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半夏及掌叶半夏毒针晶中共性毒蛋白的研究
目的:寻找天南星科半夏属有毒中药半夏及掌叶半夏毒性物质基础毒针晶中的共有蛋白,研究刺激性相关蛋白的致炎效应.方法:采用溶液内双酶解方法将半夏与掌叶半夏毒针晶中的蛋白降解为混合肽段,采用液相色谱与串联质谱偶联分析降解后的肽段,将质谱分析数据与BIOWORKS软件搜索的NCBI绿色植物Viridiplantae蛋白库比对进行蛋白质检索分析.采用聚丙烯酰胺凝胶电泳对半夏、掌叶半夏毒针晶蛋白进行分析,同时采用胶内酶解后液相色谱与串联质谱偶联的方法,分析并鉴定约13kDa蛋白.提取分离半夏中的凝集素蛋白,并采用中性粒细胞迁移试验和测定腹腔渗出液中PGE2的含量.考察毒针晶及凝集素的炎症刺激性效应.结果:半夏及掌叶半夏毒针晶中均含约13kDa的蛋白条带,此条带经鉴定为凝集素类蛋白,且此13kDa蛋白条带为毒针晶中的主要蛋白之一,凝集素类蛋白可诱导中性粒细胞向大鼠腹腔迁移,可显著增加小鼠腹腔渗出液中PGE2的含量.结论:天南星科有毒中药半夏及掌叶半夏毒针晶蛋白中均含有凝集素类蛋白,且此类凝集素蛋白具有显著的致炎作用,是半夏与掌叶半夏毒针晶中的共性毒蛋白.
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姜辣素拮抗半夏凝集素蛋白刺激巨噬细胞所致炎症因子TNF-α释放增加、ROS过量生成及RIP3表达增高
为探索姜辣素拮抗半夏凝集素蛋白致炎作用,该研究采用ELISA法测定生姜不同提取部位对半夏凝集素蛋白所致巨噬细胞释放炎症因子TNF-α的影响;采用荧光探针测定姜辣素对半夏凝集素蛋白刺激巨噬细胞氧自由基ROS水平变化的影响;采用Western blot法研究姜辣素对半夏凝集素蛋白致巨噬细胞中细胞受体相互作用蛋白RIP3的表达水平增高的影响;扫描电镜研究姜辣素对半夏凝集素蛋白致巨噬细胞形态变化的影响.结果显示姜辣素可显著抑制半夏凝集素蛋白刺激巨噬细胞所导致炎症因子释放增加、ROS过量生成及RIP3的表达增高,扫描电镜显示姜辣素可抑制半夏凝集素蛋白导致的细胞变形坏死.生姜解半夏毒的机制可能与姜辣素抑制半夏凝集素蛋白刺激巨噬细胞导致的炎症因子释放、ROS的过量生成、RIP3的表达增高及巨噬细胞坏死相关,机体表现为抑制炎症的发生发展.
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掌叶半夏(虎掌南星)矾制前后致炎毒性比较研究
目的:探索掌叶半夏致炎毒性及白矾炮制对其致炎作用的影响.方法:自掌叶半夏鲜品中分离毒针晶及掌叶半夏凝集素蛋白;采用整体动物及细胞水平模型,以炎症介质为指标,考察掌叶半夏毒性成分毒针晶和凝集素蛋白的致炎效应,及矾制对致炎作用的影响.结果:腹腔注射掌叶半夏毒针晶混悬液可使小鼠腹腔渗出液中炎症介质PGE2,NO含量显著增加,矾制后生品及毒针晶诱导的PGE2,NO释放显著下降;掌叶半夏凝集素蛋白刺激小鼠巨噬细胞后,在一定时间内可导致剂量依赖性的炎症因子TNF-α及IL-6含量显著增加.矾制后凝集素蛋白诱导的小鼠腹腔渗出液中PGE2含量显著下降.结论:掌叶半夏的刺激性毒性在机体表现为炎症反应,其所含的毒针晶及凝集素蛋白是其毒性成分,均可导致显著的炎症介质释放.矾制可显著降低掌叶半夏毒性成分的致炎毒性.
