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叶下珠复方Ⅱ号对肝癌细胞增殖和胰岛素样生长因子-1受体信号通路转录的作用
目的:观察叶下珠复方Ⅱ号(CPUⅡ)对肝癌Huh7细胞增殖以及叶下珠复方Ⅱ号对胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)信号通路转录的影响,探讨叶下珠复方Ⅱ号抗肝癌作用机制.方法:采用小分子干扰RNA技术(siRNA)转染肝癌Huh7细胞,构建抑制IGF-1R的肝癌Huh7细胞(anti-IGF-1R Huh7),选择稳定表达的抑制IGF-1R的肝癌Huh7细胞,将肝癌Huh7细胞以及抑制IGF-1R的肝癌Huh7细胞分别分为4组:空白组,叶下珠复方Ⅱ号高、低质量浓度组(3.0,1.5 g·L-1)以及5-氟尿嘧啶(5-FU)组(0.03 g·L-1),采用噻唑蓝(MTT)比色法测定药物对各组细胞增殖的影响,通过实时荧光定量PCR(Real-time PCR)以及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测IGF-1R以及其下游相关指标mRNA及蛋白表达.结果:与空白组比较,转染(SASI_Hs01_00126196及SASI_Hs01_00126196_AS)序列肝癌Huh7 IGF-1R mRNA及蛋白表达量低,选择该细胞进行实验.MTT比色实验结果表明,与空白组比较,叶下珠复方Ⅱ号能够抑制Huh7细胞以及抑制IGF-1R的肝癌Huh7细胞增殖,并且siRNA抑制IGF-1R基因表达后,叶下珠复方Ⅱ号还能继续抑制Huh 7细胞增殖,且IGF-1R,磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)和丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶3(Akt3) mRNA表达量进一步下降(P＜0.05).结论:叶下珠复方Ⅱ号能够抑制Huh7细胞增殖,作用机制可能是抑制IGF-1R及其下游mRNA转录有关.
关键词： 肝细胞癌 叶下珠复方Ⅱ号 细胞增殖 胰岛素样生长因子1受体信号通路转录 -
叶下珠复方Ⅱ号对二甲基亚硝胺诱导大鼠肝纤维化形成的抑制作用
目的:观察叶下珠复方Ⅱ号抗大鼠实验性肝纤维化的作用效果并探讨其作用机制.方法:采用二甲基亚硝胺诱导的大鼠肝纤维化模型.用高、中、低三种剂量(100g/kg,50g/kg,25g/kg)的叶下珠复方Ⅱ号水提液进行干预治疗,并与秋水仙碱进行对照,检测大鼠肝功能、肝组织羟脯胺酸(Hyp)、丙二醛(MDA)、血清透明质酸(HA)含量及肝脏病理组织学改变.结果:叶下珠复方Ⅱ号高、中、低剂量组谷草转氨酶(AST)、γ-谷氨酰转移酶(GGT)、碱性磷酸酶(ALP)、总胆红素(TBIL)和直接胆红素(DBIL)均显著低于模型组,差异均有显著性意义(P＜0.05).叶下珠复方Ⅱ号中剂量组大鼠肝组织Hyp、MDA和血清HA含量均明显低于模型组,差异均有显著性意义(P＜0.05);与秋水仙碱组比较,差异均有显著性意义(P＜0.01).叶下珠复方Ⅱ号高、中、低剂量组肝组织纤维化病变明显减轻,与模型组比较,差异均有显著性意义(P＜0.01).结论:叶下珠复方Ⅱ号对二甲基亚硝胺诱导的肝纤维化形成具有明显的抑制作用,其机制与抗脂质过氧化损伤、保护肝细胞和抑制胶原纤维合成有关.
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叶下珠复方Ⅱ号对肝星状细胞增殖和miR-122/KLF6表达的影响
目的 观察叶下珠复方Ⅱ号对肝星状细胞(HSC-T6)增殖及miR-122/KLF6表达的影响,探讨其抗肝纤维化的作用机制.方法 体外培养HSC-T6细胞,分为空白对照组、叶下珠复方Ⅱ号高剂量组(120 g/L)和低剂量组(60 g/L),采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测药物对HSC-T6细胞增殖的影响,实时荧光定量PCR法检测药物处理后HSC-T6细胞miR-122、KLF6和TGF-β1 mRNA表达的改变,Western blot法检测KLF6蛋白表达的变化.结果 叶下珠复方Ⅱ号处理HSC-T6细胞后,叶下珠复方Ⅱ号高、低剂量组对HSC-T6细胞增殖均有明显的抑制作用.叶下珠复方Ⅱ号高、低剂量组HSC-T6细胞的miR-122表达增加,尤以高剂量组作用显著,与空白对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).叶下珠复方Ⅱ号高、低剂量组KLF6 mRNA和蛋白表达均显著减少,TGF-β1 mRNA的表达明显抑制,与空白对照组比较,差异均有统计学意义(P＜ 0.01),并呈明显的剂量-效应关系.结论 叶下珠复方Ⅱ号能显著抑制HSC-T6细胞增殖,其作用机制与提高miR-122的表达、抑制其靶基因KLF6的mRNA和蛋白质表达有关.
关键词： 叶下珠复方Ⅱ号 肝纤维化 miR-122/KLF6 -
叶下珠复方Ⅱ号对裸鼠肝癌移植瘤生长的抑制作用及机制
目的：观察叶下珠复方Ⅱ号对肝癌 HepG2细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用，并探讨其作用机制。方法建立 BALB/C 裸鼠肝癌 HepG2细胞皮下移植瘤模型，随机分为模型组，叶下珠复方Ⅱ号高、中、低剂量组（17.28，8.64，4.32 g·kg-1）和氟尿嘧啶（5-Fu）组（0.025 g·kg-1），给药6周后处死裸鼠，剥离瘤组织称质量。体外观察叶下株复方Ⅱ号对 HepG2细胞增殖、集落形成、细胞周期和细胞凋亡的影响，观察药物作用后 Wnt1和β-catenin 基因 mRNA 表达的改变。结果叶下珠复方Ⅱ高、中、低剂量组对裸鼠 HepG2肝癌细胞移植瘤生长的抑制作用明显，与模型组比较，肿瘤质量均明显减轻（P <0.01），但与5-Fu 组比较，差异均无统计学意义（P >0.05）。叶下珠复方Ⅱ号体外在10 mg·mL-1以上浓度能明显抑制肝癌 HepG2细胞的增殖，呈明显的量-效关系和时-效关系；叶下珠复方Ⅱ号在2 mg·mL-1以上浓度，对 HepG2细胞集落形成呈明显的抑制作用；叶下珠复方Ⅱ号以15，20 mg·mL-1浓度作用 HepG2细胞48 h 后， G0/G1期细胞比例明显降低， S 期细胞比例显著增加，与细胞对照组比较，差异均具有统计学意义（P <0.01）；叶下珠复方Ⅱ号在10，15，20 mg·mL-1浓度，作用于 HepG2细胞48 h，细胞早期凋亡率和总凋亡率明显增加，与细胞对照组比较，差异均具有统计学意义（P <0.01）。叶下珠复方Ⅱ号高、低剂量组（20，10 mg·mL-1）作用于 HepG2细胞48 h 后， Wnt1和β-catenin 基因 mRNA 的表达量均明显低于细胞对照组（P <0.01， P <0.05）。结论叶下珠复方Ⅱ号对 BALB/C 裸鼠肝癌HepG2细胞皮下移植瘤的生长具有明显的抑制作用，作用机制与抑制 Wnt1/β-catenin 基因表达和信号通路活化，从而阻滞细胞周期、抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡有关。
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叶下珠复方Ⅱ号对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡作用
目的 探讨叶下珠复方Ⅱ号(CPU Ⅱ)对体外培养的人肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的作用.方法 采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法),比较不同浓度的叶下珠复方在不同作用时间对体外培养的HepG2细胞增殖的影响;应用流式细胞术(FCM)结合Annexin V-FITC/PI荧光双染法观察CPU Ⅱ诱导24h后人肝癌HepG2细胞的凋亡率.结果 MTT结果显示,人肝癌HepG2细胞经叶下珠复方Ⅱ号处理一定时间后,增殖比率明显下降,2.60mg/ml以上的叶下珠Ⅱ号对人肝癌HepG2细胞株的增殖有抑制作用(P＜0.01;48hP＜0.05),且呈一定的量效关系;FCM结果显示,随着叶下珠复方Ⅱ号浓度的增加(2.6、26.0、130.0mg/ml),细胞的凋亡率也逐渐增加,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 叶下珠复方Ⅱ号能够抑制人肝癌HepG2细胞生长和增殖,诱导人肝癌HepG2细胞凋亡,呈明显的量效关系.
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叶下珠复方Ⅱ号对小鼠H22肝癌移植瘤生长的抑制作用
目的 观察叶下珠复方Ⅱ号对小鼠H22肝癌移植瘤生长的抑制作用,并探讨其可能的作用机制.方法 取昆明小鼠40只,建立小鼠H22肝癌移植瘤模型,分为模型组、叶下珠复方Ⅱ号高剂量组(37.5g/kg)、低剂量组(18.75g/kg)和环磷酰胺(20mg/kg)治疗组.叶下珠复方Ⅱ号高、低剂量组均灌胃给药,环磷酰胺组采用腹腔注射,每日1次,连续8d.末次给药24h后,测定瘤体质量,计算抑瘤率；检测血清IL-2和TNF-a含量.结果 叶下珠复方Ⅱ号高、低剂量组瘤重明显低于模型组,差异均有显著性意义(P＜0.01),但与环磷酰胺组比较,差异均无显著性意义(P＞0.05).叶下珠复方Ⅱ号高、低剂量组的抑瘤率分别为67％和58％,与环磷酰胺组接近.叶下珠复方Ⅱ号高剂量组血清IL-2水平明显高于模型组(P＜0.05).叶下珠复方Ⅱ号高、低剂量组血清TNF-a水平明显低于模型组,差异有显著性意义(P＜0.05).结论 叶下珠复方Ⅱ号有较好的抑制小鼠H22肝癌移植瘤生长作用,作用机制与调节免疫,升高IL-2水平和抑制TNF-a水平有关.
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叶下珠复方Ⅱ号抗乙型肝炎病毒的体外实验研究
目的 评价叶下珠复方Ⅱ号体外抗乙型肝炎病毒(HBV)的作用.方法 观察不同浓度叶下珠复方Ⅱ号对体外培养的2.2.15细胞分泌HBsAg和HBeAg的影响. 结果 叶下珠复方Ⅱ号对2.2.15细胞的半数毒性浓度(TC50)为16.94mg/ml,对HBsAg和HBeAg的半数有效浓度(IC50)分别为7,82、7.60 ms/ml,治疗指数分别为2.17、2.23. 结论 叶下珠复方Ⅱ号对2.2.15细胞分泌HBsAg和HBeAg有较好的抑制作用.
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叶下珠复方Ⅱ号对HSC-T6增殖及TIMP-1mRNA表达的影响
目的 观察叶下珠复方Ⅱ号对肝星状细胞(HSC-T6)增殖及基质金属蛋白酶抑制因子mRNA(TIMP-1mRNA)表达的影响,探讨叶下珠复方Ⅱ号搞肝纤维化效果和作用机理.方法 体外培养HSC-T6,随机分为对照组和叶下珠复方Ⅱ号5.00、205.和1.25mg/m1组.加药后用MTT法检测各组HSC-T6增殖变化,且采用RT-PCR方法测定各组HSC-T6的TIMP-1mRNA表达.结果 叶下珠复方Ⅱ号各剂量组药物对HSC-T6的增殖有明显的抑制作用,且TIMP-1mRNA表达都低于政党对照组.结论 叶下珠复方Ⅱ号能抑制HSC-T6增殖和TIMP-1mRNA表达,从页减弱TIMP-1对基质金属蛋白酶的抑制作用,促进ECM的降解,这可能是叶下珠得方Ⅱ号搞肝纤维化的作用机制之一.
关键词： 叶下珠复方Ⅱ号 肝星状细胞 基质金属蛋白酶抑制因子-1 细胞外基质 增殖 -
叶下珠复方Ⅱ号对四氯化碳致小鼠急性肝损伤的保护作用
目的 观察叶下珠复方Ⅱ号对四氯化碳(CCl4)致小鼠急性肝损伤的保护作用,并探讨其作用机制.方法 72只昆明小鼠(KM小鼠)随机分为正常组、模型组、叶下珠复方Ⅱ号高剂量组(6.04 g/kg)、中剂量组(3.02 g/kg)、低剂量组(0.604 g/kg)和联苯双酯组(150 mg/kg),给药7d后,除正常组外,其余各组小鼠均按10 mL/kg腹腔注射0.12％ CCl4大豆油溶液,16h后取小鼠血清,检测丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性;取肝组织,观察肝组织病理改变,并检测超氧化物歧化酶(SOD)活性、还原性谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)水平变化.结果 与模型组比较,叶下珠复方Ⅱ号高、中剂量组可显著降低急性肝损伤小鼠血清ALT、AST活性(P＜0.01或P＜0.05),显著减轻肝组织病理改变,并提高肝组织SOD活性(P＜0.01或P＜0.05),降低肝组织MDA水平(P＜0.01).结论 叶下珠复方Ⅱ号对CCl4诱导的小鼠急性肝损伤有较好的保护作用,其作用机制与抗脂质过氧化损伤有关.
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叶下珠复方Ⅱ号对肝星状细胞TGF-β1及Ⅰ型胶原的影响
目的 观察叶下珠复方Ⅱ号体外对肝星状细胞(HSC-T6)TGF-β 1mRNA、Ⅰ型胶原mRNA表达及其蛋白合成的影响,进一步探讨叶下珠复方Ⅱ号抗肝纤维化的作用机制.方法 体外培养HSC-T6细胞,分为对照组、叶下珠复方Ⅱ号高剂量组(3.60mg/ml)、中剂量组(1.80mg/ml)和低剂量组(0.9mg/ml),采用MTT法检测药物对HSC-T6细胞增殖的影响,SYBR染料法实时荧光定量PCR检测药物处理后HSC-T6细胞TGF-β 1及Ⅰ型胶原mRNA的表达变化,Western Blot法检测I型胶原蛋白表达的改变.结果 叶下珠复方Ⅱ号处理HSC-T6细胞后,高、中、低各剂量组对HSC-T6细胞增殖、TGF-β 1mRNA及I型胶原合成呈现显著的抑制作用,与细胞对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05和0.01),而且随着药物浓度的增加其抑制作用明显加强.结论 叶下珠复方Ⅱ号能显著抑制HSC-T6细胞增殖、明显降低TGF-β 1mRNA、Ⅰ型胶原mRNA的表达及其蛋白合成,具有明显的抗肝纤维化作用.
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叶下珠复方Ⅱ号对H22肝癌荷瘤小鼠化疗的增效减毒作用
目的 观察叶下珠复方Ⅱ号对H22荷瘤小鼠化疗的增效减毒作用.方法 取昆明小鼠48只,建立小鼠H22肝癌移植瘤模型,随机分为6组:模型组、叶下珠复方Ⅱ号高剂量组(37.5g/kg)、低剂量组(18.75g/kg)、环磷酰胺(20mg/kg)治疗组、叶下珠复方Ⅱ号(高、低剂量)+环磷酰胺(20mg/kg)组.造模次日开始给药治疗,模型对照组用生理盐水灌胃,叶下珠复方Ⅱ号高、低剂量组灌胃给药,环磷酰胺组采用腹腔注射,联合用药组灌胃叶下珠复方Ⅱ号同时腹腔注射环磷酰胺,每日1次,连续给药8d.于末次给药后24h,检测各组小鼠抑瘤率、肝肾功能、胸腺和脾脏指数.结果 叶下珠复方Ⅱ号(高、低剂量)联合环磷酰胺组瘤重均明显低于模型对照组(P＜0.01)；叶下珠复方 Ⅱ号高、低剂量与环磷酰胺合用后,抑瘤率分别为74.3％和66.9％,均大于两药合用的理论相加效应值72.2％和64.8％.叶下珠复方Ⅱ 号高剂量联合环磷酰胺组脾指数高于环磷酰胺组(P＜0.05)、且小鼠的血清ALT、AST、CRE、UREA水平均明显环磷酰胺组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 叶下珠复方Ⅱ号对H22肝癌荷瘤小鼠的化疗具有增效和减毒的双重作用.
