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肉豆蔻-8散对心肌缺血再灌注损伤预保护作用的代谢组学分析
目的:研究心肌缺血再灌注损伤(MIRI)大鼠经肉豆蔻-8散给药后尿液中内源性代谢物的变化,探讨MIRI的发病机制以及药物预保护作用机制.方法:大鼠随机分为假手术组(0.5％羧甲基纤维素钠溶液,10 mL·kg-1),模型组(0.5％羧甲基纤维素钠溶液,10 mL·kg-1)和肉豆蔻-8散组(5.4 mg·kg-1).采用超高效液相色谱联用四级杆-静电场轨道阱高分辨质谱(UPLC-Q-Exactive-MS)技术表征3组大鼠尿液代谢物,使用SIMCA 14.1软件进行多元统计分析,筛选潜在生物标志物.结果:经正交偏小二乘判别分析(OPLS-DA),模型组与假手术组、肉豆蔻8-散组明显分离,肉豆蔻-8散组与假手术组部分区域重叠.共筛选出8个与MIRI相关的生物标志物,与氨基酸代谢、脂肪酸代谢相关.结论:肉豆蔻-8散能有效调节与MIRI模型大鼠尿液代谢有关的氨基酸代谢和脂肪酸代谢失衡,通过多通路、多途径对MIRI起到预保护作用.
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气相色谱法测定肉豆蔻-8散中的丁香酚的含量
目的:采用气相色谱法测定蒙药豆蔻八味散中丁香酚的含量.方法:采用气相色谱法,样品以正已烷超声振荡提取.结果:丁香酚在19.10～267.37ng范围内呈良好的线性关系,r=0.9999,平均回收率99.11％,RSD为0.59％,结论:本法灵敏、准确,操作简单,重复性好.
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一测多评法同时测定肉豆蔻-8散中5种成分
目的 建立一测多评法同时测定肉豆蔻-8散(肉豆蔻、木香、沉香等)中5种成分的含有量.方法 用75％甲醇提取该药物,方法为采用Apollo C18色谱柱(4.6 mm× 250 mm,5μm);流动相甲醇-0.1％磷酸,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;柱温30℃;检测波长225、254、273、281 nm.以丁香酚为内标,建立其他4种成分的相对校正因子,测定其含有量.结果 鞣花酸、丁香酚、木香烃内酯、去氢木香内酯和去氢二异丁香酚分别在0.227 0 ～1.135 2、5.272 2～26.361 0、0.5408～2.7040、0.530 4～2.652 0、0.059 0 ～0.299 5μg范围内线性关系良好(r＞0.999 0),平均加样回收率(RSD)分别为96.37％ (2.07％)、102.19％ (2.78％)、101.66％ (1.66％)、103.46％(1.17％)、98.25％ (1.98％),一测多评法所得结果与外标法接近.结论 该方法稳定可靠,可用于肉豆蔻-8散的质量控制.
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肉豆蔻-8散提取物对过氧化氢诱导心肌细胞损伤的影响
研究肉豆蔻-8散提取物对过氧化氢(H2O2)诱导乳鼠心肌细胞损伤的影响,并探讨其作用机制.分离并培养大鼠乳鼠心肌细胞,建立H2O2诱导心肌细胞损伤模型.倒置显微镜下观察肉豆蔻-8散提取物对心肌细胞形态学的影响;采用MTF法检测心肌细胞活力;使用全自动生化分析仪检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、磷酸肌酸激酶(CK)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)的含量;采用试剂盒法检测细胞中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮(NO)的含量;采用Hoechst荧光细胞核染色观察心肌细胞凋亡形态;使用流式细胞仪测定心肌细胞凋亡率.100 μmol/L H2O2作用2h能明显造成约50％心肌细胞损伤.H2O2模型组出现细胞间隙增大、细胞数减少、细胞胞浆空泡等明显损伤现象.与H2O2模型组比较,肉豆蔻-8散提取物各剂量组,心肌细胞形态不同程度好转;能明显降低H2O2损伤心肌细胞培养液中LDH、CK、AST含量;显著降低H2O2损伤心肌细胞内MDA和NO含量,并提高SOD活力,能明显抑制H2O2损伤心肌细胞凋亡.通过改善细胞生存状态、提高细胞活力、降低氧化应激损伤、抑制炎症反应、抑制细胞凋亡,肉豆蔻-8散提取物可改善H2O2诱导心肌细胞损伤状态,从而对H2O2损伤的心肌细胞起到保护作用.
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蒙药肉豆蔻-8散对实验动物心脏的保护作用研究
目的:研究蒙药肉豆蔻-8散对实验动物心脏的保护作用,为其临床应用提供实验依据.方法:以复方丹参滴丸为阳性对照(0.10 g/kg),采用呼吸耗氧法考察低、中、高剂量肉豆蔻-8散(0.75、1.50、3.00 g/kg)连续灌胃给药10 d(每天给药1次)对正常小鼠和盐酸异丙肾上腺素致急性心肌缺血缺氧模型小鼠存活时间的影响.以复方丹参滴丸为阳性对照(0.04 g/kg),考察低、中、高剂量肉豆蔻-8散(0.28、0.56、1.12 g/kg)连续灌胃给药10 d(每天给药1次)对氯仿-肾上腺素致急性心律失常模型兔心律失常潜伏期、心律失常持续期的影响,以及对垂体后叶素致急性心肌损伤模型兔心脏的T波波幅、S-T段波幅和血清中内源性物质[乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和肌酸激酶(CK)]水平的影响.各实验均设置相应的空白对照和模型对照(均给予0.5%羧甲基纤维素钠).结果:复方丹参滴丸和中、高剂量肉豆蔻-8散均能显著延长正常小鼠和急性心肌缺血缺氧模型小鼠的存活时间(P＜0.05或P＜0.01).复方丹参滴丸和高剂量肉豆蔻-8散均能显著延长兔的心律失常潜伏时间(P＜0.05),显著缩短兔的心律失常持续时间(P＜0.05).复方丹参滴丸和中剂量肉豆蔻-8散均能显著降低急性心肌损伤模型兔心脏的ΣT波增幅(P＜0.05或P＜0.01),复方丹参滴丸和中、高剂量肉豆蔻-8散均能显著降低急性心肌损伤模型兔心脏的ΣS-T段波幅(P＜0.05或P＜0.01);复方丹参滴丸和低、高剂量肉豆蔻-8散均能显著降低急性心肌损伤模型兔血清中LDH水平(P＜0.05),中、高剂量肉豆蔻-8散分别能显著降低急性心肌损伤模型兔血清中MDA、CK水平(P＜0.05),中、高剂量肉豆蔻-8散均能显著升高急性心肌损伤模型兔血清中SOD水平(P＜0.05).结论:蒙药肉豆蔻-8散对实验动物的心脏有保护作用.
