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推拿影响坐骨神经损伤大鼠行为学及神经营养素3、酪氨酸激酶受体C表达的研究
目的 观察推拿对坐骨神经损伤大鼠行为学、神经营养素3(neurotrophin-3,NT-3)、酪氨酸激酶受体C (tyrosine receptor kinase C,TrkC)表达的影响,研究推拿修复坐骨神经损伤的机理.方法 将大鼠分为正常组、假手术组、模型组、模型对照组、推拿组,采用大鼠坐骨神经夹持损伤法于右侧股骨中段下方夹持神经进行造模,7天后进行推拿干预,共20次.干预10次、20次后,分别通过坐骨神经功能指数(sciatic functional index,SFI)、斜板试验观察各组大鼠的行为学变化;再通过免疫组化法检测各组大鼠脊髓腹角NT-3、TrkC的表达情况,后对各组数据进行统计分析.结果 模型组和模型对照组大鼠行为学检测提示坐骨神经损伤大鼠的运动功能明显降低,在推拿干预后,斜板试验明显升高,神经功能恢复情况优于模型组和模型对照组(P ＜0.05);SFI有一定程度恢复,负值较模型组、模型对照组高,但差异无统计学意义(P＞0.05).模型组、模型对照组及推拿组脊髓NT-3、TrkC表达与正常组相比差异均有统计学意义(P＜0.05),推拿组NT-3表达与模型组相比差异也有统计学意义(P＜0.05),推拿组更高.结论 中医推拿可以改善神经损伤大鼠的行为学表现,可能是通过促进NT-3及其受体TrkC的表达,发挥抑制细胞凋亡,促神经元存活的作用,终实现促进神经功能恢复,改善其运动功能.
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pSilencer4.1-cmv-TrkC质粒对前列腺癌细胞株PC3增殖的影响
[目的]通过pSilencer4.1-cmv-TrkC siRNA干涉质粒转染下调人前列腺癌细胞系PC3中酪氨酸激酶受体C(tyrosine lcinase C,TrkC)的表达,观察TrkC在前列腺癌细胞中的作用.[方法]根据TrkC基因序列设计并合成siRNA,构建质粒.用脂质体将pSilencer/TrkC和对照空载体pSilencer转染人前列腺癌细胞系PC3,通过Western blotting检测转染细胞的TrkC表达情况,绘制细胞生长曲线,流式细胞仪检测TrkC对细胞周期及凋亡的影响.[结果]成功利用脂质体转染PC3细胞后,Western blotting 鉴定结果显示:TrkC的表达水平显著降低,细胞生长曲线及流式细胞仪检测结果显示pSilencer4.1-cmv-TrkC脂质体转染的PC3细胞出现生长抑制及凋亡增加.[结论]下调TrkC表达可以抑制前列腺癌细胞PC3增殖,TrkC可能参与了前列腺癌的发生发展过程.
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下调酪氨酸激酶受体C蛋白表达对膀胱癌细胞SCaBER的增殖抑制作用
[目的]通过检测膀胱癌细胞系中酪氨酸激酶受体C( tyrosine kinase receptor C,TrkC)中的表达水平及小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)干涉膀胱癌细胞中TrkC的表达,分析TrkC在膀胱癌中的作用.[方法]采用RT-PCR和Western blotting的方法检测人膀胱癌细胞株5 637、T24、SCaBER中TrkC的表达,根据TrkC基因序列设计并合成siRNA,构建质粒.用脂质体将pSilencer/TrkC和对照空载体pSilencer转染人膀胱癌细胞株SCaBER,通过Western blotting检测转染细胞的TrkC表达情况,绘制细胞生长曲线,克隆形成实验检测TrkC对SCaBER细胞增殖的影响的影响.[结果]RT-PCR和Western blotting结果均表明人膀胱癌细胞株5 637、T24、SCaBER中TrkC的表达水平明显高于人正常膀胱移行上皮细胞SV-HUC-1;成功利用SiRNA下调 SCaBER细胞中TrkC的表达后,细胞生长曲线及克隆形成实验结果显示SCaBER细胞出现生长抑制.[结论]TrkC在膀胱癌细胞中的表达高于正常膀胱上皮细胞,下调TrkC表达可以抑制膀胱癌细胞SCaBER增殖,TrkC可能成为膀胱癌基因治疗的新靶点.
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推拿影响坐骨神经损伤大鼠NT-3及其受体TrkC表达的研究
目的:观察推拿对坐骨神经损伤大鼠行为学、NT-3、TrkC的影响,探讨推拿促进坐骨神经损伤修复的机制.方法:采用大鼠坐骨神经夹持损伤模型,通过斜板实验、BBB评分观察正常组、假手术组、模型组、模型对照组、推拿组大鼠的行为学变化;通过免疫组化染色观察各组大鼠脊髓腹角NT-3、TrkC的表达情况,后统计比较各组差异.结果:模型组和模型对照组大鼠行为学检测提示坐骨神经损伤大鼠的运动功能明显降低,在推拿干预后,斜板试验、BBB评分明显升高,神经功能恢复情况优于模型组和模型对照组;模型组、模型对照组及推拿组NT-3、TrkC表达与正常组相比均有统计学差异,推拿组NT-3表达与模型组相比也有显著差异,推拿组更高.结论:中医推拿可以通过促进NT-3及其高亲和力受体TrkC的表达,发挥抑制细胞凋亡,促神经元存活的作用,终改善坐骨神经损伤大鼠的运动功能,促进神经功能恢复.
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脑卒中后抑郁大鼠小脑NT-3及其受体Trk-C表达变化
目的 探讨脑卒中后抑郁(Post stroke depression,PSD)大鼠小脑神经营养因子3(Neurotrophic fac-tor-3,NT-3)及其受体Trk-C的表达变化,了解神经营养因子在脑卒中后抑郁大鼠小脑中的作用.方法 根据行为学评分分数,将得分相近的52只健康成年SD大鼠随机分为四组:正常组、卒中组、抑郁组、PSD组,每组13只.脑卒中组:采用线栓法[1]建立局灶性脑缺血大鼠模型;抑郁组:采用孤养法并给予慢性不可预见的中等应激刺激(Chronic unpredictable mild stress,CUMS)造模;PSD组:采用线栓法建立局灶性脑缺血大鼠模型后再加以CUMS和孤养法造模.于造模后29 d各组取0.5 cm厚,约100 mg的小脑.采用免疫组化及RT-PCR法检测各组大鼠小脑组织中NT-3及Trk-C的免疫阳性细胞及mRNA的表达.结果 免疫组化结果显示PSD组小脑组织中NT-3免疫阳性细胞数(15.67±6.70个/视野)较正常对照组(24.11±9.17个/视野)明显减少(P<0.05),其余各组相比差异无统计学意义.RT-PCR检测结果显示各组大鼠小脑组织中均有NT-3、Trk-C mRNA的表达.PSD组NT-3表达少,与各组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 PSD大鼠小脑NT-3表达减少可能与PSD发病有关.
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神经营养因子3与酪氨酸激酶受体C在卒中后抑郁模型大鼠额前皮质的表达
目的 探讨神经营养因子3(neurotrophic factor-3,NT-3)及其受体酪氨酸激酶受体C (tyrosine kinase receptors,TrkC)mRNA及蛋白在脑卒中后抑郁(post stroke depression,PSD)模型大鼠额前皮质的表达变化.方法 将实验大鼠进行行为学评分(Open-field法),评分相近的大鼠被分为4组:正常组、抑郁组、卒中组及PSD组,每组13只.抑郁组:采用孤养法结合慢性不可预见的中等应激刺激(chronic unpredictable mild stress,CUMS)建立;卒中组:利用线栓法建立局灶性脑缺血大鼠模型;PSD组:动物建成脑缺血模型后孤养再加以CUMS方法建立PSD模型,并与正常对照组、卒中组及抑郁组作比较.于造模后第29天应用免疫组化及RT-PCR检测各组大鼠额前皮质NT-3及其高亲和力受体TrkC的免疫阳性细胞及mRNA的表达情况.结果 免疫组化实验结果发现,PSD组额前皮质NT-3免疫阳性细胞数[(10.11±2.89)个/视野]较正常对照组明显减少[(19.00±12.41)个/视野] (P<0.05),其余各组相比差异无统计学意义(P>0.05);PSD组大鼠额前皮质TrkC免疫阳性细胞数[(19.56±5.66)个/视野]较正常对照组[(25.11±3.95)个/视野]及脑卒中组[(29.67±7.38)个/视野]明显减少(P<0.05);抑郁组免疫阳性细胞数[(19.00±5.61)个/视野]也较正常对照组[(25.11±3.95)个/视野]及脑卒中组(29.67±7.38个/视野)明显减少(P<0.05);其余各组相比差异无统计学意义(P>0.05).RT-PCR检查结果显示各组大鼠额前皮质组织中均有 GAPDH、NT3和 TrkCmRNA的表达, PSD组大鼠额前皮质NT-3的表达明显低于正常对照组(P<0.05);其余各组比较差异无统计学意义(P>0.05);各组TrkCmRNA表达差异无统计学意义(P>0.05).结论 PSD大鼠额前皮质NT-3及其受体TrkC的表达减少可能与PSD发病有关.
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DCs和NSPCs共培养促进NSPCs增殖及其机制的初步研究
目的 观察体外Transwell共培养系统中树突状细胞(dendritic cells,DCs)对神经干/前体细胞(neural stem/progenitor cells,NSPCs)增殖的影响,初步探讨神经营养因子-3(neurotrophin-3,NT-3)在DCs调控NSPCs中的作用机制.方法 根据是否采用Transwell小室将DCs和NSPCs共培养分为分隔培养(DCs/NSPCs组)和混合培养(DCs+ NSPCs组),ELISA法测定DCs组、NSPCs组、DCs+ NSPCs组、DCs/NSPCs组共培养48 h上清中的NT-3的含量.为观察NT-3在DCs调控NSPCs中的作用及可能的机制,成球法检测NSPCs组、NSPCs/DCs+ K252a组、NSPCs+ DCs组、NSPCs+ NT-3组的NSPCs增殖,免疫细胞荧光法和Western blot法检测各组NSPCs表面酪氨酸激酶受体C(TrkC)的表达.结果 ELISA实验结果显示,Transwell共培养48 h上清NT-3的含量,NSPCs/DCs组较DCs组和NSPCs组明显升高(P＜0.05).镜下观察、测量结果显示NSPCs/DCs组和NSPCs+ NT-3组神经球数量增多,平均直径明显增大(P＜0.05).免疫细胞荧光和Western blot检测结果表明,NSPCs+ DCs组和NSPCs+ NT-3组中NSPCs的TrkC表达较NSPCs组和NSPCs/DCs +K252a组高(P＜0.05).结论 体外DCs与NSPCs共培养,促进NSPCs增殖、NT-3的分泌及TrkC的表达,NT-3可能是通过TrkC受体参与NSPCs增殖的调控.
