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基质金属蛋白酶-3在实验性腰椎间盘退变中的表达及其意义
目的 检测实验性椎间盘退变中MMP-3的表达,进一步研究椎间盘退变的发病机制.方法 建立SD大鼠腰椎间盘退变模型为实验组,正常SD大鼠为对照组,每组各16只,采用免疫组织化学、SDS-PAGE进行检测两组椎间盘组织中MMP-3的表达.结果 实验组和对照组的椎间盘组织均有MMP-3表达,实验组的MMP-3表达较对照组显著增高(P＜0.05).结论 MMP-3在腰椎间盘退变的发生和发展中起着非常重要的作用.
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SDS-PAGE电泳法对4种鲜奶蛋白质组分的分析研究
目的 采用SDS-PAGE电泳分析4种鲜奶蛋白质组分的差异.方法 将4种鲜奶在10000r/min离心30min,取上清液,冷冻干燥.冻干粉离子交换层析,洗脱速度为0.5mL/min,测定280nm处洗脱液的OD值,收集洗脱液,透析,冻干.洗脱液冻干粉进行非连续SDS-PAGE凝胶电泳,浓缩胶3.9%,分离胶为12%.结果 根据SDS-PAGE电泳图谱及查鲜奶蛋白组学表可知鲜马奶乳清电泳出了39种蛋白质,其中9种已知蛋白质分别为钙激活氯离子通道调节剂、钙离子ATP酶通道蛋白抗体、葡萄糖调节蛋白、鞘磷脂磷酸二脂酶、伸长率因子1α、β-酪蛋白(亚型2)、热休克蛋白90-α、乳铁传递蛋白和乳脂肪球-EGF因子8剪接变异体;鲜牛奶乳清电泳出了47种蛋白质,其中17种已知蛋白质分别为血清铁传递蛋白、乳铁传递蛋白、α-甘露糖苷酶、钙激活氯离子通道调节剂、钙离子ATP酶通道蛋白抗体、葡萄糖调节蛋白、乳脂肪球-EGF因子8剪接变异体、Hsc70-相互作用蛋白样蛋白、内毒素受体(LPS-受体)、膜联蛋白、Lys-63-特定去泛素化酶BRCC-36、细胞酰基甘油-3-磷酸酰基转移酶、N-乙酰多肽、果糖二磷酸醛缩酶、纤维蛋白原α链、热休克蛋白90-α和蛋白质二硫键异构酶(衣被δ亚单位);鲜驴奶乳清电泳出了42种蛋白质,其中15种已知蛋白质分别为纤维粘连蛋白、α-甘露糖苷酶、钙离子ATP酶通道蛋白抗体、纤维蛋白α链、热休克蛋白90-α、血清铁传递蛋白、葡萄糖调节蛋白、β-氨基己糖苷酶、蛋白质二硫键异构酶(衣被δ亚单位)、伸长率因子1α、乳脂肪球-EGF因子8剪接变异体、膜联蛋白、Lys-63-特定去泛素化酶BRCC-36、细胞酰基甘油-3-磷酸酰基转移酶和β酪蛋白(亚型2);鲜驼奶乳清电泳出了43种蛋白质,其中15种已知蛋白质分别为纤维粘连蛋白、α-甘露糖苷酶、热休克蛋白90-α、血清铁传递蛋白、鞘磷脂磷酸二脂酶、伸长率因子1α、乳脂肪球-EGF因子8剪接变异体、α-ATP合酶亚基假定ATP依赖RNA解旋酶、细胞酰基甘油-3-磷酸酰基转移酶、14-3-3蛋白-ε-样蛋白质、纤维蛋白原β链、蛋白质二硫键异构酶(衣被δ亚单位)、特异性伴侣1样蛋白、纤维蛋白原α链和葡萄糖调节蛋白.结论 SDS-PAGE电泳分析法对4种奶类中蛋白质的分析方法可靠,操作简单,重复性好,分辨率高.4种鲜奶中除了含有相似的蛋白质,还具有不同的功能性蛋白.
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转基因山羊羊乳中重组人乳铁蛋白性质的检定与研究
目的:检定与研究转基因山羊CLF123-1羊乳中重组人乳铁蛋白(rhLF)及其分子特性.方法:利用SDS-PAGE,West-em-blotting及Edman降解法测定分析转基因山羊羊乳中rhLF的相对分子质量、免疫学特性和Ⅳ一末端15个氨基酸残基;利用紫外分光光度法比较rhLF、天然人乳铁蛋白(hLF)与Fe3+离子结合的动力学过程,测定Fen与LF发生结合反应达到平衡状态后在279 nm和465 nm的吸收度值,Fe3+与LF的物质的量比值分别为:O:1,0.5:1,1:1,2:1,4:1.结果:rhLF的相对分子质量为(8.06±0.15)万(2次实验,6条电泳谱带计算结果);Western-blotting结果显示舢LF可特异地与兔抗人LF抗体发生特异性结合;rhLF的N-末端1-15个氨基酸残基的序列为G R R R R S V Q W X T V S Q P;rhLF和hLF与Fe3+结合特性与趋势几乎完全一致.结论:本文所研究的转基因山羊羊乳中的乳铁蛋白是与人乳铁蛋白分子特性一致的rhLF.
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相对分子质量测定作为单抗药物常规放行分析方法的可行性商榷
目的:探讨十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)作为单克隆抗体常规放行分析方法的适用性.方法:对5种国产单克隆抗体药物进行SDS-PAGE法测定相对分子质量,并与质谱法测得的精确相对分子质量进行比较.结果:SDS-PAGE法测定时,采用不同的marker和不同的拟合方程,得出的相对分子质量具有较大的差异,并且与质谱法测得的精确相对分子质量具有一定的差异.结论:运用SDS-PAGE测定相对分子质量作为单抗的常规放行分析方法值得进一步商榷,应用质谱法在前期产品开发和质量控制过程对精确相对分子质量进行跟踪检测具有更准确的特点.
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栀子蛋白质电泳指纹图谱的研究
目的:比较湖南道地药材栀子、GAP药材基地栀子和混淆品水栀子的蛋白质表达差异.方法:利用十二烷基硫酸钠一聚丙酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)技术对不同来源的栀子进行蛋白质鉴别分析.结果:各个品种的电泳指纹图谱可以互相区别,可作为栀子正品与混淆品水栀子鉴定的一种有效可行的方法.结论:电泳鉴别可为中药栀子与其混淆品鉴别的一项可靠简便检测方法.
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大蒜素对痢疾杆菌抑菌作用及其机制的初步探讨
目的：观察大蒜素对痢疾杆菌的抑菌效果，初步探讨大蒜素的抑菌机制。方法：采用 K-B 纸片法、液体稀释法检测大蒜素对痢疾杆菌的抑菌效果及小抑菌浓度（MIC）值；采用 SDS-PAGE 电泳法，观察大蒜素作用下菌体蛋白质电泳图谱的变化。结果：大蒜素对痢疾杆菌的抑菌环直径为15.3±1.676305mm，MIC 值为100ug/ml，在 SDS-PAGE 中，大蒜素作用后，痢疾杆菌的蛋白图谱有变化。结论：大蒜素对痢疾杆菌有抑菌作用，并影响菌体蛋白质的合成，初步揭示了大蒜素的作用机制。
