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丹酚酸 A、B 及其分子药对配伍对肾纤维化过程中 CTGF 及 Par-3的干预作用
目的：观察丹酚酸 A、B 及其分子药对配伍对肾纤维化中 CTGF 及 Par-3表达的影响。方法：采用50只雄性 SPF 级SD 大鼠随机分为5组：正常组、造模组、丹酚酸 A 组、丹酚酸 B 组及丹酚酸 A ＋B 组。除正常组外，其余大鼠均造成 UUO模型。各组予相应药物治疗2周，腹主动脉采血检测大鼠 Cr、BUN；免疫荧光观察大鼠肾组织 CTGF、Par-3表达情况。结果：1）肾功能检测：模型组大鼠血清 Cr，BUN 水平显著高于正常组（P ＜0．05）。丹酚酸 A 组大鼠血清 Cr 水平明显低于模型组（P ＜0．05）；丹酚酸 A 组和丹酚酸 B 组大鼠血清 BUN 水平明显低于模型组（P ＜0．05）；各治疗组间比较，血清 Cr 和BUN 水平差异无统计学意义（P ＞0．05）。2）CTGF 免疫荧光检测：和正常组相比，模型组大鼠肾组织肾小管上皮细胞阳性细胞数目明显增多，荧光强度明显增强（＋＋＋）；经丹酚酸 A、B 及组分配伍治疗后，CTGF 荧光强度较模型组明显减弱，其中以丹酚酸 A ＋B 组减弱较为明显（±），丹酚酸 B 组次之（＋）。3）Par-3免疫荧光检测结果：模型组大鼠肾组织肾小管上皮细胞阳性细胞数目比正常组明显减少，荧光强度明显减弱（±）；经丹酚酸 A、B 及组分配伍治疗后，丹酚酸 A、B、A ＋B组 Par-3荧光强度较模型组明显增强，其中以丹酚酸 A ＋B 组增强较为明显（＋＋＋），丹酚酸 B 组次之（＋＋）。结论：经丹酚酸 A、B 及其分子药对配伍治疗后，可一定程度改善大鼠肾功能，但无统计学意义；丹酚酸组分配伍组能显著抑制大鼠肾组织 CTGF 的表达、促进 Par-3的表达，其效果优于丹酚酸 A 和丹酚酸 B 组。该机制可能与其促进 Par-3在 UUO 大鼠肾组织中的表达和减少 CTGF 的表达有关。
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超滤法测定丹酚酸A的血浆蛋白结合率
目的:建立血浆样品中丹酚酸A浓度的分析方法,并测定丹酚酸A的血浆蛋白结合率,为进一步展开丹酚酸A的代谢和药动学研究及指导临床用药提供参考.方法:采用超滤法和HPLC测定丹酚酸A在牛血清白蛋白(BSA),大鼠血浆,新西兰兔血浆和比格犬血浆中的蛋白结合率.结果:丹酚酸A在0.01～2.5 mg·L-1线性良好,标准曲线方程为Y =0.8073X+0.013 2(r =0.999 4).丹酚酸A与BSA,大鼠血浆,新西兰兔血浆和比格犬血浆在5.0,50.0,100.0 mg·L-1的含药血浆中其平均蛋白结合率分别为(99.79±0.02)％,(99.79±0.03)％,(99.73±0.06)％,(99.81±0.03)％.结论:所建立的方法灵敏度高,专属性和重复性好,操作简单,能够满足定量分析测试要求.丹酚酸A与血浆蛋白有很强的结合,且在已考察的血药浓度范围内其血浆蛋白结合率无明显浓度依赖性和种属差异性.
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HPLC同时检测丹参提取物中5种水溶性和脂溶性成分含量
目的:建立丹参提取物中丹酚酸A、丹酚酸B、紫草酸、丹参素及丹参酮ⅡA反相HPLC同步测定新方法.方法:选用Kromasil 100-5 C18(4.6 mm × 250 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-水(含0.1％甲酸)为流动相梯度洗脱,流速1 mL· min-1,检测波长285 nm.结果:丹酚酸A、丹酚酸B、紫草酸、丹参素及丹参酮ⅡA分别在进样量范围内与峰面积线性关系良好,r＞0.999 5,仪器精密度和稳定性RSD均＜2％,成分的回收率在97％ ～ 103％(n=3).测定了其5批丹参提取物含量.结论:该方法快速、准确、重复性好,可同时定量丹参的5种水溶性及脂溶性成分.
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丹酚酸A对肝癌HepG2细胞线粒体跨膜电位的影响
目的:通过研究丹酚酸A(SalA)对肝癌HepG2细胞株线粒体跨膜电位的影响,来探讨SalA抑制肝癌细胞增殖的作用机制.方法:以肝癌HepG2细胞为靶细胞,采用MTT法观察不同浓度的SalA对HepG2细胞增殖的影响；通过Hoechst和Mito-tracke双染,经Thermo Cellomics ArrayScan VTi检测SalA对HepG2细胞的线粒体跨膜电位和细胞毒性的影响.结果:SalA对HepG-2细胞增殖有抑制作用,并呈现剂量依赖性；SalA能降低HepG2细胞内线粒体跨膜电位水平,且随浓度增加降低越明显.结论:SalA具有抑制肝癌HepG2细胞增殖的作用,其作用机制可能与降低线粒体跨膜电位,通过线粒体途径触发细胞凋亡有关.
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HPLC-DAD法与UV-VIS法对丹红注射液有效成分和有效部位的质量控制研究
目的:建立同时测定丹红注射液中丹参素、原儿茶醛、咖啡酸、迷迭香酸、丹酚酸B和丹酚酸A含量的高效液相色谱-二极管阵列检测器(HPLC-DAD)方法,运用紫外-可见分光光度法(UV-VIS)检测丹红注射液中有效部位(总黄酮)的含量.方法:丹红注射液中6种成分的定量采用Eclipse XDB-C18色谱柱(4.6mm×150mm,5μm)；乙腈-0.1％磷酸水流动相；流速1.0mL/min;波长330nm、280nm；柱温30℃.有效部位以芦丁为对照品,UV-VIS法进行测定.结果:样品中6种成分良好分离,线性关系良好(R＞0.999,n=6),平均加样回收率分别为98.98％,100.86％,100.44％,98.73％,101.35％,100.17％.10批丹红注射液每1mL含6种有效成分的总量＞11.50mg；总黄酮＞9.00mg.结论:该方法操作简单,结果准确,具有较好的重复性和稳定性,可为丹红注射液的质量控制提供参考.
关键词： 丹红注射液 高效液相色谱-二极管阵列检测器 紫外-可见分光光度法 丹参素 原儿茶醛 咖啡酸 迷迭香酸 丹酚酸B 丹酚酸A 总黄酮 -
丹酚酸A不同给药途径对犬急性心肌缺血影响
丹酚酸A(salvianolic acid A,SAA)是常用中药丹参中的一种水溶性酚酸类成分,也是主要活性成分之一,研究显示具有改善心肌缺血、抗氧化、抗血栓形成等多种药理作用.然而,SAA不易通过生物膜,在胃肠道吸收时生物利用率较低.SAA静脉给药可能解决口服吸收差、起效较慢等问题.该文研究了SAA静脉注射与灌胃2种不同给药途径对犬急性心肌缺血的影响.24只犬随机分为4组,模型组、口服给药8 mg·kg-1组、静脉注射4 mg·kg-1组以及合贝爽0.5 mg·kg-1组,每组6只动物;通过结扎犬冠状动脉前降支的方法复制急性心肌缺血模型.采用心外膜电图标测心肌缺血范围及程度,定量组织学(N-BT染色法)测定心肌梗塞范围,超声多普勒血流计测定心脏冠脉血流量及心肌耗氧量,全自动生化分析仪测定血清乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)的变化.研究结果显示,丹酚酸A静脉给药及灌胃给药均明显减少NBT所示的心肌梗死/心室的比率[(13.19±2.38)％,(16.73±6.52)％,与模型组(24.35±4.89)％比较P＜0.01];口服给药明显减轻由心外膜电图标测的心肌缺血程度(∑-ST) (30～ 190 min,P＜0.05～0.01),而静脉给药起效更为迅速,在缺血10 min即可见效,10～ 190min与模型组比较均有显著差异(P＜0.05～0.01);口服与静脉给药均可减小由心外膜电图标测的心肌缺血范围(N-ST);对心肌缺血及心肌梗塞引起的血清LDH,CK活性升高,2种给药途径均有明显抑制作用,但静脉给药显示出更明显的作用效果.该研究显示,SAA口服与静脉2种给药途径均表现出较好的保护心肌的作用,与口服给药比较,SAA静脉给药减轻心肌梗死作用起效时间短、作用强度更明显.
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丹酚酸A逆转肺癌多药耐药基因MDR1相关microRNA的筛选与鉴定
通过将人肺癌A549细胞分为正常对照组和给药组,采用实时定量PCR对MDR1的表达水平进行测定.运用microR-NA芯片对给药组和对照组进行microRNA表达谱分析;采用Targetscan预测上调microRNA中与多药耐药基因MDR1相关的miRNA以及实时定量PCR的方法对筛选出的miRNA进行验证,研究丹酚酸A逆转肺癌多药耐药基因MDR1相关microRNA.实验结果表明,与对照组相比,给药组MDR1的表达水平明显下调;microRNA芯片对人肺癌A549细胞的给药组和对照组进行了miRNA表达谱分析,共筛出426个差异表达的miRNA;然后对差异表达上调的miRNA进行靶基因预测,发现有4个明显上调的miRNA与多药耐药基因MDR1相关.对4个miRNA进行实时定量PCR验证,结果与芯片一致.因此认为丹酚酸A下调肺癌多药耐药基因MDR1可能是通过影响miRNA表达进而调控靶基因,对进一步阐明中药逆转多药耐药作用机制提供了实验依据.
关键词： 丹酚酸A 多药耐药 MDR1 microRNA芯片 肺癌A549细胞 -
丹参及其主要成分保肝作用的研究进展
丹参是临床常用的中药之一,丹参的药效物质基础主要包括脂溶性的丹参酮类和水溶性的丹酚酸类.丹参具有“祛瘀止痛,活血通经,清心除烦”等传统功效.现代药理学研究表明,丹参及其主要成分具有保护心脑血管的作用.近来研究显示,丹参及其主要成分对四氯化碳、D-氨基半乳糖、醋氨酚、酒精等制备的肝损伤模型也具有明显的保护作用.该文对丹参的保肝作用及其机制进行系统总结与展望.
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高温高压下丹酚酸B,紫草酸水溶液化学变化的研究
目的:考察中药丹参中主要活性成分丹酚酸B,紫草酸在高温高压处理过程中的化学成分变化,探索其变化机理.方法:采用高温高压(120℃,0.2 MPa)条件对丹参提取物、丹酚酸B及紫草酸进行处理,研究成分的变化情况及稳定性.结果:丹酚酸B与紫草酸经高温高压处理后的主要产物为丹酚酸A;紫草酸是丹酚酸B反应的中间产物,在相同条件下比丹酚酸B更容易转化为丹酚酸A;丹酚酸A在高温高压条件下不稳定,能够继续分解为其他小分子化合物.结论:该实验为丹酚酸A的获取提供了新的制备方法.
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HPLC法测定丹酚及其滴丸中丹酚酸的含量
目的 建立测定丹酚及其滴丸中6种主要丹酚酸含量的方法.方法 采用HPLC法,Unitary C18色谱柱,乙腈-0.05％磷酸水为流动相梯度洗脱,检测波长286 nm,流速为1.1 ml ·min-1,柱温为35℃.结果 该色谱条件下,6种酚酸类成分可完全分离.丹参素、原儿茶醛、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B和丹酚酸A的线性范围分别为2.07 ～ 20.66 μg ·ml-1(r=0.9998)、2.53 ～25.30μg·rnl-1(r=0.9999)、8.12～40.60 μg·ml-1(r =0.9999)、11.24～56.20 μg·ml-1(r=0.9999)、99.60～996.00 μg·ml-1(r=0.9999)、1.00～10.02 μg ·ml-1(r=0.9998),6种成分的平均回收率为99.24％ ～ 101.55％,RSD均小于2％.结论 该测定方法准确度高,重复性好,专属性强,可同时测定丹酚及其滴丸中6种丹酚酸的含量.
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丹酚酸A抑制核苷转运并增强化疗药物的抗肿瘤作用
目的观察丹酚酸A(SAA)的抑制核苷转运活性及其抗肿瘤作用.方法用3H-TdR和3H-UR转运测定法,克隆生成测定法以及小鼠移植性肉瘤180模型.结果SAA抑制艾氏腹水癌细胞的胸苷和尿苷的转运,其IC50分别为18.1和17.1 μmol·L-1.SAA能明显增强5-FU、丝裂霉素c、MTX对KB细胞、肝癌BEL-7402细胞的细胞毒性.体内试验,SAA 200 mg·kg-1和5-FU 10 mg·kg-1单独使用的抑瘤率分别为41%和27%;SAA和5-FU联合使用的抑瘤率为63%(CDI=0.86).结论SAA有抑制肿瘤细胞核苷转运的活性,可增强5-氟尿嘧啶等药物的抗肿瘤作用,有可能用于肿瘤联合化疗.
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胎鼠神经干细胞培养方法的建立及药物对干细胞增殖的影响
目的建立神经干细胞培养模型,观察药物对其增殖能力的影响.方法建立大鼠胎脑神经干细胞的培养方法,并用MTT法和3H-胸腺嘧啶核苷参入法观察黄皮酰胺、丹酚酸A及人参皂苷Rg1等对第2代神经球细胞状态的影响.结果免疫细胞化学结果显示,培养的神经细胞具备干细胞的基本特性;MTT和液闪结果则表明,上述3种药物可不同程度地影响神经干细胞的存活率和/或增殖活性.结论本实验所建立的胚胎大鼠神经干细胞培养模型可以观察到一些有脑保护作用的药物对干细胞存活和增殖有一定影响.
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丹酚酸A通过Nrf2/HO-1途径减轻大鼠脑缺血再灌注损伤
研究丹酚酸A (SAA)减轻大鼠脑缺血再灌注损伤的机制.SD大鼠随机分组,线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞/再灌注(MCAO/R)模型,缺血1.5 h,再灌注24 h,对神经行为学缺损程度评分,TTC法测定大鼠脑梗死体积,Western blot测定脑组织胞核、胞浆Nrf2和全细胞HO-1蛋白含量.PC12细胞系制备缺糖缺氧复糖复氧(OGD/R)模型,缺糖缺氧6h,复糖复氧24 h,MTT法检测细胞存活率,免疫荧光法测定Nrf2和HO-1表达,应用Nrf2 siRNA对SAA的作用机制进行研究.MCAO/R导致脑组织出现病理性损伤,OGD/R导致PC12细胞存活率显著降低.SAA(10和20 mg·kg-1)可使脑组织神经细胞损伤明显减轻,并且SAA (0.5和5μmol·L-1)能增加PC12细胞存活率.同时SAA能够促进脑组织及PC12胞核和胞浆中Nrf2蛋白表达,核转位率升高,HO-1蛋白表达增强.SAA具有抗脑缺血再灌注损伤的作用,其机制可能与激活Nrf2/HO-1信号途径,促进Nrf2合成和核转位,从而促进下游抗氧化蛋白HO-1的表达有关.
关键词： 丹酚酸A 脑缺血再灌注 转录因子E2相关因子2 血红素氧合酶1 -
静脉注射丹酚酸A在恒河猴体内的药代动力学研究
丹酚酸A (salvianolic acid A,Sal A)是从丹参根中分离得到的具有多种药理活性的化合物.本文建立的恒河猴血浆中丹酚酸A的LC-MS测定方法可用于研究丹酚酸A在恒河猴体内的药代动力学特性,并考察了同时测定猴血浆中丹酚酸A、B和C的可行性.恒河猴静脉注射丹酚酸A 2.5、5和10 mg·kg-1后,2 min时的血药浓度(C2min)分别为(28.343±6.426)、(45.679±12.301)和(113.293±24.360) mg·L-1.药时曲线下面积(AUC0—)分别为(3.316±0.871)、(5.754±2.150)和(13.761±2.825)μg·L-1·h.本研究为丹酚酸A的临床前及临床研究提供了数据支持,也为丹酚酸A、B和C在猴或人体内的测定提供了参考.
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丹酚酸A调节高脂血症大鼠血脂水平并保护游离脂肪酸导致的内皮细胞损伤
目的:考察丹参水溶性有效成分之一的丹酚酸A对高脂饲料诱导的高脂血症大鼠血脂水平的影响,及其对游离脂肪酸损伤的内皮细胞的保护作用.方法:采用高脂饲料喂饲Spargue-Dawley大鼠1个月后,按每日0.5和1.5 mg· kg-1剂量腹腔注射给予丹酚酸A,观察丹酚酸A对血脂水平的影响.并采用游离脂肪酸损伤的细胞模型,观察丹酚酸A对内皮细胞的保护作用.结果:连续给药2周后,丹酚酸A可显著降低实验性高脂血症大鼠血中总胆固醇、低密度脂蛋白水平,并对游离脂肪酸导致的内皮细胞损伤具有明显的保护作用.结论:丹酚酸A可能在血脂调控及防治高血脂导致的内皮细胞损伤中发挥作用.
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丹酚酸A对实验性糖尿病大鼠的降糖作用及其机制初探
目的:考察丹酚酸A对实验性糖尿病大鼠的降糖、降脂作用及其可能机制.方法:采用高糖高脂膳食4周诱导大鼠胰岛素抵抗后,腹腔注射亚致病剂量链脲佐菌素制备实验性糖尿病大鼠模型,观察丹酚酸A对血糖、血脂代谢的影响及其可能的机制.结果:连续灌胃给药8周,丹酚酸A可显著降低实验性糖尿病大鼠的空腹血糖、三酰甘油、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇及游离脂肪酸含量,显著增高实验性糖尿病大鼠血清超氧化物歧化酶活力,降低模型组大鼠丙二醛含量.结论:丹酚酸A不仅对实验性糖尿病大鼠血脂具有良好的调节作用,还能改善实验性糖尿病大鼠的血糖代谢,显著降低空腹血糖.
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高效毛细管电泳法同时测定丹参饮片中5种酚酸类成分
目的 建立高效毛细管电泳法同时测定丹参饮片中迷迭香酸、原儿茶醛、丹参素、丹酚酸B、丹酚酸A含量的方法,同时考察丹参药材适宜干燥温度.方法 10 mmol·L-1硼酸-12 mmol·L-1磷酸二氢钠-10 mmol·L-1 SDS为电泳介质,未涂渍标准熔融石英毛细管(75 μm×64.5 cm,有效长度56 cm)为分离通道,分离电压为18 kV,检测波长为206 nm,毛细管温度为20℃,压力进样:5 kPa×6 s.结果 5种指标成分的浓度与峰面积的线性关系良好(r＞0.999 0)；干燥温度以100℃为宜.结论 该方法简单、准确,重复性较好,可用于丹参饮片的质量评价和控制.
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HPLC同时测定丹参及其制剂中4种酚酸类成分的含量
目的 建立同时测定丹参药材及其制剂中丹参素、原儿茶醛、丹酚酸A、丹酚酸B 4种酚酸类成分含量的RP-HPLC色谱法.方法 色谱柱:Inertsil C8-3柱;流动相:乙腈-水-甲酸(24:76:0.4);流速:1.0 mL·min-1;检测波长:285 nm.结果 在此色谱条件下4种酚酸类成分可完全分离.丹参素、原儿茶醛、丹酚酸A、丹酚酸B的线性范围分别为:8～400(r=0.999 8),4～200(r=0.999 4).4～200(r=1.000 0)和4～200 mg·L-1(r=1.000 0).4种成分在药材和制剂中的回收率均在98.5%～101.0%,RSD＜2.0%.结论 该方法简便、准确、快速,可同时测定丹参药材及其制剂中4种酚酸类成分的含量.
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丹参水溶性成分丹酚酸A对四氯化碳诱导大鼠肝纤维化的防治作用及机制
目的 探讨丹参水溶性成分丹酚酸A对四氯化碳诱导大鼠肝纤维化的防治作用及机制.方法 选取成年健康雄性SD大鼠48只,随机分为假手术组、模型组、丹酚酸A组和Wnt通道阻滞剂组(DKK-1),每组各12只.除假手术组外均注射CCl4制作大鼠肝纤维化模型.丹酚酸A组于造模8周后给予丹酚酸A 10 mg/(kg·d)腹腔注射,Wnt通道阻滞剂组(DKK-1)于造模8周后予以DKK-1和丹酚酸A 10 mg/kg腹腔注射,而假手术组和模型组均于造模8周后予以等量生理盐水腹腔注射.给药治疗6周后,处死各组实验动物,收集肝右叶中部两块肝组织进行检测,其中一块利用10％的甲醛进行固定并制备石蜡切片;另一块置于-70℃冰箱中保存备用,用于分子生物学检测.结果 经Western blot检测发现,模型组的α-SMA、TIMP-1和Collagen Ⅰ蛋白水平显著高于假手术组,而丹酚酸A组和Wnt通道阻滞剂组(DKK-1)经相应的治疗之后可以显著下调上述指标的表达水平.模型组的α-SMA、MMP-2、TIMP-1、Collagen Ⅰ和CollagenⅢmRNA表达水平显著高于假手术组,而丹酚酸A组和Wnt通道阻滞剂组(DKK-1)经相应的治疗之后可以显著下调上述指标的表达水平.模型组的Gsk3β、β-catenin表达水平显著高于假手术组,β-catenin蛋白表达水平显著低于假手术组,而丹酚酸A组和Wnt通道阻滞剂组(DKK-1)经相应的治疗之后可以显著下调Gsk3β、β-catenin的表达水平.结论 丹酚酸A可能是通过激活Wnt/β-catenin信号通路来抑制肝纤维化.
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丹酚酸A对实验性肺纤维化大鼠的保护作用研究
目的 观察丹酚酸A对博来霉素诱导的肺纤维化大鼠的保护作用及可能机制.方法 气管单次给予博来霉素注射液复制大鼠肺纤维化模型,第2天开始给予丹酚酸A,连续28天,记录体重与一般体征变化；处死大鼠,测定血清自由基、肺功能及观察组织透射电镜等情况.结果 造模后给予丹酚酸A可改善肺纤维化大鼠一般体征状况；提高血清SOD、GSH-Px活性和降低MDA含量；改善肺功能；减轻肺泡炎症,缩小肺泡间隔宽度；电镜观察发现给予肺纤维化大鼠丹酚酸A后,胶原纤维生成减少,Ⅱ型肺泡上皮细胞增生减弱.结论 丹酚酸A对博来霉素诱导的实验性肺纤维化有一定的保护作用,其机制可能与丹酚酸A抗氧化作用有关.
