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甘草苷对中波紫外线诱导人皮肤角质形成细胞凋亡的影响
目的:研究甘草苷对中波紫外线(UVB)诱导人皮肤角质形成细胞(HaCaT)凋亡的影响.方法:以不同浓度的甘草苷作用于HaCaT细胞,噻唑蓝(MTT)比色法筛选甘草苷的有效安全浓度;用30 mJ·cm-2的UVB作用于HaCaT细胞,建立光老化模型,MTT比色法检测光老化HaCaT细胞增殖率;流式细胞术检测各组细胞中活性氧自由基(ROS)含量和总凋亡率;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测光老化HaCaT细胞中半胱氨酸天冬氨酸-3(Caspase-3),半胱氨酸天冬氨酸-9(Caspase-9) mRNA表达水平;蛋白免疫印记法(Western blot)检测光老化HaCaT细胞中B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Caspase-3,Caspase-9蛋白表达量.结果:筛选出甘草苷的佳有效安全浓度为1×10-7,1 × 10-6,1×10-5mol·L-1.与空白组比较,UVB组细胞增殖率显著降低(P＜0.01),细胞中ROS含量和总凋亡率显著升高(P＜0.01),Caspase-3,Caspase-9 mRNA表达水平显著升高(P＜0.01);Bcl-2蛋白表达量显著降低(P＜0.01),Caspase-3,Caspase-9蛋白表达量显著升高(P＜0.01).与UVB组比较,1×10-7,1×10-6,1×10-5mol·L-1甘草苷+UVB组细胞增殖率显著升高(P＜0.01);细胞中ROS含量和总凋亡率显著降低(P ＜0.05,P＜0.01),Caspase-3,Caspase-9 mRNA表达水平显著降低(P＜ 0.05,P＜0.01);Bcl-2蛋白表达量显著升高(P ＜0.05,P＜0.01),Caspase-3,Caspase-9蛋白表达量显著降低(P＜0.05,P＜0.01).结论:甘草苷能通过促进抗凋亡因子Bcl-2蛋白的表达,减少促凋亡相关细胞因子Caspase-3,Caspase-9 mRNA和蛋白的表达,从而抑制UVB诱导的HaCaT细胞凋亡.
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Bcl-2和NF-κB在慢性胃炎及胃癌中的表达及临床意义
目的 探讨B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和核因子κB(NF-κB)在胃炎及胃癌患者体内的表达情况.方法 采用免疫组织化学SP法检测慢性萎缩性胃炎、慢性非萎缩性胃炎及胃癌患者胃黏膜中Bcl-2和NF-κB的表达.结果 慢性萎缩性胃炎组与慢性非萎缩性胃炎组黏膜组织细胞中Bcl-2和NF-κB的阳性率比较,差异无统计学意义(P＞0.05);胃癌组患者黏膜组织细胞中Bcl-2和NF-κB的阳性率显著高于慢性萎缩性胃炎组和慢性非萎缩性胃炎组(P＜0.05).结论 Bcl-2和NF-κB基因的表达水平与胃癌的发生、发展有密切联系.
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UVB诱导A375细胞自噬与凋亡调控机制探讨
目的 探究中波紫外线(UVB)对人表皮黑色素瘤细胞株A375细胞自噬与凋亡的诱导效应.方法 ①取对数生长期A375细胞,分别予剂量为10.0、15.0 mJ/cm2的UVB照射,于照射后3、6、9、12 h收集细胞,用单丹磺酰戊二胺染色法观察细胞自噬,用吖啶橙/溴乙锭染色法观察细胞凋亡.②予相应剂量的UVB照射10.0、15.0 mJ/cm2组A375细胞,于照射后18、24、36、48 h收集细胞,以CCK-8法检测细胞存活率.③予剂量为10.0、15.0 mJ/cm2的UVB照射A375细胞,于照射后3、6、9、12 h收集细胞;予剂量为2.5、5.0、7.5、10.0、15.0 mJ/cm2的UVB照射A375细胞,于照射后9 h收集细胞;用免疫印迹法检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Bcl-2相互作用蛋白(Beclin-1)、微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅱ的表达.上述3个实验均另设不予UVB照射(予假照射)的对照组.结果 ①剂量为10.0、15.0 mJ/cm2的UVB照射诱导的A375细胞自噬和细胞凋亡均表现为随着照射后时间的延长而增强,但在15.0 mJ/cm2 UVB照射后12 h,细胞自噬已观察到降低.②10.0、15.0 mJ/cm2组细胞活力均随照射后时间的推移而增加(P<0.05);在照射后18～48 h,10.0和15.0 mJ/cm2组细胞活力均低于对照组(P<0.05);在照射后24～48 h,15.0 mJ/cm2组细胞活力均低于10.0 mJ/cm2组(P<0.05).③10.0 mJ/cm2组细胞Beclin-1和LC3Ⅱ蛋白相对表达水平在照射后0～12 h内均随照射时间的增加而增加(P<0.05),而15.0 mJ/cm2组细胞仅在照射后0～9 h内观察到上述改变,在12 h时间点上述2个自噬相关蛋白明显下降(P<0.05);10.0和15.0 mJ/cm2组细胞Bcl-2蛋白相对表达水平在照射后3～12 h内均随照射时间的增加而下降(P<0.05),Bax蛋白相对表达水平均在照射后0～12 h内随照射时间的增加而增加(P<0.05).0.0～10.0 mJ/cm2组细胞Beclin-1和LC3Ⅱ蛋白相对表达水平,0.0～15.0 mJ/cm2组细胞Bax蛋白相对表达水平,均随照射剂量的增加而增加(P<0.05);5.0～15.0 mJ/cm2组Bcl-2蛋白相对表达水平随照射剂量的增加而下降(P<0.05).结论 剂量为10.0和15.0 mJ/cm2 UVB照射均可诱导A375细胞发生自噬和凋亡;10.0 mJ/cm2 UVB照射诱导的细胞自噬可部分抵抗UVB对凋亡的诱导而使细胞活力增强,15.0 mJ/cm2 UVB诱导的自噬不足以发挥上述作用,且以诱导凋亡为主导效应.
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脱氢表雄酮能促进体外人卵巢颗粒细胞——KGN细胞的凋亡
目的 观察脱氢表雄酮(dehydroepiandrosterone,DHEA)对体外人卵巢细胞——KGN细胞株凋亡的影响.方法 用不同剂量的DHEA(0.01μmol/L、0.1μmol/L、1μmol/L、10μmol/L)处理体外培养的KGN细胞,以不加DHEA为阴性对照组,然后分别用CCK-8法和流式细胞术检测KGN细胞的活性和凋亡情况;并通过实时荧光定量逆转录-多聚酶链反应(real-time fluorescent quantitative reverse transcriptase polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测雄激素受体(androgen receptor,AR)、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,BCL-2)和BCL-2相关X蛋白(BCL-2 associated X protein,BAX)基因mRNA的表达水平;通过蛋白免疫印迹(Western blotting)检测AR、BCL-2、BAX、细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)及磷酸化ERK(P-ERK)的表达水平.结果 与阴性对照组相比,经DHEA处理的KGN细胞的活力显著下降(P=0.000),而且随着DHEA剂量的增加,KGN细胞的凋亡率也随之提高,其中10μmol/L DHEA干预组的凋亡率与阴性对照组相比,差异具有统计学意义(P=0.019);用不同浓度DHEA处理KGN细胞后,细胞中BCL-2蛋白的表达水平随着DHEA浓度的增加逐渐降低,其中10μmol/L DHEA干预组与阴性对照组相比差异有统计学意义(P=0.007);与阴性对照组相比,0.1μmol/L和10μmol/L DHEA干预组细胞中BCL-2 mRNA的表达水平也显著降低(P=0.007,P=0.012);而细胞中AR和BAX的表达水平无显著变化(P>0.05);此外,虽然DHEA干预组KGN细胞中ERK蛋白的表达水平与阴性对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05),但P-ERK蛋白的表达水平随着DHEA浓度的增加逐渐降低,其中10μmol/L DHEA干预组细胞中P-ERK蛋白的表达水平显著降低(P=0.005).结论 DHEA能抑制KGN细胞的生长而促进其凋亡,并伴随着细胞中BCL-2蛋白和P-ERK蛋白表达水平的下降.
