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九龙藤总黄酮对过氧化氢诱导乳鼠心肌细胞氧化应激损伤的保护作用
目的 观察九龙藤总黄酮对过氧化氢(H2O2)诱导乳鼠心肌细胞氧化应激损伤的保护作用.方法分离SD大鼠乳鼠心肌细胞,培养72 h后随机分为空白对照组,模型组,九龙藤总黄酮高、中、低剂量组,舒血宁注射液组.除空白对照组外,其余各组细胞经H2O2(100μg/ml)处理.九龙藤总黄酮高、中、低剂量组给予含240、120、60μg/ml九龙藤总黄酮的培养液干预,舒血宁注射液组给予含100μg/ml舒血宁注射液的培养液,空白对照组和模型组给予普通培养基培养.干预6 h后,通过倒置显微镜观察各组细胞形态学变化,通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组细胞存活率;检测各组细胞培养液中天冬氨酸转氨酶(AST)、磷酸肌酸激酶(CPK)、乳酸脱氢酶(LDH)水平;测定各组细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)水平;通过流式细胞术测定细胞凋亡率,并通过Western blot方法检测心肌细胞中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)表达.结果与模型组比较,九龙藤总黄酮中、高剂量组心肌细胞培养液中AST[(28.8±6.1)U/ml、(24.5±5.3)U/ml比(36.2± 6.7)U/ml]、CPK[(1.8±0.4)U/ml、(1.5±0.3)U/ml 比(2.5±0.4)U/ml]、LDH[(805.2±160.9)U/L、(671.5± 128.7)U/L比(916.5±168.4)U/L]水平降低(P<0.05或P<0.01);心肌细胞中SOD[(84.8±17.4)U/mg、(95.3±18.2)U/mg比(55.7±13.1)U/mg]、CAT[(23.4±3.1)U/mg、(26.3±3.5)U/mg比(15.2±3.0)U/mg]水平升高(P<0.05 或 P<0.01),MDA[(8.1±1.7)nmol/mg、(6.8±1.5)nmol/mg 比(11.1±2.3)nmol/mg]水平降低(P<0.05或P<0.01),caspase-3[(1.64±0.16)、(1.30±0.12)比(2.06±0.25)]表达、细胞凋亡率[(24.2±5.5)%、(13.4±3.9)%比(51.2±9.1)%]显著降低(P<0.05或P<0.01);九龙藤总黄酮高剂量组细胞中 GSH-Px[(3.6±0.9)U/mg 比(2.4±0.7)U/mg]活性显著升高(P<0.05).结论 九龙藤总黄酮可有效改善 H2O2诱导氧化应激损伤乳鼠心肌细胞形态、提高细胞存活率、改善抗氧化酶活性、下调 caspase-3表达、降低细胞凋亡率,对H2O2诱导乳鼠心肌细胞氧化应激损伤具有剂量依赖性的保护作用.
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九龙藤总黄酮对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用
目的：研究九龙藤总黄酮（ BCF）对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用。方法分离出生1~3 d的大鼠乳鼠心肌细胞，培养72 h后随机分为空白对照组、缺氧/复氧模型组、九龙藤总黄酮（60、120和240μg/ml）干预组和舒血宁注射液（SXN，100μg/ml）阳性对照组，每组设8个复孔。药物干预6 h后，观察各组细胞形态学变化，通过MTT比色法测定细胞存活率；测定各组细胞培养液中谷草氨酸氨基转移酶（ AST）、磷酸肌酸激酶（ CPK）、乳酸脱氢酶（ LDH）释放量；测定各组细胞中超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和过氧化氢酶（CAT）活性以及丙二醛（MDA）含量；通过流式细胞术测定细胞凋亡率。结果与空白对照组相比，缺氧/复氧模型组心肌细胞形态明显异常、细胞存活数明显减少，培养液中AST、CPK、LDH释放量显著升高，细胞中SOD、GSH-Px、CAT活性显著降低且MDA含量显著升高，差异均具有统计学意义（P﹤0.05，P﹤0.01）。与缺氧/复氧模型组比较，九龙藤总黄酮120、240μg/ml干预组心肌细胞形态明显好转，存活细胞数明显增加，培养液中AST、CPK释放量显著减少，细胞中SOD、CAT活性显著升高且MDA含量显著降低，细胞凋亡率显著降低，并且九龙藤总黄酮240μg/ml干预组培养液中LDH释放量显著降低及细胞中GSH-Px活性显著升高，差异均具有统计学意义（P﹤0.05，P﹤0.01）。结论九龙藤总黄酮能够有效改善缺氧/复氧损伤心肌细胞形态、提高细胞存活率、改善抗氧化酶活性、抑制氧化应激损伤、并降低细胞凋亡率，提示九龙藤总黄酮对心肌细胞缺氧/复氧损伤具有剂量依赖性的保护作用。
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九龙藤总黄酮对缺氧/复氧心肌损伤的作用
目的 研究九龙藤总黄酮对缺氧/复氧乳鼠心肌细胞的影响及作用机制.方法 建立心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,给予不同剂量九龙藤总黄酮(终质量浓度分别50、100、200 mg·L-1)预处理,倒置显微镜下观察心肌细胞形态学变化;酶联免疫法测定肿瘤坏死因子活性;免疫组化方法观察Bcl-2、Bax、NF-κB蛋白的表达;Annex v-FITC/PI双染法测定心肌细胞凋亡率.结果 与模型组相比,九龙藤总黄酮预处理能减轻心肌细胞损伤,降低肿瘤坏死因子-α、诱导型一氧化氮合酶、维持内皮型一氧化氮合酶水平,上调Bcl-2、下调Bax、NF-κβ蛋白表达,抑制心肌细胞凋亡(P＜0.01或P＜0.05).结论 九龙藤总黄酮对缺氧/复氧心肌损伤具有保护作用,其机制可能与调节诱导型一氧化氮合酶、核转录因子-κβ信号通路,上调Bcl-2、下调Bax和核转录因子-κB蛋白表达,抑制心肌细胞凋亡有关.
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九龙藤总黄酮调控自噬对抗心肌缺血/再灌注损伤的实验研究
目的：研究九龙藤总黄酮( Bauhinia championii fla-vones, BCF)调控自噬抗心肌缺血/再灌注损伤的作用。方法120只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、BCF高剂量组、BCF低剂量组、自噬抑制剂(3-MA)组(n=8),采用左冠状动脉前降支结扎法制备大鼠心肌缺血/再灌注模型,以紫外分光光度法检测缺血30min、缺血/再灌注1 h及3 h时肌酸激酶同工酶( CK-MB)、诱导型一氧化氮合酶( iNOS)、总抗氧化力( T-AOC)的含量；以Western blot法检测心肌微管相关蛋白轻链3蛋白-Ⅱ( LC3-Ⅱ)、Beclin-1、雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin, mTOR)的表达。结果与模型组相比,BCF能剂量依赖性提高心肌缺血/再灌注不同时段的T-AOC,降低CK-MB及iNOS含量,下调LC3-Ⅱ、Bec-lin-1蛋白表达,上调 mTOR 蛋白表达( P <0.05或 P <0.01)；与3-MA组相比,BCF能够降低iNOS及CK-MB,提高T-AOC水平,缺血期上调LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白表达,再灌注期下调 LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白表达,缺血/再灌注期均下调mTOR蛋白表达(P<0．05)。结论自噬在心肌缺血期即发生,并随着缺血/再灌注时间延长而进一步加强；BCF预处理可促进缺血期自噬发生及抑制再灌注时自噬过表达,从而减轻心肌缺血/再灌注损伤。
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九龙藤总黄酮对垂体后叶素致大鼠急性心肌缺血的保护作用
目的 研究九龙藤总黄酮(Bauhinia championii(Benth)Benth flavones,BCF)对急性心肌缺血的作用及机制.方法 ♂ SD大鼠随机分为生理盐水、模型、阳性药维拉帕米、BCF低、中、高剂量(60、120、240 mg·kg-1)共6组.除生理盐水组外,各组大鼠舌下静脉注射垂体后叶素(pituitrin,pit)造模,观察Ⅱ导联心电图ST段和血流动力学指标、心率(HR)、左心室舒张末期压(LVEDP)、左心室内压大上升速率(+dp/dtmax)和左心室内压大下降速率(-dp/dtmax)的变化;紫外分光光度计法检测血清总抗氧化力(T-AOC)、组织Na+,K+-ATP酶、Ca2+,Mg2+-ATP酶活力;ELISA法检测肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌钙蛋白(cTnI)和肌红蛋白(MyoG)的含量.结果 与模型组相比,BCF能剂量依赖性地抑制注射pit后15 s、1 min心电图ST段抬高,减小HR、+dp/dtmax、-dp/dtmax降低和LVEDP升高的幅度,增加血清T-AOC,改善Na+,K+-ATP、Ca2+,Mg2+-ATP酶活力,减少心肌损伤标志物CK-MB、cTnI、MyoG的漏出(P<0.05或P<0.01).结论 BCF对pit所致大鼠急性心肌缺血有明显保护作用,其机制可能与改善缺血心肌舒缩功能、抗氧化、抑制钙超载、减轻心肌损伤有关.
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大孔树脂纯化九龙藤总黄酮的工艺研究
目的 探寻大孔树脂纯化九龙藤总黄酮的佳纯化工艺.方法 以静态吸附率和解吸率为考察指标,确定大孔树脂型号；以黄酮含量及回收率为指标,优选层析条件.结果 D101型大孔树脂对九龙藤黄酮的吸附性能及解析效果较好；佳纯化工艺条件为:3.5 g九龙藤总黄酮粗品,干法上样,流速5 ml·min-1,13倍柱床层体积(BV)水和12BV 20％醇洗脱除杂质,4BV 60％醇洗脱；在此工艺条件下九龙藤总黄酮含量为47.2％,回收率为78％.结论 以D101大孔吸附树脂纯化九龙藤总黄酮具有较好效果.
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九龙藤总黄酮对大鼠心肌缺血再灌注损伤后自由基代谢和细胞凋亡的影响
目的:研究九龙藤总黄酮(Bauhinia championii Benth flavones,BCF)对大鼠心肌缺血再灌注损伤后自由基代谢及细胞凋亡的影响.方法:将实验动物随机分为6组:假手术组、心肌缺血再灌注模型组、九龙藤总黄酮(30、60、120和240mg/kg)预处理组、复方丹参滴丸(135mg/kg)阳性对照组,术前1周开始灌胃给药.测定各组大鼠血清中谷草转氨酶(AST)、肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)活性、丙二醛(MDA)含量以及总抗氧化能力(T-AOC);检测心肌组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)活性以及丙二醛(MDA)含量;通过HE染色方法观察各组大鼠心肌组织病理学改变,并通过TUNEL染色观察细胞凋亡状况.结果:与模型对照组相比,九龙藤总黄酮(60、120和240mg/kg)预处理组大鼠血清中AST、CK、LDH活性显著降低,MDA含量显著升高,T-AOC显著升高;九龙藤总黄酮(60、120和240mg/kg)预处理组心肌组织中SOD、GSH-Px、CAT活性显著升高、MDA含量显著降低;心肌组织病理性改变和细胞凋亡程度均显著较轻.其中以240mg/kg组各指标变化显著.结论:九龙藤总黄酮能够有效增强抗氧化酶活性,提高自由基清除能力,改善组织病理学改变,抑制细胞凋亡,提示九龙藤总黄酮对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有剂量依赖性的保护作用.
