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姜黄素对大鼠视网膜缺血/再灌注损伤时内质网应激的影响
目的:探讨姜黄素对大鼠视网膜缺血/再灌注损伤(RIRI)时内质网应激(ERS)的影响.方法:选取清洁级Sprague-Dawley(SD)雄性大鼠96只,采用随机数字表法分为3组(n=32):对照组(C组)、缺血/再灌注组(I/R组)和姜黄素组(CUR组).I/R组和CUR组采用前房灌注法使眼内压升高而制备大鼠RIRI模型,缺血60 min,再灌注24 h后结束实验.于缺血前60 min时,CUR组腹腔注射姜黄素100 mg/kg,C组和I/R组腹腔注射等容量生理盐水.各组于再灌注24 h时处死8只大鼠,取视网膜组织,光镜下观察病理学改变;采用TUNEL法检测视网膜组织细胞凋亡情况并计算凋亡指数(AI).3组于再灌注24 h时处死8只大鼠,取视网膜组织,电镜下观察大鼠视网膜组织超微结构改变.3组于再灌注24 h时处死8只大鼠,取视网膜组织,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测大鼠视网膜组织中CCAAT增强子结合蛋白(C/EBP)同源蛋白(CHOP)、活化的转录因子4(ATF4)和X-盒结合蛋白-1(XBP1)mRNA表达.3组于再灌注24 h时处死8只大鼠,取视网膜组织,蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测大鼠视网膜组织中、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)及含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(caspase-3)的蛋白表达,计算Bcl-2/Bax比值.结果:与C组比较,I/R组大鼠视网膜组织XBP-1、ATF4和CHOP mRNA表达明显上调(P<0.05);与I/R组比较,CUR组大鼠视网膜组织XBP-1、ATF4和CHOP mRNA表达明显下调(P<0.05).与C组比较,I/R组大鼠视网膜组织CHOP、Bax和caspase-3蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达及Bcl-2/Bax比值均下降,与C组比较,差异均有统计学意义(P<0.05),CUR组大鼠视网膜组织CHOP、Bax和caspase-3蛋白表达下降,Bcl-2蛋白表达及Bcl-2/Bax比值均升高,与I/R组比较,差异均有统计学意义(P<0.05).与C组比较,I/R组大鼠视网膜组织出现形态结构及超微结构损伤,AI值升高(P<0.05).与I/R组比较, CUR组大鼠视网膜组织形态结构及超微结构损伤均减轻,AI值降低(P<0.05).结论:姜黄素可减轻大鼠RIRI,其机制可能与抑制ERS介导的细胞凋亡有关.
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心康冲剂对慢性心力衰竭大鼠心室重构的影响
目的 探讨心康冲剂治疗慢性心力衰竭的可能作用机制.方法 90只SD大鼠随机分为正常组10只,模型组,对照组及心康低、中、高剂量组各16只.除正常组外,其余各组通过腹腔注射注射用盐酸阿霉素1.5 mg/kg制造慢性心力衰竭大鼠模型.心康低、中、高剂量组分别给予0.5、1、2g/(kg·d)心康冲剂.对照组给予0.06g/(kg·d)芪苈强心胶囊.正常组、模型组予1.0g/(kg· d)生理盐水灌胃.各组均每日1次,连续灌服8周.观察大鼠心功能,TUNEL染色法观察心肌细胞凋亡,Masson染色法观察心肌纤维化,采用Real-time PCR法及免疫组化法检测心肌组织半胱天冬酶12 (Caspase-12)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)蛋白及mRNA表达水平. 结果 与模型组比较,心康低、中、高剂组心肌细胞凋亡和纤维化明显减少.与模型组比较,对照组及心康低、中剂量组左室舒张期内径(LVIDd)、左室收缩末期内径(LVESD)及Caspase-12、GRP78、CHOP蛋白,心康中剂量组Caspase-12、GRP78、CHOP mRNA明显下降,左室射血分数(LVEF)、左心室短轴缩短率(LVFS)及心输出量(CO)明显升高(P＜0.05);与对照组比较,心康低剂量组LVIDd、LVESD下降,LVEF及CO增大,心康中剂量组LVESD、Caspase-12表达下降,LVIDd、CHOP mRNA表达升高,心康低、中剂量组CHOP、Caspase-12 mRNA蛋白表达下降(P＜0.05). 结论 心康冲剂能下调心肌组织Caspase-12、GRP78、CHOP表达、减轻内质网应激凋亡、抗心室重构,可能是其治疗慢性心力衰竭的机制之一,以心康冲剂低、中剂量疗效更佳.
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慢肾康宁对肾间质纤维化大鼠内质网应激PERK-ATF4通路的影响
目的 探讨慢肾康宁对肾间质纤维化大鼠肾脏组织的保护作用及机制.方法 60只雄性Wistar大鼠,随机选取7只为正常组,其余53只采用2.5％腺嘌呤悬浮液灌胃建立肾间质纤维化模型,21d后将50只造模成功的大鼠随机分为模型组、氯沙坦组[10 mg/(kg·d)]、慢肾康宁低剂量组[7.5g/(kg·d)]、慢肾康宁中剂量组[15 g/(kg·d)]、慢肾康宁高剂量组[30g/(kg·d)],每组10只,分别给予相应药物灌胃,正常组和模型组以等量蒸馏水灌胃,连续30d.实验结束后,检测各组大鼠血清肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、24小时尿蛋白定量(24hMTP),估算肾小球滤过率(eGFR),HE和Masson染色观察肾组织病理变化,免疫组织化学方法检测肾组织内质网应激标志性蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78),TUNEL法检测肾小管上皮细胞凋亡水平,实时定量PCR测定肾组织GRP78、转录激活因子4(ATF4)、CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP) mRNA表达水平.结果 与模型组比较,氯沙坦组和慢肾康宁各剂量组SCr、BUN、24hMTP均显著下降(P＜0.01),eGFR上升(P＜0.01).病理观察,模型组可见肾小管上皮细胞凋亡、坏死、脱落,肾小管扩张、炎性细胞浸润,肾间质内腺嘌呤代谢产物沉积和胶原纤维增生,氯沙坦组和慢肾康宁各组较模型组病理变化轻.与模型组比较,各给药组GRP78表达水平及细胞凋亡水平均下降(P＜0.05或P＜0.01).各给药组GRP78、ATF 4、CHOP mRNA表达水平较模型组降低(P＜0.05).结论 慢肾康宁对肾间质纤维化大鼠肾脏组织内质网应激PERK-eIF2α-ATF4-CHOP通路过度表达有很好的抑制作用,具有肾脏保护功能,这可能是它减轻肾间质纤维化的重要机制之一.
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锰对新生大鼠神经细胞凋亡及葡萄糖调节蛋白78和CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白表达的影响
目的 研究不同浓度锰对大鼠神经细胞凋亡及内质网应激信号分子葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)mRNA与蛋白以及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-12(caspase-12)蛋白表达的影响.方法 以出生4～7 d的SPF级Wistar大鼠脑片为模型,分别用0(对照)、25、100、400 μmol/L锰暴露24h.检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的释放量,神经细胞凋亡率以及神经细胞内GRP78、CHOP mRNA和蛋白及caspase-12蛋白的表达.结果 与对照组比较,100和400 μ,mol/L锰暴露组培养液中LDH的释放量均较高,而各浓度锰暴露组大鼠神经细胞凋亡率均较高,差异有统计学意义(P＜O.01)；且随着锰暴露浓度的升高,培养液中LDH的释放量和大鼠神经细胞凋亡率均呈逐渐升高的趋势.与对照组比较,100和400 μmol/L锰暴露组神经细胞内GRP78mRNA及各浓度锰暴露组大鼠神经细胞内CHOP mRNA的表达均较高,而100、400 μmol/L锰暴露组神经细胞内GRP78和CHOP蛋白及各浓度锰暴露组大鼠神经细胞内caspase-12蛋白的表达也均较高,差异有统计学意义(P＜0.01)；且随着锰暴露浓度的升高,大鼠神经细胞内GRP78、CHOP mRNA和蛋白及caspase-12蛋白的表达均呈逐渐升高的趋势.结论 锰可促使大鼠神经细胞凋亡及GRP78和CHOP表达升高.
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右美托咪定对大鼠单肺通气后肺损伤中细胞凋亡及CHOP的影响
目的 评价右美托咪定对大鼠单肺通气(OLV)后肺损伤中细胞凋亡及CCAAT增强子结合蛋白(C/EBP)同源蛋白(CHOP)的影响.方法 成年雄性SD大鼠40只,随机分为四组(n=10):对照组、OLV组、生理盐水处理组(OLV+生理盐水组)、右美托咪定处理组(OLV+右美托咪定组).实验结束后处死大鼠,留取左肺组织以测定肺组织湿/干重比(W/D);光镜下观察肺脏组织的形态学改变;电镜下观察肺组织超微结构的改变;采用原位末端标记(TUNEL)法检测肺组织细胞凋亡指数(AI);采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测葡萄糖调节蛋白78 (GRP78)、CHOP mRNA和蛋白表达水平的改变.结果 与对照组和OLV+右美托咪定组比较,OLV组和OLV+生理盐水组肺组织W/D和AI明显升高(P＜0.01),GRP78、CHOP mRNA和蛋白表达均明显上调(P＜0.01).与OLV组和OLV+生理盐水组比较,OLV+右美托眯定组肺组织结构损伤明显减轻.结论 右美托咪定预处理对大鼠单肺通气时的肺脏具有保护作用,其作用机制可能与其减轻细胞凋亡、抑制CHOP有关.
关键词： CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白 细胞凋亡 肺损伤 单肺通气 右美托咪定 -
乌司他丁对肝部分切除术后小鼠远期学习记忆能力的影响
目的 观察乌司他丁(UTI)对肝部分切除术(PH)后小鼠远期学习记忆能力的影响.方法 无特定病原体(SPF)级成年雄性C57BL/6J小鼠45只,采用随机数字表法分为3组:对照组(C组)、PH组和UTI组,每组15只.UTI组小鼠术毕苏醒即刻经腹腔注射UTI 50 000 U/(kg·d),C组和PH组小鼠每日腹腔注射等量生理盐水,连续30 d.3组小鼠于末次给药后24h进行Morris水迷宫试验.学习记忆能力测试完毕后处死小鼠,留取海马组织,检测海马组织湿/干重比(W/D)和总含水量(TWC),反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Westem blot分别检测海马组织CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP) mRNA及蛋白表达,原位末端细胞凋亡检测(TUNEL)法检测海马组织细胞凋亡指数(AI).结果 与C组[(17.39 ±7.72)、(12.59 ±6.69)s;(2 122.57± 543.48)、(1 123.69±369.32) mm]比较,PH组小鼠第3、4天的逃避潜伏期[(54.48±9.69)、(56.63 ±7.74)s]及游泳距离[(4 789.48±677.67)、(4987.72 ±884.53) mm]均延长(P＜0.05),海马组织W/D(5.47 ±0.98比2.79 ±0.78)、TWC(4.43±0.97比1.79±0.72)及AI[(36.32 ±2.62)％比(2.69±0.75)％]均增加(P＜0.05),海马组织CHOP mRNA(0.92 ±0.36比0.38 ±0.08)及蛋白表达(2.79 ±0.79比1.06±0.23)均增加(P＜0.05).与PH组比较,UTI组小鼠第3、4天的逃避潜伏期[(23.56 ±7.47)s、(13.62±6.36)s]及游泳距离[(2 234.64 ±890.58) mm、(1 120.67 ±389.74) mm]均缩短(P＜0.05),海马组织W/D(2.92 ±0.64比5.47 ±0.98)、TWC(1.86±0.84比4.43 ±0.97)及AI[(13.65±1.74)％比(36.32±2.62)％]均减少(P＜0.05),海马组织CHOP mRNA(0.54 ±0.11比0.92±0.36)及蛋白表达(1.41±0.47比2.79±0.79)均降低(P＜0.05).结论 UTI可提高PH后小鼠远期学习记忆能力,其机制可能其与抑制海马组织中CHOP介导的细胞凋亡有关.
关键词： 乌司他丁 CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白 肝部分切除术 认知紊乱 术后并发症 -
褪黑素对大鼠移植肝组织 GRP-78及 CHOP 表达的影响
目的：通过检测褪黑素（MEL）对肝移植大鼠肝脏内质网应激（ERS）通路相关分子葡萄糖调节蛋白-78（GRP-78）及 CCAAT 增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）表达的影响，探讨MEL 对移植肝的作用。方法采用“磁环法”制作大鼠原位肝移植模型，雄性 SD 大鼠随机分为3组：假手术组（Sham 组）、原位肝移植组（OLT 组）、原位肝移植＋褪黑素处理组（OLT ＋MEL 组），每组各8只。术后24 h，获取血清样本及肝脏标本。检测血清丙氨酸转移酶（ALT）及天冬氨酸转移酶（AST）水平，苏木素-伊红（HE）染色观察各组肝组织病理学改变，采用聚合酶链反应和蛋白免疫印迹试验检测 GRP-78及 CHOP 的信使核糖核酸（mRNA）和蛋白表达水平。结果与 Sham 组比较，OLT 组血清 ALT、AST 显著升高（均为 P ＜0.01），肝组织损伤严重，GRP-78及 CHOP 在 mRNA和蛋白水平表达明显增加（均为 P ＜0.01）。与 OLT 组比较，OLT ＋MEL 组大鼠 ALT、AST 水平明显降低（均为 P ＜0.05），肝组织损伤减轻，GRP-78及 CHOP mRNA 和蛋白表达水平明显降低（均为 P＜0.05）。结论褪黑素能降低移植肝 ERS 相关分子 GRP-78及 CHOP 在 mRNA 和蛋白水平的表达，这可能是它减轻移植后肝脏损伤的机制之一。
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内质网应激在白蛋白诱导肾小管上皮细胞凋亡中的作用
目的 探讨内质网应激在白蛋白超负荷诱导肾小管上皮细胞凋亡中的作用和分子机制.方法 Western印迹法检测肾小管上皮细胞(HKC)内质网伴侣蛋白糖调节蛋白78(GRP78)和内质网应激蛋白CHOP(CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白,也称为GADD153)表达与人血清白蛋白(HSA)作用时间和浓度的关系.实时荧光定量PCR法检测CHOP siRNA对CHOP基因转录的抑制情况.Western印迹法检测CHOP siRNA转染后CHOP蛋白水平的变化.膜联蛋白V和碘化丙锭(Annexin V-FITC和PI)双染的流式细胞术检测白蛋白诱导HKC凋亡的变化以及CHOP siRNA对HKC凋亡的影响.结果 (1)分别以0、5、10、20 g/L白蛋白作用于HKC 24 h,GRP78、CHOP蛋白表达及细胞凋亡均随白蛋白浓度的增加而上调,各组间差异有统计学意义(P<0.01);以20 g/L白蛋白分别作用于HKC 0、6、12、24、36 h,GRP78蛋白表达在6 h即显著增加,CHOP蛋白表达及HKC凋亡则在12 h显著增加,各组间差异有统计学意义(P<0.01).(2)CHOP siRNA显著抑制白蛋白诱导的CHOP基因转录及蛋白表达(P<0.01),对白蛋白诱导的HKC凋亡有显著抑制作用(P<0.01).结论 白蛋白超负荷可诱导肾小管上皮细胞发生内质网应激,并通过上调促凋亡因子CHOP表达引起肾小管上皮细胞内质网相关的细胞凋亡,这可能是蛋白尿引起肾小管间质病变的重要机制.
关键词： 白蛋白类 内质网 细胞凋亡 CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白 肾小管上皮细胞 -
冬凌草甲素对HepG2细胞内质网应激蛋白IRE-1、PERK和CHOP的作用研究
目的 研究内质网应激对冬凌草甲素处理的肝癌细胞HepG2的作用.方法 采用特异性小干扰RNA(siRNA)转染HepG2细胞72 h抑制内质网应激蛋白RNA激活蛋白激酶样内质网激酶(PERK)、抑制物阻抗性酯酶1(IRE-1)和CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)表达后,MTT法观察40 μmol· L-1冬凌草甲素处理12h的转染细胞的细胞存活率.结果 PERK和IRE-1 siRNA转染抑制相应蛋白表达后增加冬凌草甲素诱导的HepG2细胞死亡(P＜0.05)；而抑制CHOP表达对冬凌草甲素处理的HepG2细胞存活率没有影响(P＞0.05).结论 冬凌草甲素诱导的内质网应激对HepG2细胞具有保护作用.
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同型半胱氨酸经PERK磷酸化激活CHOP-ERO1α通路介导心肌细胞凋亡的研究
目的 探讨同型半胱氨酸(Hcy)对心肌的损伤作用及其可能机制.方法 选用H9C2心肌细胞,分别用不同浓度Hcy、4-苯基丁酸(4-PBA)干预细胞.将H9C2细胞分为对照组、H400组、H400P2组,对照组使用普通培养基,H400组加入400μmol/L的Hcy,H400P2组在H400组基础上加入2 mmol/L的4-PBA.CCK-8检测细胞存活率,TUNEL染色评估细胞凋亡,免疫细胞化学检测内质网氧化还原酶1α(ERO1α)表达,Western blot检测蛋白表达差异.结果 Hcy对H9C2心肌细胞损伤呈浓度依赖性(F=2 039.958,P＜0.01).与对照组比较,H400组细胞凋亡分数及胰腺内质网激酶(PERK)、磷酸化PEPK(p-PERK)、CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、ERO1α表达均增加(P＜0.01);H400P2组细胞凋亡分数及PERK、p-PERK、CHOP、ERO1α表达均有所下降,与H400组比较均差异有统计学意义(P＜0.05).结论 Hcy通过内质网应激机制介导心肌细胞凋亡.
