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青娥方提取物对D-半乳糖致衰老小鼠的延缓衰老作用及机制
目的:探讨青娥方提取物对D-半乳糖致衰老模型小鼠的延缓衰老作用.方法:将小鼠随机分为空白组、衰老模型组、阳性药组、青娥方提取物低、中、高剂量组.除空白组颈背部皮下注射生理盐水外,其余各组均颈背部皮下注射D-半乳糖溶液,空白组和模型组均用0.5％羧甲基纤维素钠水溶液灌胃;阳性药组维生素E(0.1 g·kg-1)及青娥方提取物低、中、高剂量组(0.4,0.8,1.6 g·kg-1)剂量的青娥方提取物的羧甲基纤维素钠水溶液灌胃6周后进行转棒仪疲劳实验;同时测定肝脏中谷胱甘肽(GSH),丙二醛(MDA),总抗氧化能力(T-AOC),一氧化氮(NO),一氧化氮合酶(NOS)等抗氧化生化指标;血清中尿素氮(BUN),乳酸脱氢酶(LDH)等抗疲劳生化指标;并采用实时定量PCR检测海马抗氧化基因锰超氧化物歧化酶(MnSOD),过氧化物酶-3(Prdx-3)mRNA的表达.结果:转棒疲劳仪行为学实验,与空白组比较,模型组小鼠在转棒停留时间明显缩短(P＜0.01).青娥方提取物各剂量组与模型组相比,均可以显著延长小鼠在转棒仪上的停留时间(P ＜0.05,P＜0.01).生化指标测定模型组血清与空白组相比,BUN,MDA,NO,NOS的含量均升高(P＜0.05),而LDH含量降低(P＜0.05);各给药组均能明显改善上述指标(P＜0.05,P＜0.01).肝组织生化指标,与空白组GSH含量及T-AOC比较模型组均显著降低(P＜0.01),MDA,NO,NOS含量均显著升高(P＜0.05,P＜0.01),而给药组较模型组相比,各指标均显著改善(P＜0.05,P＜0.01).实时定量PCR结果显示,模型组海马MnSOD mRNA表达水平较空白组降低(P＜0.05),给药组与模型组相比,海马MnSOD,Prdx-3 mRNA的表达显著提高(P ＜0.05,P＜0.01).结论:青娥方提取物能显著提高机体抗氧化能力,发挥延缓衰老和抗疲劳作用.
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青娥方对去卵巢大鼠骨组织FAK表达及骨代谢的影响
目的:研究青娥方对去卵巢大鼠骨组织FAK表达及骨代谢生化指标的影响.方法:96只3月龄雌性SD大鼠随机分为假手术组、单纯去卵巢组、骨疏康组、青娥方组.前两组灌服0.9％氯化钠溶液,后两组分别灌服骨疏康及青娥方.分别于用药4、8、12周检测大鼠腰椎FAK mRNA及蛋白含量、胫骨骨密度(BMD)、血清骨碱性磷酸酶(BALP)、酸性磷酸酶(TRAP-5b)、尿脱氧吡啶吩(DPD)、尿肌酐(Cr)等的变化.结果:用药4、8、12周,与假手术组比较,单纯去卵巢组骨FAK mRNA及蛋白表达明显升高(P＜0.01),随着时间推移逐渐越低.BMD及血TRAP-5b持续下降,血BALP呈先升高后下降态势,尿DPD/Cr持续升高.青娥方干预4、8、12周,骨FAK mRNA及蛋白表达持续下降,明显低于单纯去卵巢组(P＜0.05,P＜0.01).用药8、12周,与单纯去卵巢组比较,青娥方组血BALP、血TRAP-5b水平较之前明显改善(P＜0.05,P＜0.01);用药12周后,BMD及尿DPD/Cr明显高于单纯去卵巢组(P＜0.01),与假手术组相比无明显差异.结论:青娥方能抑制骨组织FAK的表达,提高BMD及血BALP水平,降低血TRAP-5b及尿DPD/Cr含量,降低去卵巢大鼠的骨吸收速度.
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青娥方含药血清对破骨细胞前体RAW264.7细胞FAK/Src/p130Cas通路及上清液炎症因子的影响
目的 观察青娥方含药血清对破骨细胞前体RAW 264.7细胞FA K/Sr c/p130 Cas通路相关基因蛋白表达及上清液炎症因子的影响.方法 制备青娥方含药血清和生理盐水血清,分别干预体外培养的破骨细胞前体RAW 264.7细胞.干预12h和24 h后,提取mRNA和蛋白,荧光定量PCR(qPCR)检测FAK/Src/p130Cas及下游信号关键因子CRK、C3G和RAS mRNA表达的变化,应用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测FAK/Src/p130Cas及下游信号关键因子CRK、C3G和RAS蛋白表达的变化;应用ELISA法检测细胞上清液IL-6、TNF-α、PGE2含量.结果 与同期生理盐水血清组比较,青娥方含药血清组FAK、Src、p130 Cas、CRK、C3G和RAS的RNA和蛋白表达均明显减少(P ＜0.05,P＜0.01),以FAK、Src、p130Cas下降为显著,而细胞上清液炎症因子IL-6,TNF-α和PGE2含量明显下降(P＜0.05,P＜0.01).结论 青娥方含药血清能够下调FAK/Src/p130Cas及其下游信号分子的表达,抑制RAW 264.7细胞分泌炎症因子,从而抑制RANKL+ MCSF诱导的破骨细胞分化.
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青娥方对去卵巢大鼠血清MMP-9、TRACP5b、Cath-K及骨组织形态结构的影响
目的 观察青娥方对卵巢切除大鼠血清基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP5b)、组织蛋白酶K(Cath-K)及骨组织形态结构的影响,进一步揭示青娥方防治绝经后骨质疏松症的作用机制. 方法 将SD雌性大鼠随机分为假手术组、生理盐水组、青娥方组和骨疏康组.除假手术组外,运用手术切除大鼠双侧卵巢造模,并分别灌服生理盐水(假手术组和生理盐水组)、青娥方和骨疏康,干预4、8、12周后分批处死取材,ELISA法检测血清MMP-9、TRACP5b、Cath-K及尿DPD等含量,除蛋白法检测尿Cr含量,HE染色法观察胫骨上段形态并计量. 结果 与同期假手术组比较,生理盐水组大鼠血清MMP-9、TRACP5b、Cath-K含量及DPD/Cr比值均明显提高(P＜0.01,P＜0.05);与同期生理盐水组比较,青娥方组和骨疏康组大鼠血清MMP-9、TRACP5b、Cath-K含量及DPD/Cr比值均下降,除4周的血清MMP-9含量外,均具统计学意义(P＜0.01,P＜0.05).青娥方组骨小梁数目、排列以及结构完整性均优于同期生理盐水组,Tb.Ar％在8、12周较同期生理盐水组明显提高(P＜0.01,P＜0.05). 结论 青娥方能通过减少血清中MMP-9、TRACP5b、Cath-K的含量,抑制破骨细胞的功能活性,削弱对骨基质的吸收破坏,发挥护骨强骨之功.
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青娥方对骨质疏松模型大鼠骨组织MMP-9及血清TRACP的影响
目的 研究青娥方对去卵巢骨质疏松模大鼠骨组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)含量及血清抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)活性的影响.方法 切除SD雌性大鼠双侧卵巢建立骨质疏松模型,术后12周经鉴定模型成立后,将成模大鼠随机分为青娥方组、雌激素组、生理盐水组,前2组分别灌服青娥方、戊酸雌二醇片,生理盐水组、假手术组灌服生理盐水,用药4、8、12周检测4组骨组织MMP-9mRNA、蛋白含量、血清E2含量及TRACP的活性.结果 去卵巢12周后,模鼠体内随着E2水平的下降,血清TRACP活性、骨组织MMP-9mRNA和蛋白含量明显升高,与假手术组比较差异具有统计学意义;用药4、8、12周后,2药物组血清E2水平高于生理盐水组;青娥方组血清TRACP活性、骨组织MMP-9mRNA、蛋白含量低于生理盐水组,差异有统计学意义.结论 青娥方能抑制骨组织MMP-9的合成和分泌,降低TRACP的活性,减慢骨质疏松模型大鼠的骨吸收速率.
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青娥方对卵巢切除大鼠骨组织骨桥蛋白、骨唾液蛋白及其受体整合素αvβ3表达的影响
目的:观察青娥方对去卵巢大鼠骨组织骨桥蛋白(OPN)、骨唾液蛋白(BSP)及其受体整合素αvβ3(Integrinαvβ3)表达的影响,探讨青娥方防治绝经后骨质疏松症的作用机制.方法:将120只3月龄健康SPF级雌性SD大鼠采用随机数字表法分为假手术组、生理盐水组、青娥方组、骨疏康组,每组30只.除假手术组外,切除大鼠双侧卵巢造模,分别喂服生理盐水(假手术组和生理盐水组)、青娥方和骨疏康,连续给药4、8、12周后取材.ELISA检测血清抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP5b)含量;分离左侧胫骨,制备骨组织切片,HE染色;分离L3～5,采用X线骨密度仪检测骨密度;分离L1、L2,RT-qPCR、Western Blot分别检测OPN、BSP、Itgαv、Itgβ3mRNA及蛋白的表达.结果:卵巢切除组腰椎BMD、骨小梁面积百分比均低于同期假手术组,其中生理盐水组下降幅度大,术后8、12周有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).青娥方组术后12周的腰椎BMD高于同期生理盐水组,差异有统计学意义(P＜0.01);青娥方组术后8、12周的骨小梁面积百分比均高于同期生理盐水组,差异有统计学意义(P＜0.05).在3个不同的时间段,卵巢切除组OPN、BSP、Itgαv、Itgβ3mRNA和蛋白与血清TRACP5b含量均高于假手术组,其中生理盐水组升高幅度大(P＜0.01);青娥方组5个指标含量均低于同期生理盐水组,除12周的血清TRACP5b含量外,均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).结论:①卵巢切除后促进了OPN、BSP及其受体Itgαv、Itgβ3的表达,增强破骨细胞性骨吸收,从而导致骨质疏松的发生.②青娥方能使骨组织OPN、BSP、Itgαv、Itgβ3表达下降,抑制去卵巢大鼠破骨细胞功能活性,从而减少骨质的丢失.
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青娥方调节MMP2/EGFR通路影响成骨细胞凋亡的实验研究
目的:探讨中药青娥方调节MMP2/EGFR通路影响成骨细胞凋亡的作用机制.方法:成骨细胞分为6组,A组只加入培养液.除A组外,均加入30 ng/mL的TNF-α培养液,C组再加入MMP2重组蛋白,D组再加入5％含药血清,E组再加入10％含药血清,F组再加入MMP2重组蛋白干预后5％含药血清.后测定各组凋亡率和信号蛋白表达水平.结果:B组比A组细胞凋亡数目增加显著,F组凋亡细胞比例小(仅为22.97％),而D组中处于G0-G1期的细胞少,S期的细胞多.C组中ERK2和Bad表达显著减少,差异有统计学意义(P＜0.05).D和E两组比较,EGFR含量轻微下降,ERK2含量稍有增加,而Bad含量无变化,差异均无统计学意义(P＞0.05).F组中EGFR表达显著降低,差异有统计学意义(P＜0.01);ERK2和Bad明显增加,差异有统计学意义(P＜0.01).结论:只有中药青娥丸和基质金属蛋白酶同时应用可降低EGFR-ERK2-Bad通路蛋白表达,成骨细胞失凋亡,促进成骨.
