Ⅱ百分率.结果 M组与NG组比较能降低血浆及软骨CD3+、CD4+T淋巴细胞百分率(P＜0.01),增高滑膜CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+百分率和软骨CD80、CD86、COL-Ⅱ阳性百分率(P＜ 0.01)；GLG与M组比较能升高血浆及软骨CD3+、CD4+百分率(P＜0.01),降低软骨CD80、CD86、COL-Ⅱ阳性百分率和滑膜CD4+/CD8+比值(P＜0.01)；GLG与GUG、LG、CLXB组比较能升高血浆及软骨CD3+、CD4+百分率及CD47CD8+比值(P＜0.01).结论 GLG可能通过提高OA大鼠整体和局部关节免疫功能,抑制软骨细胞APC功能的激活和抗自身抗原的免疫反应,减轻了滑膜免疫炎症反应,保护OA软骨和滑膜,作用优于其拆方制剂及CLXB.
