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平喘宁对哮喘豚鼠肺组织中GM-CSF mRNA表达的影响
目的:探讨平喘宁治疗哮喘的分子作用机理.方法:采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法半定量分析哮喘豚鼠肺组织中GM-CSF mRNA表达水平的变化.结果:哮喘模型组GM-CSF mRNA表达水平比空白对照组显著増高,P＜0.01;经平喘宁大、中、小剂量治疗后,GM-CSF mRNA表达水平减低(P＜0.01,P＜0.05).结论:平喘宁能降低哮喘豚鼠肺组织GM-CSF mRNA表达水平,发挥治疗哮喘的作用.
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平喘宁对哮喘豚鼠肺组织中嗜酸性粒细胞趋化因子mRNA表达的影响
目的:探讨平喘宁治疗哮喘的分子作用机制.方法:采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法半定量分析哮喘豚鼠肺组织嗜酸性粒细胞趋化因子(eotaxin)mRNA表达水平的变化.结果:哮喘模型组eotaxin mRNA表达水平比空白对照组增高(P＜0.001);经平喘宁大、中、小剂量治疗后,eotaxin mRNA表达水平减低(P＜0.005,P＜0.01,P＜0.05).结论:平喘宁能通过减低哮喘豚鼠肺组织eotaxin mRNA表达水平,发挥治疗哮喘的作用.
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从补肾生血药对衰老小鼠骨髓GM-CSF基因转录水平的影响探讨肾生髓的分子基础
目的：为探讨肾生髓的分子基础，阐述肾生髓的本质相关基因，我们观察了补肾生血药对衰老小鼠骨髓粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)基因转录水平的影响。方法：采用老年小鼠和D-半乳糖致衰老小鼠两种衰老肾虚动物模型，分别连续灌服补肾生血药2个月和1个月，应用半定量逆转录-聚合酶链式反应技术(RT-PCR)检测小鼠骨髓有核细胞GM-CSF基因转录水平的变化。结果：老年小鼠和D-半乳糖致衰老小鼠骨髓有核细胞GM-CSF基因转录水平明显低于青年小鼠和正常对照小鼠，给药后则可明显得到提高。结论：补肾生血药起到滋阴补肾、益髓生血作用的分子机理之一，是促进骨髓GM-CSF基因的转录，GM-CSF是肾生髓的分子基础之一，GM-CSF基因是肾生髓的本质相关基因之一。
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暴发脑膜脑炎流行的新型毒株的全基因序列
吉林省延边地区1996年6月发生无菌性脑膜脑炎流行,从病人脑脊液和粪便标本中分离到多株病毒,血清学实验证明所分离的病毒为此次无菌性脑膜脑炎流行的病因.对其中的2株病毒(Yanbian96-83csf和Yanbian96-85csf)测定了全基因核酸序列并做了比较分析.结果所测2株病毒核酸长度均为7 456bp[包括3＇端poly(A)尾],两者间仅有13个位点不同,同源性达99.8%,在进化树上位于同一分支,因此两者是同一型病毒.通过在GeneBank上检索比较,Yanbian96-83csf和所查到的肠道病毒全基因的同源性小于77%,结构区VP1同源性大多数小于67%,仅3株在83%左右;进化树分析,与其它肠道病毒相差甚远,仅与2株Echo4和1株未定型肠道病毒相近;而血清学中和试验不能判定为Echo4型.据此推断,此病毒为新基因型肠道病毒.有关该病毒结构与功能的研究正在深入进行.
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丹酚酸A对缺氧/复氧损伤条件下脑微血管内皮细胞ICAM-1表达的影响
[目的]通过对观察丹酚酸A对缺氧/复氧(H/R)损伤条件下脑微血管内皮细胞细胞间黏附因子-1(CAM-1)表达的影响,探讨丹酚酸A对缺血再灌注急性期脑保护作用机制.[方法]培养BMEC,丹酚酸A预处理20 h后制作(H/R)/模型,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测BMEC细胞间黏附因子-1 ICAM-1 mRNA的表达.以尼莫地平作为阳性对照药.[结果]模型组与空白对照组相比ICAM-1 mRNA表达明显升高(P<0.01).丹酚酸A组ICAM-1 mRNA表达低于模型组(P<0.05).[结论]丹酚酸A可降低H/R损伤条件下BMEC ICAM-1 mRNA表达的影响,提示阻抑粒细胞黏附作用是其脑保护作用机制之一.
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人冠状病毒HKU1重症肺炎病原检测及鉴定
目的 对内蒙古自治区赤峰市重症肺炎病例进行病原检测鉴定,分析pol基因的同源性并确定其病原学分类地位.方法采集10例重症肺炎患者的咽拭子样本,采用逆转录聚合酶链式反应(RT -PCR)进行流感病毒核酸检测,采用多重PCR方法进行呼吸道病毒鉴定,采用RT - PCR法特异性扩增人冠状病毒OC43、299E、NL63和HKU1的pol基因,阳性样本进行pol基因序列测定及同源性分析.结果 检出1份人冠状病毒HKU1阳性样本,RT-PCR法扩增到长度约440bp的特异性目的片段；其pol基因与人冠状病毒HKU1参比毒株的pol基因的同源性高达99.7％以上.结论1例重症肺炎患者因感染人冠状病毒HKU1而发病,其他患者的病原学鉴定有待进一步研究.
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MTA1基因表达与下咽癌颈淋巴结转移的关系
目的:探讨下咽癌组织中转移候选基因(metastasis-associated gene1,MTA1)的表达与颈淋巴结转移的关系,阐明该基因可能是下咽癌淋巴结转移的分子机制之一.方法:应用逆转录-聚合酶链式反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)检测17例下咽癌(11例伴颈淋巴结转移、6例不伴颈淋巴结转移),8例癌旁正常黏膜中MTA1mRNA的表达.结果:RT-PCR结果显示在11例下咽癌转移组的癌组织中,MTA1 mRNA表达阳性率为90.9％ (10/11);在6例不伴颈淋巴结转移的其它下咽癌组织及8例癌旁正常黏膜中MTA1 mRNA的表达率分别为33.3％ (2/6)和0％.转移组的表达率与其他2组之间差异有统计学意义(P＜0.01).结论:MTA1 mRNA的表达与下咽癌颈淋巴结转移密切相关,提示MTA1 mRNA的检测可作为下咽癌颈淋巴结转移的诊断指标.
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特异性逆转录microRNA-505的高效茎环引物的设计
目的:构建一个高效且特异性的逆转录茎环引物,以准确定量检测小鼠的miRNA-505基因,同时探讨茎环引物的结构对逆转录效率的影响.方法:规律性地改变通用茎环引物的茎部和环部的碱基结构,再进行不同的组合,利用逆转录-聚合酶链式反应(Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)技术,探寻效率高的茎环引物.结果:当固定茎部结构为14对碱基,规律性改变环部碱基个数(15,18,21),经RT-PCR检测的CT值无差异,均为28.5;当固定环部结构为21个碱基,CT值随茎部碱基对(8,11,14)规律性地延长而逐渐增大;当环部结构为21个碱基,茎部结构为8对碱基时CT值小,为26.7.结论:环部结构对茎环引物的效率无贡献;当环部结构为21个碱基,茎部结构为8对碱基时,茎环引物的效率和特异性是佳的,适用于准确检测小家鼠的miRNA-505基因.
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枸杞多糖对衰老小鼠原癌基因c-myc表达的影响
目的:探讨枸杞多糖抗衰老的分子机理.方法:采用老年小鼠和D-半乳糖致衰老小鼠两种衰老动物模型,分别连续灌服枸杞多糖2个月和1个月,应用半定量逆转录-聚合酶链式反应技术(RT-PCR)检测小鼠骨髓原癌基因c-myc表达的变化.结果:老年小鼠和D-半乳糖致衰老小鼠骨髓原癌基因c-myc表达量明显高于青年小鼠和正常对照小鼠(P＜0.001),给药后则可明显得到抑制(P＜0.05).结论:抑制原癌基因c-myc表达是枸杞多糖抗衰老分子机理之一.
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垂体特异转录因子pit-1在垂体瘤中的表达及意义的实验研究
目的检测垂体特异转录因子pit-1在垂体腺瘤中的表达,研究Pit-1与激素水平、肿瘤侵袭性的关系,以探讨Pit-1在垂体瘤发病机制中的作用.方法根据术前激素水平、临床表现及术后病理诊断确定腺瘤类型,依影像学表现、术中所见及硬膜病检结果判断对肿瘤侵袭性分级,用免疫组化和RT-PCR分别测定Pit-1蛋白和pit-1mRNA的表达.结果Pit-1在GH腺瘤、PRL腺瘤、GH/PRL混合腺瘤中均有表达,与对照组相比,中、高度表达者占此3种腺瘤的78.8%(26/33),无功能腺瘤及ACTH腺瘤中无Pit-1蛋白的表达.pit-1mRNA在全部的GH腺瘤、PRL腺瘤、GH/PRL混合腺瘤和50%(5/10)的无功能腺瘤中有表达,在ACTH腺瘤组中无表达.GH、PRL、GH/PRL混合腺瘤组间pit-1mRNA的表达量差异无显著性,此3组均显著高于无功能腺瘤组(P＜0.05).GH、PRL腺瘤组中pit-1mRNA的表达量与其各自术前的激素水平呈显著正相关.在表达pit-1mRNA的腺瘤中,侵袭性组高于非侵袭性组.结论Pit-1的表达与垂体腺瘤的表型、功能有关,与某些激素(GH、PRL)水平、肿瘤的侵袭性呈正相关,在某些类型(GH、PRL、GH/PRL)的垂体瘤发病机制中起重要作用.
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荧光半定量逆转录-聚合酶链式反应检测大鼠死后肾mRNA
目的探讨荧光半定量逆转录-聚合酶链式反应(fluorescence semi-quantative reverse transciptase-polymerase chainr eaction,RT-PCR)技术检测大鼠死后不同时间肾3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)mRNA含量变化对死亡时间(postrnortem interval,PMI)推断的应用价值.方法28只大鼠断颈处死后置于20℃温控系统内,利用荧光标记半定量RT-PCR技术检测大鼠肾GAPDH mRNA在死后48h内相对表达量的变化情况.结果在死后即刻至40h内大鼠肾均可检测出GAPDH mRNA,且其扩增产物呈规律性下降.结论荧光半定量RT-PCR技术检测大鼠死后肾GAPDH mRNA含量变化对PMI推断具有一定的应用价值.
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原发性肝癌癌旁组织生长激素受体的基因研究
目的 探讨原发性肝癌癌旁组织生长激素受体(GHR)的基因表达情况或变化.方法 采用放射配体法、半定量的逆转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)对45例原发性肝癌(HCC)的癌旁组织进行了生长激素受体(GHR)的检测,以8例正常肝组织作为对照,并随机选择12例RT-PCR阳性扩增产物直接进行DNA序列测定.结果 在蛋白表达水平,应用放射性配体法于正常肝组织与45例HCC癌旁组织中检测到单一的GH特异性结合位点(即GHR).对照组肝组织GHR的RT值为40.2932±3.5667.fmol/mg;protein,Kd为0.6167±0.1007nmol/L.HCC癌旁组织GHR的RT为33.6283±3.6218 fmol/mg.protein,Kd值为0.6319±0.1978 nmol/L,与正常肝组织相比,HCC癌旁GHR的RT降低(P<0.05),而Kd无显著性改变(P>0.05).半定量的RT-PCR法发现GHRmRNA在正常肝组织与HCC癌旁组织的表达率均为100%.GHR mRNA在正常肝组织与原发性肝癌癌旁组织的表达两者之间差异无显著性(P>0.05).结论 全部肝癌癌旁组织在蛋白与mRNA水平均表达GHR,在其受体功能未明的情况下,目前rhGH在肝癌患者中的使用应慎重,以免造成肿瘤的增殖与复发.
