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人参皂苷Rg1通过PI3K/Akt/eNOS信号通路调控异丙肾上腺素致急性心肌缺血大鼠心肌的抗氧化作用
目的:观察人参皂苷Rg1预处理对异丙肾上腺素致急性心肌缺血大鼠心肌磷酸肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(PKB/Akt)通路的影响.方法:采用异丙肾上腺素建立SD大鼠急性心肌缺血模型,将50只大鼠随机分为正常组,模型组,葛根素组,人参皂苷Rg1高、低剂量组(20,10 mg·kg-1);Moor激光血流成像系统观测各组大鼠心脏表面血流值;酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定各组大鼠血清中肌酸激酶(CK),乳酸脱氢酶(LDH),一氧化氮(NO)的水平以及心肌中超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的水平;实时荧光定量-聚合酶链式反应(Real-time PCR)法检测各组大鼠心肌内皮型一氧化氮合酶(eNOS) mRNA的表达变化;蛋白质免疫印迹(Western blot)方法检测各组大鼠心肌PI3K,Akt,p-Akt蛋白的表达变化.结果:与正常组比较,模型组大鼠心脏表面平均血流量明显下降,血清NO降低,CK,LDH升高;心肌MDA含量升高,GSH-Px含量下降,eNOS mRNA含量显著降低,PI3 K/Akt通路蛋白的表达有所降低(P ＜0.05,P＜0.01);与模型组比较,人参皂苷Rg1高、低剂量组,心肌表面平均血流有显著提升,血清NO升高,CK,LDH降低,心肌MDA含量降低,GSH-Px含量升高,eNOS mRNA表达含量升高,PI3 K/Akt通路蛋白的表达有所升高(P＜0.05,P＜0.01).结论:人参皂苷Rg1可以通过调控PI3 K-Akt-eNOS信号通路改善急性心肌缺血大鼠心脏变化防治心血管病变.
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立普妥对高糖诱导的HUVEC凋亡及PI3 K/AKT/eNOS信号通路的影响
目的 探讨立普妥对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的凋亡及对磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/内皮型一氧化氮(eNOS)信号通路的影响.方法 实验分为正常组,模型组(33.3 mol/L葡萄糖),立普妥组(33.3 mol/L葡萄糖+0.1,1,10μmol/L);MTT法检测各组HUVEC活力;倒置显微镜拍照检测各组HUVEC形态;Annexin V-FITC/PI流式双染法检测各组HUVEC凋亡;Gries法检测各组HUVEC上清NO含量;Western blot分析PI3K/AKT激活状况及eNOS的表达情况.结果 与正常组比较,高糖组中HUVEC皱缩,变圆变亮,细胞活力降低,细胞早期凋亡和晚期凋亡率显著提高,NO含量及eNOS、PI3K表达量及AKT磷酸化程度降低,差异均具有显著性(P<0.05);与模型组比较,1,10μmol/L立普妥组中HUVEC形态恢复,细胞活力上升,PI3K表达量提高,差异均具有显著性(P<0.05);0.1,1,10μmol/L立普妥组HUVEC凋亡程度下降,NO含量、eNOS表达量提高,AKT磷酸化水平上升,差异均具有显著性(P<0.05).结论 立普妥可抵抗高糖诱导的HUVEC凋亡,是通过激活PI3 K/AKT/eNOS信号通路实现的.
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硝酸甘油联合β-巯基乙醇对冠心病患者 外周血内皮祖细胞的影响
目的:观察硝酸甘油对冠心病患者外周血内皮祖细胞(EPCs)体外增殖的影响及其分子机制,并探讨β-巯基乙醇改善硝酸甘油耐药的作用途径.方法:选择冠心病患者75例,分为硝酸甘油应用组和对照组,流式细胞术检测外周血中EPCs的数量,ELISA法检测血浆中血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor-A,VEGF-A)和过氧亚硝基阴离子(ONOO-)的水平;EPCs培养实验中分别用不同浓度硝酸甘油及β-巯基乙醇进行干预,MTT法检测EPCs的活力,ELISA法检测上清液VEGF-A和ONOO-的含量,DCFH-DA探针检测细胞活性氧水平,Western blot检测贴壁细胞Akt、p-Akt、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和p-eNOS的蛋白水平.结果:与对照组相比,高浓度硝酸甘油应用组外周血EPCs显著减少,血清中ONOO-增多,VEGF-A减少.适量浓度硝酸甘油组EPCs的活力提高,上清液VEGF-A水平升高,ONOO-减少,eNOS和Akt磷酸化水平提高;高浓度硝酸甘油组EPCs活力下降,细胞ROS产生过多,上清液中VEGF-A减少,eNOS和Akt的磷酸化水平显著降低;联用β-巯基乙醇后可降低高浓度硝酸甘油组上清液中ONOO-的含量,提高p-Akt和p-eNOS水平,增强EPCs的活力.结论:硝酸甘油可以通过PI3K/Akt/eNOS信号通路影响冠心病患者EPCs的活力,联用β-巯基乙醇可通过改善内皮祖细胞内的氧化应激并激活PI3K/Akt/eNOS信号通路来改善高浓度硝酸甘油引起的耐药.
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枸杞多糖减轻过氧化氢诱导的人内皮样细胞EA.hy926氧化损伤
目的:研究枸杞多糖(LBP)对过氧化氢(H2O2)诱导人内皮样细胞EA. hy926氧化损伤的作用及机制.方法:用H2O2建立EA. hy926细胞氧化损伤模型,细胞共分为5个组:正常对照(control)组、模型(damage)组(H2O2,50 mmol/L)、LBP(100 mg/L)组、抗损伤(anti-damage)组(50 mg/L、100 mg/L和200 mg/L LBP+50 mmol/L H2O2)和LY294002(20μmol/L)组.采用CCK-8法检测细胞的活力;用Annexin V/PI双染法流式细胞术检测不同处理后EA. hy926细胞的凋亡;吖啶橙(AO)/溴乙啶( EB)染色法观察细胞凋亡的形态特征;划痕法测定细胞的迁移能力;一氧化氮(NO)试剂盒检测细胞培养上清中NO的水平;用ELISA法测定血管内皮生长因子(VEGF)的水平;Western blot检测cleaved caspase-3、Bax、Bcl-2、内皮型NO合酶(eNOS)、 p-eNOS和p-Akt的蛋白水平.结果:量效结果显示浓度为100 mg/L的LBP预处理EA.hy926细胞1h,然后加入H2O2(50mmol/L)处理24 h对减轻H2O2诱导的EA.hy926细胞损伤的作用显著.与damage组比较,LBP预处理可提高EA. hy926细胞的活力(P<0.05),减少细胞凋亡(P<0.05),并促进细胞迁移;上清液中VEGF和NO水平升高;Bcl-2/Bax比率明显升高,下调cleaved caspase-3蛋白水平,并上调eNOS和p-eNOS蛋白水平.此外,加入PI3K抑制剂LY294002后,LBP对H2O2损伤的EA. hy926细胞的保护作用减弱,表现为NO水平和p-Akt蛋白水平降低.结论:LBP能减轻H2O2对EA. hy926细胞的损伤作用,缓解H2O2诱导的凋亡,其机制与激活PI3K/Akt/eNOS信号通路密切相关.
关键词： 枸杞多糖 氧化应激 细胞活力 细胞凋亡 PI3K/Akt/eNOS信号通路 -
1-磷酸鞘氨醇受体2介导PI3K/AKT/eNOS通路抑制甲型流感病毒诱导的病毒性肺炎
目的:探讨1-磷酸鞘氨醇受体2(S1PR2)对甲型流感病毒诱导的病毒性肺炎的作用及机制.方法:采用甲型流感病毒鼠肺适应株FM1滴鼻感染野生C57BL/6小鼠和S1pr2-/-小鼠,建立甲型流感病毒性肺炎动物模型.病毒感染4和6 d时观察比较对照组(模型组的野生小鼠)、JTE-013(S1PR2高效拮抗剂)处理的小鼠及S1pr2-/-小鼠肺组织的病理改变,检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中的蛋白浓度、细胞总数及细胞因子[白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子α(TNF-α)]的表达,Western blot法检测小鼠肺组织的AKT和eNOS的磷酸化水平.结果:与模型对照组的野生鼠比较,JTE处理组和S1pr2-/-组甲型流感病毒性肺炎更加严重;BALF中的蛋白浓度,总细胞数及炎性细胞因子表达显著增加;且PI3K下游靶点AKT和eNOS磷酸化显著增高(P<0.01).结论:S1PR2通过介导PI3K/AKT/eNOS信号转导通路,调节NO生成,抑制血管通透性和炎性细胞因子释放,从而减轻甲型流感病毒诱导的病毒性肺炎.
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消渴通痹颗粒含药血清对高糖环境下EPCs PI3K/Akt/eNOS分子信号通路的影响
目的:观察消渴通痹颗粒含药血清对高糖环境下EPCs PI3K/Akt/eNOS分子信号通路的影响.方法:体外培养并鉴定大鼠骨髓EPCs,制备消渴通痹颗粒含药血清,对EPCs进行不同高糖血清或PI3K抑制剂Wortmannin及eNOS抑制剂L-NAME的干预,检测EPCs的增殖及小管形成能力,Western-blot检测Akt、p-Akt及eNOS、p-eNOS蛋白表达.结果:与对照组比较,消渴通痹颗粒含药血清能促进EPCs的增殖及小管形成,不同浓度的消渴通痹颗粒含药血清预处理后在一定程度上阻止了AKT,p-AKT,eNOS,p-e NOS水平的下降(P＜0.05).结论:消渴通痹颗粒可能通过上调PI3K/Akt/eNOS分子信号通路相关蛋白的表达水平,促进高糖环境下EPCs增值和小管形成.
